葉酸和維生素B12對高同型半胱氨酸血癥大鼠血漿可溶性細胞間黏附分子－1和可溶性P－選擇素水平的影響

范云鵬 姜雅秋 張 華 (吉林大學白求恩第一臨床醫院，吉林 長春 3002)

高同型半胱氨酸血癥(Hhcy)是動脈粥樣硬化(AS)的獨立危險因子，主要是通過血管內皮損傷、氧化應激、內質網應激、干擾脂質代謝以及促炎癥因子的激活等途徑導致心血管疾病的發生〔1，2〕。sICAM-1 與 SP-選擇素在炎癥、栓塞中起重要作用，是反映血小板及內皮細胞活化的特異標志物。本實驗通過建立Hhcy大鼠心肌梗死模型，并在葉酸、維生素(Vit)B12干預下，進一步探討Hhcy與sICAM-1、SP-選擇素的關系。

1 材料與方法

1.1 動物及飼料 SD大鼠體重130～160 g，遼寧省長生生物技術有限公司，許可證號SCXK(遼)2010-0001，SPF級，遼寧省實驗動物質量合格證0002777(2011-9-9)。飼料為繁育鼠全價固體顆粒飼料，沈陽市于洪區前民動物飼料廠提供。

1.2 藥品及試劑 L-半胱氨酸(L-Cysteine)，Sigma公司(C7352)。sICAM-1、SP-選擇素、同型半胱氨酸(Hcy)等測定試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

1.3 主要儀器 RM6240多道生理信號采集系統，成都儀器廠。UV-265FW紫外分光光度計，日本光電工業株式會社。A5082酶標儀，Tecan Austria GmbH。HF328-U86深凍冰箱，北京力康生物醫療科技控股有限公司。JW-I型微型人工呼吸機，第二軍醫大學。10、200、1 000 μl微量移液器，上海榮泰生化工程有限公司。FA1004V電子天秤，上海精密科學儀器廠。

1.4 方法 取SD大鼠30只，隨機分為3組，每組10只，雌雄各半。正常對照組:腹腔注射生理鹽水5 ml·kg－1·d－1，灌胃給予生理鹽水5 ml·kg－1·d－1。Hhcy模型組:腹腔注射2%L-半胱氨酸 5 ml·kg－1·d－1，灌胃給予生理鹽水 5 ml·kg－1·d－1。葉酸 +VitB12干預組:腹腔注射2%L-半胱氨酸5 ml·kg－1·d－1，灌胃給予葉酸 2.5 mg·kg－1·d－1，VitB1225 μg·kg－1·d－1。連續給藥12 w，各組于末次給藥30 min后腹腔注射戊巴比妥鈉(45 mg/kg)，麻醉后氣管插管安裝呼吸機，開胸結扎冠狀動脈左室降支90 min后松開結扎線，于再灌注90 min后取血，分離血漿，置于－80℃冰箱保存，備檢相關指標。按試劑盒說明書進行操作。

1.5 統計學方法 所得數據均進行正態性檢驗，正態分布的統計指標用±s表示，兩組間數據對比采用t檢驗，用Minitab 15統計學軟件進行分析。

2 結果

2.1 各組血漿Hcy水平比較 三組間兩兩比較，血漿Hcy水平均有顯著差異(P＜0.01)。見表1。

2.2 各組sICAM-1、SP-選擇素水平比較 Hhcy模型組和正常對照組比較、Hhcy模型組和葉酸+Vit B12干預組比較均有顯著差異(P＜0.01)。見表1。

表1 Hcy、sICAM-1、SP-選擇素在各組中的水平(±s，n=10)

表1 Hcy、sICAM-1、SP-選擇素在各組中的水平(±s，n=10)

與正常對照組比較:1)P＜0.01;與Hhcy模型組比較:2)P＜0.01;下表同

組別 Hcy(μmol/L) sICAM-1(ng/ml)SP-選擇素(ng/ml 5.26±0.61 1.28±0.10 9.66±0.87 Hhcy模型組 19.88±5.031) 1.98±0.091) 16.11±2.831)葉酸+VitB12組 8.96±5.421)2) 1.61±0.151)2) 11.22±0.671)2))正常對照組

2.3 各組乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)水平比較 Hhcy模型組和正常對照組比較、Hhcy模型組和葉酸+VitB12干預組比較，LDH、CK水平均有顯著差異(P＜0.01)。見表2。

表2 三組LDH、CK水平比較(±s，n=10)

表2 三組LDH、CK水平比較(±s，n=10)

組別 LDH(mmol/L) CK(U/ml)5.59±0.44 1.27±0.49 Hhcy模型組 10.60±1.911) 5.78±0.651)葉酸+VitB12組 6.86±0.402) 2.47±0.492)正常對照組

3 討論

Hcy是蛋氨酸代謝的中間產物，VitB12則是蛋氨酸合成的輔酶，而葉酸是體內甲基的間接供體，兩者缺乏阻礙了蛋氨酸的再生成，導致 Hhcy〔3〕，補充葉酸和 VitB12能有效降低 Hcy水平。

sICAM-1是目前評價內皮細胞功能的敏感指標之一，當內皮細胞受到損傷被激活，循環白細胞在血管內膜聚集并黏附到血管內皮，細胞黏附分子如sICAM-1等在這一過程中起重要作用，參與了AS的發生與發展過程，是炎癥細胞向斑塊游走和浸潤的必要條件。免疫組織化學證實斑塊內皮細胞表達sICAM-1，其程度與內膜下單核細胞和T淋巴細胞密度密切相關〔4〕，抑制sICAM-1水平能減弱中性粒細胞的活性，增強冠狀動脈血管功能的恢復，縮小缺血再灌注后壞死心肌的范圍〔5〕。當受到內皮損傷、炎癥反應、缺氧、自由基、ADP等的刺激后，P-選擇素表達到細胞膜上，在多種血管活性因子sICAM-1等的共同作用下，相關黏附分子協同抵抗血流的作用，使白細胞、血小板、淋巴細胞等發生黏附、聚集，參與血小板與白細胞及血小板與內皮細胞之間的黏附和聚集，導致血栓形成〔6，7〕。本實驗發現應用葉酸、VitB12可降低Hcy水平，sICAM-1、SP-選擇素也相應降低，LDH、CK亦隨之降低，從而起到減少梗死面積、保護心肌的作用。

1 Lawrence de Koning AB，Werstuck GH，Zhou J，et al.Hyperhomocysteinemia and its role in the development of atherosclerosis〔J〕.Clin Biochem，2003;36(6):431-41.

2 Wald DS，Law M，Morris JK.Homocysteine and cardiovascular disease:evidence on causality from a meta-analysis〔J〕.BMJ，2002;325:1202-9.

3 Ueland PM，Refsum H，Stabler SP，et al.Total homocysteine in plasma or serum:methods and clinical applications〔J〕.Clin Chem，1993;39(9):1764-79.

4 Adler A，George J，Keren G.The role of cytokines secreted by T cells in the pathogenesis of angina pectoris〔J〕.Harefuah，2003;142:612-5，645.

5 O'malley T，Ludlam CA，Rilemermsa RA，et al.Early increase in levels of soluble intercellular adhesion molecule-1(sICAM-1).Potential risk factor for the acute coronary syndromes〔J〕.Eur Heart J，2001;22(14):1226-34.

6 Mitsios JV，Papathanasiou AI，Rodis FI，et al.Atorvastatin does not affect the antiplatelet potency of clopidogrel when it is administered concomitantly for 5 weeks in patients with acute coronary syndromes〔J〕.Circulation，2004;109(11):1335-8.

7 Yip HK，Chang LT，Sun CK，et al.Platelet activity is a biomarker of cardiac necrosis and predictive of untoward clinical outcomes in patients with acute myocardial infarction undergoing primary coronary stending〔J〕.Circ J，2006;70(1):31-6.