非小細(xì)胞肺癌中MMP－14和VEGF－D表達(dá)關(guān)系及對(duì)淋巴管生成的作用

王 虎 郝安林 王衛(wèi)杰 (安陽市腫瘤醫(yī)院胸二科，河南 安陽 455000)

淋巴管生成的影響因素對(duì)惡性腫瘤進(jìn)展有重要作用〔1〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-14是MMP家族的重要成員，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用強(qiáng)，近來相關(guān)研究認(rèn)為其表達(dá)與脈管生成有關(guān)〔2〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-D是經(jīng)典的淋巴管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，可以促進(jìn)腫瘤中淋巴管生成，使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴道的途徑更直接〔3〕。D2-40是最特異的淋巴管內(nèi)皮標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)探討非小細(xì)胞肺癌患者M(jìn)MP-14和VEGF-D對(duì)D2-40陽性的微淋巴管密度(MLVD)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 2010年1月至2011年12月我院非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后的標(biāo)本87例作為觀察組，納入均符合WHO關(guān)于非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并由兩位病理醫(yī)師再次閱片證實(shí)。其中男性47例，女性40例，年齡55～78(平均62.3)歲，其中鱗癌41例，腺癌46例。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。收集距腫瘤＞5 cm的切端正常的肺組織60例作為對(duì)照組，男、女各30例，年齡56～79(平均62.1)歲。兩組在一般臨床特征的比較中，無明顯差別，具有可比性。

1.2 MMP-14、VEGF-D和D2-40蛋白的檢測(cè)方法 實(shí)驗(yàn)用MMP-14、VEGF-D和D2-40抗體均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。檢測(cè)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色采用S-P法，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟操作，并均由同一病理主管技師完成，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 MMP-14、VEGF-D和D2-40結(jié)果的判讀標(biāo)準(zhǔn) MMP-14和VEGF-D蛋白的陽性部位主要定位于細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)中染成棕黃色的顆粒為陽性表達(dá)，按陽性細(xì)胞的百分比計(jì)算陽性率。以陽性細(xì)胞≥25%為陽性，以陽性細(xì)胞＜25%為陰性。MLVD的計(jì)數(shù)方法:先在低倍鏡(100×)下觀察腫瘤細(xì)胞或正常肺上皮細(xì)胞染色的最典型區(qū)，然后在高倍鏡(400×)下計(jì)數(shù)，以陽性的內(nèi)皮細(xì)胞簇或陽性的小脈管視作1個(gè)微淋巴管。每例計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理措施 應(yīng)用SAS統(tǒng)計(jì)軟件，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中MMP-14、VEGF-D和MLVD表達(dá)的比較 觀察組中MMP-14和VEGF-D蛋白表達(dá)的陽性率明顯高于對(duì)照組(P均＜0.0 001)，觀察組中MLVD的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組不同臨床特征中MMP-14、VEGF-D和MLVD的表達(dá) MMP-14、VEGF-D和MLVD與腫瘤體積、胸膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期均密切相關(guān)，見表2。

2.3 觀察組中MMP-14、VEGF-D和MLVD的相關(guān)性分析MMP-14和 VEGF-D(r=0.45，P=0.032 4)、MMP-14 和 MLVD(r=0.47，P=0.023 1)、VEGF-D 和 MLVD(r=0.42，P=0.018 7)的表達(dá)均呈正相關(guān)性。

表1 兩組中MMP-14、VEGF-D陽性表達(dá)和MLVD水平的比較

表2 觀察組中MMP-14、VEGF-D陽性表達(dá)和MLVD在不同臨床病理特征中的比較

3 討論

非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)移方式以淋巴道轉(zhuǎn)移最常見，也是預(yù)后不良的重要指標(biāo)。D2-40最初是從胎兒睪丸的生殖細(xì)胞中提取和分離出來的唾液酸糖蛋白，比VEGFR3和Podoplanin等抗體對(duì)新生淋巴管的選擇性強(qiáng)〔4〕。VEGF-D被認(rèn)為是淋巴管生成的促進(jìn)因子，與VEGF-C有較多的同源性，對(duì)淋巴管生成作用明顯，同時(shí)其高表達(dá)時(shí)可能提示腫瘤患者的預(yù)后不良〔5〕。當(dāng)MMP-14發(fā)揮作用時(shí)能夠在細(xì)胞的表面對(duì)家族的其他成員，如MMP-2等進(jìn)行有效激活，激活后的MMP-2又可以引起MMP-14的分泌增多，使組織和血清中MMP-14表達(dá)明顯增高，形成環(huán)式循環(huán)〔6，7〕。MMP-14大量生成后發(fā)揮對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用。近年人們發(fā)現(xiàn)MMP-14在降解細(xì)胞外基質(zhì)的同時(shí)，可以促進(jìn)腫瘤新生脈管的增生和繁殖〔8，9〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示 MMP-14、VEGF-D和D2-40均參與了腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤和侵襲。由于以上因素均為判斷腫瘤生物學(xué)行為和預(yù)后的重要指標(biāo)，因此聯(lián)合檢測(cè)三種蛋白的表達(dá)可能為判斷預(yù)后提供支持。MMP-14對(duì)淋巴管的生成作用明顯，其可以直接啟動(dòng)激活D2-40的表達(dá)發(fā)揮淋巴管生成的作用，可能通過促進(jìn)VEGF-D的表達(dá)間接發(fā)揮淋巴管生成的作用。此MMP-14是較強(qiáng)的淋巴管生長(zhǎng)因子，也反映出淋巴管生成機(jī)制中的關(guān)系復(fù)雜。MMP-14與淋巴管生成有關(guān)，當(dāng)MMP-14引起VEGF-D被激活后，促進(jìn)腫瘤內(nèi)及腫瘤周邊淋巴管的新生，加速腫瘤的轉(zhuǎn)移〔10〕。淋巴管的生成為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴道提供了最直接、最便捷的途徑，為淋巴道轉(zhuǎn)移提供了最直接條件。

1 劉愛東，王獻(xiàn)華，龐久玲.大腸癌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C及酷氨酸激酶受體-4的表達(dá)與淋巴管生成及其轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006;8(5):592-4.

2 江州華，俞繼衛(wèi)，吳生華，等.胃癌組織Wnt5a和MMP14表達(dá)及其臨床意義的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2011;18(12):940-2.

3 常 超，王 平，李 琳，等.非小細(xì)胞肺癌VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表達(dá)與淋巴管生成和淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究〔J〕.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009;29(8):1077-80.

4 王明復(fù)，馮俊偉，高艷敏，等.D2-40陽性微淋巴管密度與直腸癌進(jìn)展的關(guān)系〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2008;28(13):1267-9.

5 范躍祖，李光明，黃國平，等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C、-D及其受體3在大腸癌淋巴轉(zhuǎn)移和預(yù)后中的價(jià)值〔J〕.中華消化雜志，2006;26(1):739-41.

6 Atkinson JM，Pennington CJ，Martin SW，et al.Membrane type matrix metalloproteinases(MMPs)show differential expression in non-small cell lung cancer(NSCLC)compared to normal lung:correlation of MMP-14 mRNA expression and proteolytic activity〔J〕.Eur J Cancer，2007;43(11):1764-71.

7 姚廣裕，何 萍，楊名添，等.乳腺癌組織MT1-MMP表達(dá)與淋巴管生成的關(guān)系〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2012;41(24):2459-61.

8 Velinov N，Poptodorov G，Gabrovski N，et al.The role of matrixmetalloproteinases in the tumor growth and metastasis〔J〕.Khirurgiia(Sofiia)，2010;10(1):44-9.

9 劉愛東，李 青，要瑞莉，等.MMP-14 mRNA在胃腺癌中的表達(dá)及意義〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2012;41(5):439-41.

10 Taras D，Blanc JF，Rullier A，et al.Pravastatin reduces lung metastasis of rat hepatocellular carcinoma via a coordinated decrease of MMP expression and activity〔J〕.Hepatology，2007;46(1):69-76.