黃花夾竹桃中強心苷類成分的UPLC-QTOF/MS快速鑒定

文 屏 郭巧技 黃曉煒 王建文 王春華

（1．深圳市藥品檢驗所，廣 東 深 圳 518057；2．天津中醫藥大學， 天 津 300457）

黃花夾竹桃[Thevetia peruviana(Pers.)K.Schum.]別名夾竹桃、臺灣柳、酒杯花、樹都拉[1]，是夾竹桃科(Apocynaceae)黃花夾竹桃屬植物。主產于廣西、廣東、福建、臺灣、云南等地[2]。本品味辛、苦，性溫；有大毒。歸心經。強心利尿，適用于多種心臟病引起的心力衰竭，陣發性室上性心動過速和陣發性心房纖顫。種子、果仁、皮、枝、葉中均含有多種強心苷。近年來主要研究黃花夾竹桃中強心苷類化合物，主要有黃夾甙甲、乙(ThevetinA、B)均為三糖甙，其水解產物單糖甙有黃夾次苷甲(Peruvoside)、黃夾次甙乙(Neriifolin)、黃夾次甙丙(Ruvoside)、單乙酰黃夾次甙乙 (Cerberin)、黃夾次甙丁(Perusitin)[3,4]。但近幾年類似報道逐漸減少，由于目前我國治療心力衰竭的主要強心藥均依賴進口，為了充分利用祖國中草藥資源，逐步減少或取消強心藥的進口，鑒于黃花夾竹桃在我國各地有廣泛的分布[5]，且監控其他市售的強心中藥中混入黃花夾竹桃，因此，本實驗應用超高效液相色譜-高分辨質譜聯用方法（UPLC-QTOF/MS）對黃花夾竹桃枝中的強心苷類成分進行速鑒定，為黃花夾竹桃的綜合利用以及含有黃花夾竹桃的復雜混合樣品的快速分析提供一種有效的方法。

1 儀器與試藥

液相色譜-質譜聯用儀（美國Waters AQUITYUPLC/Q-TOF micro），超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司/DL-360A），旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠/RE52C），電熱恒溫水浴鍋（上海博迅實業有限公司醫療設備廠/HHS型），循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司公司/SHZ-D(III)）。柱色譜填料：D101大孔吸附樹脂（安徽三星樹脂公司）。

黃花夾竹桃 [Thevetia peruviana(Pers.)K.Schum.]采于廣州華南植物園，經本單位中藥室鑒定為正品藥材；甲醇（色譜純）購于美國Fisher公司，水為娃哈哈純凈水，甲醇（分析純）、95%乙醇及石油醚均購于天津市大茂化學試劑廠。

2 方法與結果

2.1 總強心苷的提取及樣品制備：黃花夾竹桃枝（500 g）烘干粉碎后，用甲醇冷浸h，回流濃縮后得粗提取物45 g，將粗提物混懸于水中，用等體積石油醚脫脂。水層除有機溶劑后上D101大孔吸附樹脂柱（Φ.0×29.0 cm），依次用水、30%、50%、70%和%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，回收溶劑，冷凍干燥，得到總強心苷成分15 g。取總強心苷20 mg，精密稱定，用色譜甲醇定容至100 mL，配成樣品濃度為5 mg/mL，待測。

2.2 測試條件：色譜柱：Thermo Quest C18色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），流動相 A：0.1%甲酸水溶液，流動相 B：乙腈，線性梯度洗脫程序：0~15 min，10%B→60%B，15~16 min，60%B→100%B； 流 速 ：0.3 ml·min-1，柱溫：40℃，檢測波長：220 nm，進樣量：1μL。

正離子模式檢測進行一級高分辨質譜分析。質譜檢測器參數：ESI源，霧化鞘氣（N2）流速：80 a.u，霧化輔助其（N2）流速：15 a.u，毛細管溫度：350℃，源電壓：3.5 KV，碰撞氣體：氦氣，毛細管電壓：-5 V，離子掃描范圍：100～1300(m/z)，所有數據采集和處理采用 Mass-Lynx.1軟件。

2.3 總強心苷類成分的結構鑒定：采用UPLC-QTOF/MS所給出的分子質量，結合文獻調研分別推測出了6個主要色譜峰的化合物結構，分別為黃夾苷B、黃夾次苷D、黃花夾竹桃次苷甲、黃夾臭蟻醛苷、黃花夾竹桃次苷乙以及單乙酰次苷乙（表1），同時還測定了這種強心苷類成分的相對含量分別為.02%、7.5%、6.8%、8.9%、16.2%和14.1%，占總峰面積的54.52%。

圖1 黃花夾竹桃中強心苷類成分的紫外液相譜圖及總離子流圖譜

表1 鑒定的主要強心苷類化合物

3 討論

超高效液相色譜(UPLC)，與傳統的HPLC技術相比，提供了更高的效率，因而具有更強的分離能力，大幅度地改善了液相色譜的分離度、樣品通量和靈敏度。高效液相色譜與串聯質譜聯用技術是近年來發展起來的一種先進分析方法，與傳統的高效液相色譜與質譜聯用技術相比，具有更高分離度、更高速度、更高靈敏度的優點。

本課題是在前人研究的基礎上，首次采用超高效液相-高分辨質譜聯用儀技術，針對黃花夾竹桃中強心苷類成分進行了快速分析鑒定，經分析其中的1~6號色譜峰分別為黃夾苷B、黃夾次苷D、黃花夾竹桃次苷甲、黃夾臭蟻醛苷、黃花夾竹桃次苷乙以及單乙酰次苷乙，這6種強心苷類成分的峰面積占總峰面積的54.52%，其中黃花夾竹桃次苷乙和單乙酰次苷乙更是黃花夾竹桃中的主含成分，它們可能就是黃花夾竹桃發揮強心作用的重要物質。本研究為黃花夾竹桃的進一步研究開發和質量控制提供了更加充分的依據。

[1]楊倉良．毒藥本草[M]．北京∶中國中醫藥出版社．1993．

[2]江蘇新醫學院．中藥大辭典[M]．上?！蒙虾？萍汲霭嫔?1986．

[3]孫南君．黃花夾竹桃中強心甙的研究I．Thevetin A,thevetin B,peruvoside，neriifolin 的提取和分離[J]．藥學學報,1962,9(6)：359-369．

[4]郎惠英,孫南君．黃花夾竹桃中強心甙的研究 II．cerbe rin,ruvoside和新強心甙perusitin的分離和鑒定[J]．藥學學報,1964,11(7)：464-472．

[5]梁金照,陳鎮輝,方尚杰,等．黃花夾竹桃和夾竹桃對21例心力衰竭患者的治療觀察[J]．海峽藥學,1995,7(2)：30-31．