原發(fā)性高血壓患者子代人群載脂蛋白E基因多態(tài)性與高血壓的關系

容春莉，于 薇，姚文靜，李如意，曹東平，彭應心

(河北省人民醫(yī)院，石家莊 050051)

載脂蛋白E(ApoE)是一種多態(tài)性蛋白，參與脂蛋白的轉化與代謝過程，其基因可以調節(jié)許多生物學功能。研究表明，ApoE基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的發(fā)生、發(fā)展有關，但其與血壓正常的原發(fā)性高血壓患者子代人群的關系國內外鮮見報道。2009年3月～2010年2月，我們對原發(fā)性高血壓患者子代人群ApoE基因多態(tài)性與高血壓的關系進行了分析。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期選擇我院健康體檢者120例，經(jīng)相關檢查未發(fā)現(xiàn)糖尿病、高血壓、冠心病及其他影響血脂代謝的全身性疾病。根據(jù)有無高血壓家族史分為2組:原發(fā)性高血壓子代組60例(研究組)，男39 例、女21 例，年齡(48.7 ±10.8)歲;入選標準:父母雙方或一方有原發(fā)性高血壓，高血壓診斷標準符合1999年WHO/ISH規(guī)定的標準，除外繼發(fā)性高血壓、冠心病、缺血性腦病及肝腎系統(tǒng)疾病者。正常對照組60例(對照組)，男36例、女24例，年齡(46.6±9.3)歲，入選標準:父母雙方均無高血壓、冠心病、缺血性腦病及肝腎系統(tǒng)疾病者。兩組性別、年齡具有可比性。研究對象均為無血緣關系的中國北方漢族人。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 詳細記錄所有研究對象的年齡、性別等，并測量身高、體質量，計算BMI;采用臺式血壓計于每日10:00測量右上肢血壓3次，取其平均值作為收縮壓、舒張壓。采血前12 h禁食煙、酒、茶、咖啡等，于清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，置入含有1/10體積0.109 mol/L枸櫞酸鈉抗凝液的試管中，分離血清，用于測定血脂指標，血細胞用于測定ApoE基因型。

1.2.2 ApoE基因型的檢測 ①DNA提取:采用經(jīng)典法分離提取血細胞DNA。②目的序列PCR擴增:PCR擴增DNA，PCR引物參照Tsai等［1］的報道設計(上游引物序列:5'-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3';下游引物序列:5'-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3')。將擴增反應體系以6000 r/min離心5 min，97℃預變性180 s，95℃變性45 s，68℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循環(huán)35次，最后72℃延伸120 s。③PCR產物測序:經(jīng)酶切后在凝膠成像分析系統(tǒng)下觀察ApoE基因型:在48、72 bp處顯現(xiàn)2條區(qū)帶者為E4/4，在81、91 bp處顯現(xiàn)2條區(qū)帶者為E2/2，在48、91 bp 處顯現(xiàn) 2 條區(qū)帶者為 E3/3，在 48、72、91 bp處顯現(xiàn)3條區(qū)帶者為E3/4，在48、81、91 bp處顯現(xiàn)3 條區(qū)帶者為 E2/3，在48、72、81、91 bp 處顯現(xiàn)4條區(qū)帶者為E2/4。

1.2.3 血脂水平檢測 血標本處理后，采用同一臺Beckman全自動生化分析儀檢測兩組血脂水平。以膽固醇氧化酶法測定總膽固醇(TC)、甘油激酶法測定甘油三酯(TG)，直接法測定低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。以上4項指標均由專人操作。

1.2.4 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS11.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，結果比較采用t檢驗和方差分析;基因頻率用基因計數(shù)法計算，比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床資料比較 兩組BMI、血壓、血脂指標比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均＞0.05)。見表1。

2.2 兩組ApoE基因型及等位基因比較 所有研究對象的PCR片段均得到滿意擴增，檢測到6種ApoE基因型，與用Hardy-Weinberg平衡推導出的預期基因型頻率基本一致，均達到連鎖平衡(χ2=4.26，P ＞ 0.05)，具有群體代表性。見圖 1。將ApoE基因型分為三組:ε2等位基因攜帶者E2/X(E2/3+E2/2基因型)、ε3等位基因攜帶者(E3/3基因型)、ε4等位基因攜帶者E4/X(E3/4+E4/4基因型)，E2/4因中性作用而排除在外。兩組ApoE基因型及等位基因頻率的分布見表2。兩組均以ApoE3/3基因型為優(yōu)勢基因型，與對照組相比，研究組 ApoE4/4基因型高于對照組(χ2=4.68，P＜0.05)。兩組均以ε3等位基因頻率最高，ε2等位基因頻率最低。研究組ε4等位基因頻率高于對照組(χ2=12.42，P ＜0.05)。

表1 兩組臨床資料比較()

表1 兩組臨床資料比較()

組別 n BMI(kg/m2)收縮壓(mmHg)舒張壓(mmHg)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)研究組 60 20.08 ±0.17 128 ±10 82 ±7 4.42 ±0.92 1.39 ±0.30 1.41 ±0.44 2.87 ±0.59對照組 60 24.60 ±0.34 124 ±11 76 ±9 4.28 ±0.67 1.28 ±0.54 1.17 ±0.30 2.98 ±0.87

圖1 ApoE各基因型凝膠電泳圖

表2 兩組ApoE基因型及等位基因頻率的分布

3 討論

ApoE具有轉運膽固醇和調節(jié)脂質代謝的作用，在血脂代謝中具有重要意義。ApoE基因位于人類第19號染色體p13～q13區(qū)，并與ApoCⅠ、CⅡ共同形成基因簇，在功能上發(fā)揮協(xié)同作用。ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥、動脈粥樣硬化及高血壓的發(fā)生密切相關［2，3］。因此，ApoE 基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關系越來越受到人們的關注［4］。

ApoE的合成是由位于同一基因位點上的3個等位基因(ε2、ε3、ε4)所控制，分別編碼血漿中 3 種主要異構體(E2、E3、E4)，構成6種不同的基因型，即3 種純合子(E2/2、E3/3、E4/4)、3 種雜合子(E3/2、E4/3、E4/2)。不同人群ApoE等位基因最常見的是E3，E2和E4可能是母體形式在人類進化過程中單一核苷酸點突變的結果。不同國家、民族ApoE等位基因頻率不同，存在明顯的種族差異［5］。有研究顯示，在中國人群中 ε2、ε4等位基因頻率為0.084、0.064，而 ε3 為 0.852。本研究發(fā)現(xiàn)，研究組與對照組均以E3/3表型及ε3等位基因最為常見，ε2和ε4相對少見，與多數(shù)研究結果相符，說明中國北方漢族人群，無論有無高血壓家族史，ApoE ε3等位基因頻率的分布最高。

有研究表明，ApoE4/4基因型和ε4等位基因頻率在原發(fā)性高血壓患者中是增加的，提示ε4可能是高血壓相關的遺傳因素之一。Yilmaz等［6］對88例高血壓患者和63例正常健康者研究發(fā)現(xiàn)，ε4等位基因攜帶者的高血壓患者有很高的靶器官損害危險，如左室肥厚和左房擴大，且與血壓高低相平行。但到目前，關于原發(fā)性高血壓患者子代人群ApoE基因多態(tài)性的研究鮮見報道。本研究測定了60例血壓正常的原發(fā)性高血壓患者子代的ApoE基因型，并計算ApoE等位基因頻率。結果顯示，原發(fā)性高血壓患者子代的ε4等位基因頻率高于對照組，推測原發(fā)性高血壓患者子代人群高血壓的易感基因為ApoE ε4等位基因。但高血壓病是一種多因素、多基因疾病，ApoE基因多態(tài)性與血壓之間的關系頗為復雜，可能通過基因—基因及基因—環(huán)境間的相互作用［7］，以某些直接或間接的方式影響血壓，故原發(fā)性高血壓患者子代人群是否發(fā)生高血壓受遺傳、環(huán)境等多種因素的影響。

總之，進一步擴大樣本量，研究遺傳易感因素在血壓正常的原發(fā)性高血壓患者子代人群中的作用，盡早發(fā)現(xiàn)高血壓，早期干預治療，有助于減少高血壓在這些人群中的發(fā)病率，提高生活質量。

［1］Tsai MY，Suess P，Schwichterberg K，et al.Determination of apolipoprotein E genotypes by single-strand conformational polymorphism［J］.Clin Chem，1993，39(10):2121-2124.

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［3］Imazu M，Yamamoto H，Toyofuku M，et al.Association of apolipoprotein E phenotype with hypertension in Japanese-American:data from the Hawaii--Los Angeles-Hiroshima Study［J］.Hypertension Res，2001，24(5):523-529.

［4］Li X，Du Y，Du Y，et al..Association of apolipoprotein E gene polymorphism with essential hypertension and its complications［J］.Clin Exp Med，2003，2(4):175-179.

［5］Seet WT，Mary Anne TJ，Yen TS.Apolipoprotein E gene genotyping in the Malay，Chinese and Indian ethnic groups in Malaysia-a study on the distribution of the different apoE alleles and genotypes［J］.Clin Chim Acta，2004，340(1-2):201-205.

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［7］Hagberg JM，F(xiàn)errell RE，Dengel DR，et al.Exercise training-induced blood pressure and plasma lipid improvements in hypertensives may be genotype dependent［J］.Hypertension，1999，34(1):18-23.