毛細管氣相色譜法測定二氟潑尼酯原料藥中5種有機溶劑的殘留量Δ

馮光玲，馮愛國，丁文娟，孔祥雨，劉憲華（1.山東省醫藥工業研究所，濟南250101；2.山東省化學藥物重點實驗室，濟南 250101；.山東臨沂動植物園，山東臨沂 27607）

二氟潑尼酯（Difluprednate）又名醋酸丁酸二氟強的松龍，是一種潑尼松龍的二氟化衍生物，具有強效抗炎活性。該原料藥國內正處于在研狀態。其分子式為C27H34F2O7，相對分子質量為508.56，結構與其他皮質激素類藥物相似，氟化在C-6位和C-9位。該化合物在合成工藝中使用了甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇等有機溶劑（所用溶劑由山東省醫藥工業研究所合成室依據合成路線提供），為保證用藥安全，應對這5種有機溶劑殘留量進行控制。由于氣相色譜法具有分析速度快、分離效率高、靈敏度高的優點，被廣泛用于藥物中有機溶劑殘留量的測定。為此，筆者建立了以N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為溶劑（本品極微溶于水），采用毛細管氣相色譜法[1]測定二氟潑尼酯原料藥中5種有機溶劑殘留量的方法，結果表明，建立的方法靈敏、準確。

1 材料

6890氣相色譜儀、7694E自動頂空進樣器（美國Agilent公司）。

二氟潑尼酯原料藥（山東省醫藥工業研究所合成室提供，批號：120602、120604、120606，純度：99.79%、99.81%、99.83%）；甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、乙醇和DMF均為分析純，含量均≥99%。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細管柱（5%苯基-95%甲基聚硅氧烷為固定液）；柱溫：35℃保持5min，再以50℃/min的速率升溫至200℃，保持5min；氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：250℃；載氣：高純氮氣，流速：30ml/min；進樣口溫度：200℃；分流比：10∶1。

采用頂空進樣法測定，頂空進樣條件：加熱溫度：100℃，加熱時間：45min，進樣量：2ml（頂空氣體進樣）。

2.2 溶液配制及系統適用性試驗

空白溶液：精密量取DMF 2ml，置于頂空進樣瓶中，作為空白溶液。

標準溶液貯備液：稱取甲苯約89mg、二氯甲烷約60mg、正己烷約29mg、乙酸乙酯約500mg、乙醇約500mg，加入有適量DMF的100ml量瓶中，充分振搖使溶解，加DMF稀釋至刻度，搖勻，作為標準溶液貯備液。

標準溶液：精密量取上述貯備液5ml，置于50ml量瓶中，加DMF至刻度，搖勻，精密量取2ml置于頂空進樣瓶中，作為標準溶液。

供試品溶液：精密稱取二氟潑尼酯原料藥0.2g，置于頂空進樣瓶中，精密加入DMF 2ml，作為供試品溶液。

取標準溶液進行分析，色譜見圖1A。由圖1A可見，各溶劑分離良好，空白溶劑無干擾。

圖1 毛細管氣相色譜圖A.標準溶液；B.供試品溶液；1.乙醇；2.二氯甲烷；3.正己烷；4.乙酸乙酯；5.甲苯；6.DMFFig 1 Capillary GC chromatogramsA.standard solutions；B.test samples solutions；1.alcohol；2.dichlormethane；3.n-hexane；4.acetic ether；5.methylbenzene；6.DMF

2.3 標準曲線的制備

分別精密量取標準溶液貯備液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50ml，置于10ml量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液2ml，分別置于頂空進樣瓶中，按“2.1”項下色譜條件分別進樣。分別以甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇質量濃度（c）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，得甲苯：A＝0.8961c－1.076（r＝0.9995）；二氯甲烷：A＝0.2532c－0.4658（r＝0.9995）；正己烷：A＝6.3875c－6.9322（r＝0.9999）；乙酸乙酯：A＝0.7329c－23.4（r＝0.9992）；乙醇：A＝0.4517c－16.71（r＝0.9990）。結果表明，甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、乙醇檢測質量濃度線性范圍分別為44.53～133.59 μg/ml、30.03～90.08 μg/ml、14.51～43.52 μg/ml、250.1～750.3mg/ml、250.4～751.2mg/ml。

2.4 精密度試驗

取標準溶液適量，按“2.1”項下色譜條件，連續進樣6次，記錄色譜圖，計算RSD。結果甲苯RSD為3.93%、二氯甲烷RSD為2.37%、正己烷RSD為3.83%、乙酸乙酯RSD為2.89%、乙醇RSD為3.22%。表明精密度符合要求。

2.5 回收率試驗

精密稱取樣品（批號：120602）0.2g，共10份，其中1份精密加入2ml DMF，作為空白溶液；分別配制低（80%）、中（100%）、高（120%）3種濃度的對照溶液，精密量取上述不同濃度的對照溶液2ml，加入盛有樣品的頂空進樣瓶中。以“2.2”項下的標準溶液作為對照，分別進樣。得甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇的低、中、高濃度的回收率分別為94.4%、95.7%、95.9%，95.6%、95.3%、96.7%，95.5%、93.8%、95.6%，96.3%、95.7%、96.8%，95.1%、95.9%、97.4%，平均回收率分別為95.2%（RSD＝1.07%）、96.7%（RSD＝1.76%）、94.9%（RSD＝1.98%）、96.1%（RSD＝1.95%）、96.1%（RSD＝1.12%），表明本法準確度符合要求。

2.6 定量限、最低檢測限試驗

將標準溶液逐級稀釋，分別精密量取2ml，置于頂空進樣瓶中，分析、記錄色譜圖，直至信噪比為10∶1和3∶1，即得定量限和檢測限。結果甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇的定量限分別為0.445、0.36、0.116、0.5、0.125ng，檢測限分別為0.178、0.06、0.029、0.15、0.04ng。

2.7 樣品中有機溶劑殘留量測定

精密量取標準溶液和供試品溶液適量，分別進樣測定，以外標法計算。結果，3批樣品的乙酸乙酯殘留量平均值分別為0.20%、0.19%和0.19%，均未檢出甲苯、二氯甲烷、正己烷和乙醇。其中批號為120602的樣品色譜圖見圖1B。

3 討論

本試驗測定的5種有機溶劑沸點有差異，選用非極性柱或弱極性柱可以進行分離，但一般的填充柱達不到檢測要求，故選用毛細管柱。

本試驗采用程序升溫的方法，先在35℃保持5min，使低沸點的溶劑有效分離，然后以50℃/min的速率升溫至200℃，保持5min，使DMF加快出峰，以改善峰形。

為了保證用藥的安全性，根據2010年版《中國藥典》[2]的要求，將二氟潑尼酯中甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇的限度定為0.089%、0.06%、0.029%、0.5%和0.5%。

經過驗證，本文建立的方法線性、精密度、回收率、定量限、檢測限以及系統適用性均較好，能夠準確、迅速地檢測出二氟潑尼酯原料藥中殘留的甲苯、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯和乙醇。

[1] 周研，劉波平，羅香，等.頂空毛細管氣相色譜法測定非那雄胺中有機溶劑的殘留量[J].分析測試學報，2007，26（1）：131.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄63.