萊菔子水溶性生物堿對載脂蛋白E基因缺陷小鼠胸主動脈內皮型一氧化氮合酶、核因子－кB的影響

張國俠 蓋國忠

動脈粥樣硬化的中醫學病因可歸結為痰濁、血瘀范疇。其中尤以痰濁型常見。西醫在治療本病的時候多用他汀類藥物，雖療效確切但是對肝腎功能影響較大。中藥復方制劑常常因服用不方便而導致患者依從性差，因此，探尋單味中藥治療本病，發揮簡、效、便、廉的優勢，有較高的社會價值。本研究提取了萊菔子有效成分水溶性生物堿，并以載脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠為研究對象，從血管內皮保護機制方面著手，進行了實驗研究。

1 材料與方法

1.1 藥品

萊菔子水溶性生物堿。生萊菔子采用水提醇沉方法提取而成。由吉林省中醫中藥研究院新藥中心制備(實驗專用)。

1.2 動物

雄性ApoE-/-小鼠30只，雄性C57BL/6J小鼠6只，13周齡，體重(22±2)g，清潔級，北京維通利華公司提供。

1.3 主要實驗儀器及試劑

電子記重秤AWH(SI)－2.5 kg:國產;BD/BC－518 －20℃冰箱:國產;4℃ 冰箱:國產;Q/IFGM018－2000低溫高速離心機:德國;HH·W21·600電熱恒溫水浴箱;小型臺式離心機，上海醫療器械廠;PERLONG;pus－2018半自動生化分析儀:北京普朗新技術有限公司。

1.4 基礎飼料

玉米粉26.0%，面粉29.0%，豆粕28.0%，磷酸氫鈣1.4%，石粉1.6%，魚粉5.0%，骨粉5.0%，鹽1.0%，多種維生素1.5%，多種微量元素1.5%。

肥甘飼料:參見文獻［1］。

1.5 分組及給藥

將ApoE-/-小鼠(高脂飲食)隨機分為5組，每組6只。C57BL/6J(同種同系):每日灌服飲用水;萊菔子水溶性生物堿高劑量組:90 mg/(kg·d)，溶于1 ml蒸餾水，灌胃。中劑量組:60 mg/(kg·d)，溶于1 ml蒸餾水，灌胃。低劑量組:30 mg/(kg·d)，溶于1 ml蒸餾水，灌胃。血脂康組:0.2 g/(kg·d)，溶于1 ml蒸餾水，灌胃。模型組給以等體積蒸餾水灌胃。給藥時間為8周。

1.6 標本

每組取6只小鼠，小鼠經摘除眼球采血后，立即拉椎處死，快速切取主動脈弓組織1 cm，將其迅速放置4%多聚甲醛固定液中固定。每只小鼠的主動脈弓切片在400倍鏡下選取3個不同的視野。

1.7 統計學處理

實驗數據均采用均數±標準差(x±s)來表示，運用SPSS 13.0軟件進行計算，組間比較采用方差分析。

2 結果

實驗結果表明，萊菔子水溶性生物堿各給藥組均能抑制小鼠胸主動脈核因子-кB(nuclear factorкB，NF-кB)蛋白表達，并且隨著劑量的增加，抑制的作用增強;均能提高小鼠胸主動脈內皮型一氧化氮合酶(endothlial nitric oxide synthase，eNOS)蛋白表達，并且隨著劑量的增加，作用增強。并且萊菔子水溶性生物堿高劑量組的作用與血脂康組相比無統計學意義。見表1。

3 討論

1999年Ross在總結“內皮損傷反應學說［2-3］”的基礎上提出了炎癥學說。其提出動脈粥樣硬化是一種炎癥反應性疾病，因為動脈粥樣硬化有同慢性炎癥反應一樣的基本特征，即:變質、滲出、增生［4］。

目前中藥研究抗動脈粥樣硬化作用的研究主要集中在降血脂、抗過氧化、血管內皮保護、抑制平滑肌細胞增殖遷移等方面。經過文獻檢索發現中藥抗動脈粥樣硬化研究從炎癥細胞浸潤、細胞因子表達方面入手的較少。此外，進行試驗所選藥物大多為復方且以個人經驗方為主，對于單味藥、單體有效成分的研究較少。

表1 各組治療8周后胸主動脈壁eNOS、NF-кB蛋白表達比較

表1 各組治療8周后胸主動脈壁eNOS、NF-кB蛋白表達比較

注:與模型組比較，a P﹤0.01;與C57BL/6J比較，b P﹤0.01，c P﹤0.05;與血脂康組比較，d P﹤0.01，e P﹤0.05;n代表視野。

組別 eNOS NF－кB 140.67±5.65 46.99±4.33 C57BL/6J 102.33±5.01a 132.17±9.22a高劑量組 110.83±5.23ac 95.99±2.27ab中劑量組 119.33±4.59abe 86.21±4.28abd低劑量組 128.83±3.66abd 75.62±1.07abd血脂康組 110.5±5.58ac 98.39±5.86模型組ab

綜上，課題組在對萊菔子單味藥有效成分提取的基礎上進行試驗，從保護血管內皮，抗炎的機制方面進行研究。本試驗結果表明萊菔子水溶性生物堿能夠提高ApoE-/-小鼠主動脈內皮型一氧化氮合酶的表達，抑制核因子-кB的表達。由于在動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的進程中，NF-кB 是多種炎癥因子的啟動因子，在AS的發展過程中發揮著關鍵作用。而NO有抗炎作用。已有研究證實，由于NO能夠作用于NF-кB的抑制因子，減少各種致炎癥因素刺激內皮細胞達到抗AS的作用［5］。可見，萊菔子水溶性生物堿通過增加NO的合成，發揮NO的生理作用，進而達到抗AS的目的。由于，本實驗選用的動物模型為基因缺陷小鼠，課題組發現中醫學先天稟賦因素在AS的發病中有重大作用，并且，萊菔子水溶性生物堿具有干預作用。

［1］Prediman K，Nilsson J，Kaul S，et al.Effects of recombinant Apolipoprotein A-IMilano on aortic atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice［J］.Circulation，1998，97:780-785.

［2］Ross R，Glomset J A.The pathophysiology of atherosclerosis［J］.N Engl J Med，1976，295(8):420-425.

［3］de Boer OJ，van der Wal AC，Becker AE.Atherosclerosis，inflammation，and infection［J］.Pathol，2000，190(3):237-243.

［4］Ross R.Atherosclerosis an inflammatory disease［J］.N Engl J Med，1999，340(2):115-126.

［5］Fleming I，Bauersachs J，Busse R.Parac nine functions of the cononary vascular endothelium［J］.Mol Cell Biochem，1996，157:137.