順鉑不同途徑給藥后家兔舌體及體內藥物分布的實驗研究

玄云澤，張 杰，鄭 磊，張建國△

（1.延邊大學附屬醫院口腔科，吉林 延吉 133000；2.北京大學口腔醫學院口腔頜面外科 100081）

化療是惡性腫瘤綜合治療的一個重要組成部分，全身化療有局部組織內藥物水平低、毒副作用大等缺點，臨床上影響了療效。間質化療不僅能提高局部組織內藥物水平，還延長藥物在局部組織內維持時間［1－3］。順鉑（cisplatin，CDDP）是臨床上常用的化療藥物，但是由于順鉑的腎毒性等使其應用受到限制［4－5］。為了解緩釋型順鉑植入體內后局部組織及其他部位中藥物分布情況，進行了動物實驗研究，以期為臨床應用提供了依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 家兔32只，體質量（1.5±0.2）kg，雌雄各半，由安徽醫科大學實驗動物中心提供。合格證號為皖醫實動準01號，經檢疫驅蟲，分籠飼養2周。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 順鉑標準品（中國藥品生物制品檢驗所）；鉑標準溶液（批號040301），鉑水平1 000mg／mL－1（國家鋼鐵材料測試中心）；順鉑（緩釋型，緩釋時間為15d，安徽中人科技有限公司）；原子吸收分光光度計（帶石墨爐），Z8000偏振塞曼型（日本日立公司）。

1.2.2 實驗方法 將32只家兔分為兩組，靜脈注射組、局部植入組。靜脈注射組實驗：共選8只家兔。先選家兔4只，雌雄各半，于耳緣靜脈注射順鉑4mg后1、2、4、8、12、24、48、72h取耳中央動脈血2mL，置肝素的離心管內，隨即3 000r／min離心10min，分離血漿，置－20℃冰箱內，測定藥物水平，確定血藥峰值水平時間。再選家兔4只，雌雄各半。順鉑4mg注射于耳緣靜脈后血藥峰值水平時，心內注射空氣10mL處死，分別切取1g舌體中部組織、頸部淋巴結、心、肝、脾、肺、腎等組織，置－20℃冰箱內待測。局部植入組實驗：家兔24只隨機分為6組，每組4只動物，雌雄各半。以3% 戊巴比妥鈉（30mg／kg）靜脈麻醉，將順鉑（緩釋型）4mg植入于兔舌體中部肌肉內。植入后分別于1、3、5、7、10、15d等6個時間，取耳中央動脈血2mL后，將各組動物處死，取植入部位及距離植入部位1cm的舌體組織、頸部淋巴結、心、肝、脾、肺、腎等組織，－20℃冰箱內凍存、待測。

1.2.3 藥物水平的檢測 精密稱取適當切碎的被測血漿樣0.5g放入具塞試管中，加入濃硝酸0.45mL、30%的H2O20.9mL、辛醇2滴?；靹颍苋笾?0～95℃水浴中，消解約2～4h，至消解液澄清，再以0.22μm水膜快速過濾。收集過濾液至5mL錐形離心試管中，以0.5mL水沖洗消解管并過濾合并入收集管中。將過濾液試管插砂浴中，置通風櫥中設定成內部溫度約120℃，溶液揮發干凈后轉移各試管至100℃恒溫箱，保溫至干。向揮干殘渣內加入200μL的1%的稀鹽酸溶液，立即以封口膜密封，渦旋5min。再放置約30min后待測。用石墨爐原子吸收光譜法分別測定血與組織藥物水平。

表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內植入后不同時間的藥物水平，μg／mL）

表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內植入后不同時間的藥物水平，μg／mL）

頸部淋巴結1d 0.16±0.08 15.77±3.17▲ 2.80±2.42▲ 4.53±1.18時間 外周血 植藥點 植藥點1cm▲3d 0.21±0.08 14.58±1.06▲ 5.41±1.83▲ 4.97±3.41▲5d 0.10±0.05 15.44±1.64▲ 3.04±1.36▲ 4.57±2.90▲7d 0.07±0.07 15.34±1.72▲ 6.44±5.42▲ 3.74±1.37▲10d 0.04±0.04 14.14±3.22▲ 7.39±3.75▲ 9.17±0.99▲15d 0.10±0.02 16.62±0.32▲ 7.16±1.12▲ 9.97±3.34▲

續表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內植入后不同時間的藥物水平μ

續表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內植入后不同時間的藥物水平μ

▲：P＜0.05，與外周血中水平比較；▼：P＜0.05與植藥點水平比較。

時間 心臟 肝臟 腎臟 脾臟 肺1d 0.47±0.15 1.47±0.06 2.79±0.49▲▼0.71±0.17 0.73±0.09 3d 0.13±0.02 1.97±1.11 4.31±1.41▲▼ 1.21±0.32 0.84±0.19 5d 0.36±0.16 2.85±0.64 6.11±1.59▲▼ 1.19±0.04 0.72±0.33 7d 0.71±0.14 1.67±0.18 4.81±0.95▲▼ 1.51±0.30 0.65±0.07 10d 1.22±1.23 2.13±0.86 3.36±0.86▲▼ 1.12±0.12 0.45±0.31 15d 1.55±0.06 2.78±1.53 5.03±1.14▲▼2.45±0.93 1.52±0.33

1.3 統計學處理 采用SPSS11.5進行數據處理，計量資料采用表示，各組間采用多因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 靜脈給藥后不同時間點血中順鉑水平血藥峰值水平時藥物水平分布 順鉑4mg靜脈注射于4只家兔耳緣靜脈，1、2、4、8、12、24、48、72h時測定血中藥物水平，分別為（0.87±0.11）、（0.48±0.00）、（0.42±0.00 ）、（0.33±0.00）、（0.34±0.00）、（0.31±0.01）、（0.23±0.00）、（0.16±0.01）μg／mL。其中，1h其取樣時間點中最高水平，因此確定血藥峰值水平時相為1h。

2.2 靜脈給藥后血藥峰值水平時藥物水平分布 順鉑4mg靜脈注射于4只家兔耳緣靜脈，血藥峰值水平時外周血、舌、頸淋巴結、心臟、肝臟、腎臟、脾臟和肺中藥物水平分別為（0.87±0.11）、（1.03±0.14）、（1.19±0.05）、（0.75±0.17）、（2.14±0.08）、（5.31±1.21）、（0.95±0.15）、（1.35±0.06）μg／mL。外周血、舌、頸淋巴結與腎臟之間比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；外周血、舌、頸淋巴結之間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 順鉑（緩釋型）植入舌體后4mg兔舌內植入后不同時間的藥物水平 植藥點、植藥點1cm、頸部淋巴結、腎臟中藥物水平與外周血中水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；腎臟中藥物水平與植藥點中水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

3 討 論

順鉑的抗癌療效與藥物水平和藥物對腫瘤細胞作用時間有關。順鉑及其降解產物主要由腎臟排除，在腎臟中藥物水平很高，對腎的毒性也大。為了了解或減少順鉑的腎毒性，各國學者進行了大量研究［5］。本研究結果表明，腎臟中藥物水平最高，而局部組織（舌體）及頸淋巴結中藥物水平與腎臟中水平相比很低，與Cai等［6］報道一致。本實驗中外周血、舌體、頸淋巴結內水平顯著低于腎臟中藥物水平，而外周血、舌體、頸淋巴結內水平之間差異無統計學意義。分析實驗結果，靜脈途徑應用順鉑對靶器官－舌體的作用較弱。

抗癌藥物的療效取決于藥物在腫瘤組織內有效藥物水平與維持時間乘積（AUC）［7］，所以提高AUC是抗癌藥物研究的重點。研究證明，只有保持組織內較高水平，以及延長藥物的作用時間，才能達到良好的療效［8］。盧金利等［9］檢測靜脈化療后血漿和腫瘤組織中鉑含量，發現順鉑在腫瘤組織中代謝較快，下降幅度大于血漿。Landrito等［10］瘤體內分別注射碘化油為載體的順鉑與順鉑水溶液，前組中組織內藥物水平比后組分別高出9倍和12倍。順鉑（緩釋型）是順鉑與生物相容性良好、具有降解性能的聚乳酸（PLA）的聚合物，不改變原藥成分，僅改變給藥途徑和控制緩釋時間來治療癌癥。PLA的體內代謝最終產物為CO2和H2O，降解產物可通過腎臟排出體外［11］。順鉑（緩釋型）植入局部組織后隨著載體的緩慢降解，順鉑釋放進入到癌或其周圍組織，使局部組織內形成持續的高水平，并持續作用于癌細胞，岑德意等［12］的實驗研究也已證實這點。本實驗結果表明，植入藥物部位舌體、植入藥物1cm部位組織的藥物平均水平均高于外周血中水平，植入藥物部位藥物水平基本上保持在較高水平，而且植入藥物1㎝部位和頸淋巴結中水平隨時間延長緩慢上升，但外周血中水平反而隨時間延長緩慢下降。此外，本實驗結果還表明，頸部淋巴結中藥物水平明顯高于外周血和腎臟中水平，所以順鉑（緩釋型）植入舌體后能夠提高頸淋巴結內藥物水平，延長其作用時間。Cai等［6］比較靜脈給藥透明質酸和順鉑聚合物與單純順鉑組，前組AUC高于后組2.7倍，降低血漿峰值水平。還報道，透明質酸與順鉑聚合物皮下注射于鼠乳腺，明顯增加了血漿及組織內鉑的AUC，同側腋窩淋巴結內藥物水平比靜脈注射順鉑組相比提高了3.6倍，延長了藥物作用時間，未見明顯毒副作用。有文獻報道術前癌組織及癌旁組織內植入緩釋順鉑，可見原發灶和轉移淋巴結均有病理變化，局部組織及區域淋巴結內檢測到較高藥物水平［13－14］。提示順鉑（緩釋型）進行間質化療，符合間質化療的局部高水平和全身低水平的特點，提高局部組織內藥物水平和藥物的療效。

總之，家兔舌體組織內植入順鉑（緩釋型）與靜脈給藥相比，明顯提高局部組織及淋巴結內藥物水平，延長藥物作用時間，為間質化療治療舌癌的臨床應用提供理論依據。

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