AKT2在大腸腺瘤及其癌變組織中的表達及意義

艾迎春,王立平,李奕鑫

(1.佳木斯大學附屬第一醫院消化二科,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學臨床醫學院,黑龍江 佳木斯 154003;3.佳木斯市醫保醫院,黑龍江佳木斯 154004)

大腸癌是常見的惡性腫瘤之一,其發病機制尚不十分明確。AKT2是一種絲氨酸 /蘇氨酸蛋白激酶 ,在細胞信號傳導通路和調控細胞生存和凋亡的平衡中發揮重要作用。但對于AKT2在大腸癌發生發展中的作用國內研究還很少。本試驗用 SABC免疫組化技術檢測 AKT2在大腸腺瘤及大腸腺瘤癌變組織中的表達并探討其在大腸腺瘤惡性轉化中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取哈爾濱市第二醫院 2005— 01～2011— 01確診臨床資料完整的 30例大腸癌(癌變的大腸腺瘤 )的存檔蠟塊 ,40例大腸腺瘤的存檔蠟塊,其中高危性腺瘤 14例,低位性腺瘤26例;管狀腺瘤19例,混合性腺瘤 9例,絨毛狀腺瘤12例。20例正常大腸黏膜蠟塊。所有癌癥病例術前均未進行放化療。全部標本均經10%福爾馬林固定,常規脫水后石蠟包埋,制成蠟塊保存。載玻片為多聚賴氨酸防脫片,購自福州邁新公司。每個蠟塊行連續切片,厚4μm,行 HE染色和免疫組化染色。

1.2 方法

1.2.1 試劑

兔抗人 AKT2多克隆抗體,編號:BA-1512,購自武漢博士德生物工程有限公司,4°C冰箱保存。廣譜型 SABC免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。試驗步驟:采用 SABC免疫組化法,嚴格按照試劑盒說明進行。

1.2.2 陽性結果判斷

AKT2蛋白陽性為黃色顆粒主要定位于胞漿。400倍下計數5個視野,陽性細胞率=陽性細胞數 /總細胞數×100%。結合陽性細胞百分比和及陽性細胞強弱計算免疫組化染色評分:①陽性細胞≤ 5為0分,陽性細胞6%～25%為1分 ,26%～50%為2分,＞ 50%為 3分。②0分為無色,陽性細胞淡黃色為 1分,黃色為2分,棕黃色為 3分。①、②兩項乘積即為其免疫組化評分,得分 ＜2分為陰性,≥2分為陽性。

1.3 統計學處理

應用 SPS13.0統計學軟件,采用卡方檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AKT2在正常大腸組織,大腸腺瘤,大腸腺瘤癌變組織中的表達

三者比較差異有統計學意義 (i2= 19.68,P＜0.01)。正常組和大腸腺瘤組比較差異有統計學意義 (i2= 5.09,P＜0.05)。大腸腺瘤組和癌變的大腸腺瘤組比較差異有統計學意義 (i2=6.01,P＜0.05),癌變的大腸腺瘤組和正常組的比較差異有統計學意義 (i2= 16.8,P＜0.01)。見表1。

2.2 AKT2與大腸腺瘤臨床病理因素的關系

各組織學類型間比較,AKT2陽性表達率無顯著性差異(P＞ 0.05)。高危性腺瘤和低危性腺瘤相比,AKT2陽性表達率升高,差異有統計學意義 (P ＜0.05);見表 2。

表1 AKT2在不同大腸組織中的表達

3 討論

AK T2是生長因子受體酪氨酸激酶下游重要的調節靶點,是磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信號傳導通路的中心環節。PI3K/AKT2通路被證實參與了多種腫瘤的發生發展。AKT2以直接或間接的方式影響下游多個因子,這些因子參與調控細胞存活和蛋白翻譯。目前的研究發現 AKT2是腫瘤發生的重要信號分子,其異常表達在人類的惡性腫瘤的發生發展和演進過程中發揮重要作用。AKT2主要通過兩條路徑來調節細胞存活:(1)直接參與細胞凋亡。AKT可減弱細胞內在的凋亡途徑,和外在的凋亡途徑不同之處是內在途徑與細胞內線粒體體系密切相關。(2)干擾部分基因轉錄。許多細胞凋亡刺激素要求啟動細胞內一些基因表達來誘導細胞凋亡,AKT可干擾促進細胞凋亡的轉錄程序,或通過激活生存轉錄程序來抑制細胞凋亡。再者磷酸化的 AKT可抑制 KB抑制因子激酶(ILK),啟動核因子 Kb(N FkB)轉錄功能,促進 bcl-xL及凋亡蛋白抑制子(IAP)的表達來維持細胞生存。

在多種腫瘤組織中都有 AKT2的過度表達或活化,最新研究結果證明,在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌等多種腫瘤中存在 AKT的持續激活[1～3]。AK T2在不同結直腸組織中的表達 Roy[4]等發現,57%的散發型結腸癌和結腸腺瘤AKT蛋白過量表達和活化 ,并以 AKT2亞型為主 ,提示其可能參與結腸上皮細胞早期增生癌變過程,是結直腸癌變過程的一個早期事件。翟云芝[5]等發現 AKT2在結直腸癌組織中高表達,陽性率達57.9%,而在正常大腸黏膜組織中陽性率僅為17.5%,兩者對比有統計學差異,提示 AK T2可能在結直腸癌的發生發展中有重要作用。本實驗顯示 AKT2在正常大腸黏膜組的陽性表達率為10.0%、大腸腺瘤組的陽性表達率42.5%、癌變的腺瘤組織中的陽性表達率73.3%呈逐漸升高的趨勢,且在大腸腺瘤與癌變腺瘤之間的陽性表達率差異具有顯著性,說明在大腸腺瘤向腺癌方向的轉化過程當中,AKT2起到了重要的作用,可能是大腸腺瘤發生癌變的早期信號。AKT2的表達率與大腸腺瘤的組織學類型無相關性,而隨著大腸腺瘤的危險性增高陽性表達率逐漸升高。本試驗表明在大腸腺瘤的惡性轉化過程中 AKT2發揮了重要作用。檢測 AKT2的表達可能做為臨床監測大腸腺瘤的惡性轉化的指標,并為大腸癌的早期診斷提供新的思路和理論依據。

[1]Yuan ZQ,Sun M,Feldman Rl,et al.Frequent activation of AKT2and induction of apoptosis by inhibition of phosphoinositide-3-OH ldnase/Ast path Way in human ovarian cancer[J].Oncogene,2000,19(19):2324-2330

[2]Sun M,Wang G,Paciga JE,et al.AKT1YKBalpha kinase is frequently elevated in human cancers and its constitutive activation is required for oncogenic29 transformation in N IH3T3 cells[J].Am J Pathol,2001,159(2):431-437

[3]Altomare DA,Tanno S,De Rienzo A,et al.Frequent edivation of AK T2 kinase in human pancreatic carcinomas[J].J Cell Biochem,2002,87(4):470-476

[4]Roy HK,Olusola BF,Clemens DL,et al.AKT proto-oncogene overexpression is an early event during sporadic colon carcinogenesis[J].Carcinogenesis,2002,23(1):201-205

[5]翟云芝,陳振東.Ezrin和 AKT2在大腸癌組織中的表達和臨床意義 [J].臨床腫瘤學雜志,2009,14(1):25-28