mdm2單核苷酸多態與子宮內膜癌易感性研究

楊 微,修子鈞

(佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003)

子宮內膜癌已經成為婦女生殖道三大惡性腫瘤之一。我國雖然是子宮內膜癌低發的國家,但是近年來其患病率卻呈升高趨勢。子宮內膜癌大約占婦女惡性腫瘤的7%左右,每年其新發病例及死亡病例數量分別占婦女惡性腫瘤的3.9%和1.7%[1]。不同地區間的經濟水平和醫療服務水平不盡相同,所以子宮內膜癌早期診斷和治療的水平也相應不同,預后也不盡相同。有研究顯示 mdm2癌基因 (Mouse double-minute 2 homologue,mdm2)單核苷酸多態(single nucleotide polymorphisms,SN Ps)與子宮內膜癌的發生存在相關性。這一發現促使我們尋找是否存在其他的 mdm2癌基因 SN Ps位點與子宮內膜癌的發生存在相關性,為尋找子宮內膜癌發生標志物提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

擬收集 150例子宮內膜癌患者的外周血,180例正常對照組的外周血。患者均經由佳木斯大學附屬第一醫院鑒定,患者都具有知情同意書。所有參與實驗人員間均無遺傳關系,且為漢族人,分別來自佳木斯市及周邊地區。患者沒有組織類型和年齡的限制。選取沒有癌癥的婦女作為對照組,其居住區域和年齡與患者組相匹配。清晨抽取每人靜脈血3mL。

1.2 實驗方法

試劑盒提取全基因組 DNA,合成引物,聚合酶鏈式反應(PCR)擴增。隨后將擴增產物及上游引物一同寄往上海生物工程有限公司北京分公司進行測序,之后對結果進行 SN Ps分型,統計分析子宮內膜癌患者和正常對照組之間 SNPs是否具有顯著差異。

1.3 統計學處理

采用 SPSS18.0分析軟件進行卡方檢驗,P＜0.05有顯著性意義。

2 結果

2.1 rs3730656位點

表1 子宮內膜癌組與正常對照組 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(rs3730656)

表2 子宮內膜癌組和對照組 rs3730656位點基因型及等位基因頻率比較

圖3 rs3730656GG

2.2 rs74099445位點

表3 子宮內膜癌組與正常對照組 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(rs74099445)

表4 子宮內膜癌組和對照組 rs74099445位點基因型及等位基因頻率比較

3 討論

子宮內膜癌,又被稱為子宮體癌,是指女性原發于子宮內膜上皮的一種惡性腫瘤,且大多數來源于子宮內膜腺體,還被稱為子宮內膜腺癌和子宮內膜樣腺癌,是女性生殖道常見三大惡性腫瘤之一,其發病率約占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%,所有女性惡性腫瘤的7%,且隨著年齡增加發病率增加。近年來,世界范圍內的子宮內膜癌發病率有上升的趨勢,且發病率僅次于子宮頸癌,5年生存率卻有下降趨勢。子宮內膜癌發病情況通常與患者年齡、是否絕經密切相關。子宮內膜癌在歐美發達國家其發病率已經占婦科惡性腫瘤的首位。進來我國經濟發展取得較大進步、民眾生活習性及飲食習慣變化較大、激素替代治療較多等諸多因素使得內膜癌的發病率上升趨勢明顯,切呈現年輕化趨勢,儼然已成為嚴重威脅我國女性生殖道惡性疾病之一。內膜癌的高危因素較多,比如肥胖、糖尿病、高血壓、不孕、絕經延遲及長期單純應用雌激素刺激等。內膜癌的高發年齡在50～ 60歲,主要表現為患者陰道不規則性出血,首次診斷時Ⅰ期占72%,Ⅱ期占 12%,Ⅲ期占13%,Ⅳ期占 3%。令人可喜的是早發現并早治療能夠預后良好。所以子宮內膜癌的預防和篩查策略也有所改變,尋找腫瘤標記物成為研究重點與熱點[1]。

目前,子宮內膜癌的主要診斷工具包括分段診斷性刮宮、子宮內膜活檢、TVS、宮腔鏡檢查和近些年來為大家所重視的子宮內膜細胞學檢查。盡管子宮內膜癌的篩查手段有多種多樣,但是或多或少都存在一些弊端。近年來尋找腫瘤標志物的研究成為熱點,相應的子宮內膜癌標志物的尋找也成為子宮內膜癌早發現的重要途徑之一。子宮內膜癌的發生是多個基因相互作用的結果,其中原癌基因的激活,例如mdm2是其重要的原因之一。

p53基因是一種抑癌基因,當 DNA損傷或者有其他細胞應激時 p53可以啟動細胞周期阻滯和細胞凋亡。mdm2是一個關鍵的 p53調節基因,該基因編碼的蛋白通過與 p53蛋白結合形成 mdm2-p53負反饋環。mdm2的過度表達可導致腫瘤蛋白 p53過度失活,降低其腫瘤抑制功能。mdm2具有 E3泛素連接酶的活性,可以結合腫瘤 p53蛋白,使其降解。mdm2還通過與包括視網膜母細胞瘤-1和核糖體蛋白-L5在內的其他蛋白質相互作用,從而影響細胞周期、細胞凋亡和腫瘤發生[2～4]。

有研究顯示 mdm2癌基因 SNPs與子宮內膜癌的發生存在相關性。這一發現促使我們尋找是否存在其他的 mdm2癌基因 SN Ps位點與子宮內膜癌的發生存在相關性,為尋找子宮內膜癌發生標志物提供實驗依據。在本實驗中我們選擇了mdm2基因 3,-UTR區的兩個 SNPs位點:rs3730656和rs74099445。對比子宮內膜癌組和正常對照組的這兩個 SNPs位點是否存在差異。結果表明 rs3730656差異不顯著,rs74099445差異顯著。基因 3,-U TR區通常是 MicroRN As(miRN As)的結合位點。MicroRNAs是一大類長21～24bp非編碼單鏈 RNAs分子。哺乳動物中成熟 miRN As往往通過不完全的堿基互補與靶 mRN As 3,-UT R結合,調節其穩定性和翻譯效率。作為一類非編碼 RN As,miRN As能夠在轉錄后水平調節基因的表達,通過特異性結合靶 mRNAs的 3′-UTR區,導致靶基因翻譯抑制或 mRN A降解。這就提示我們 mdm2癌基因3,-UTR區的 rs74099445位點突變很有可能影響到了某種 miRN As與3,-UT R區結合的效率,影響到了 mdm2的表達,從而影響到了 p53的活性,降低了腫瘤抑制功能,增加了子宮內膜癌的患病風險[5～7]。

在分子遺傳學水平上研究子宮內膜癌的發病機制不斷取得新的進步,婦科醫師對子宮內膜癌的癌前病變以及早期診斷的認識和要求更加深入和迫切[8]。本實驗證明 mdm2基因與子宮內膜癌發生、發展關系密切。mdm2基因 SNPs位點與子宮內膜癌易感性的相關性研究將為子宮內膜癌標志物的探索提供一種可能,子宮內膜癌標志物的研究將為子宮內膜癌發生、發展提供早期診斷依據,改善現有子宮內膜癌的預防和篩查策略。

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