HPLC法測定黃連單煎液中小檗堿的含量

徐丹丹

哈爾濱商業大學09級制藥工程中外二班 150076

黃連為毛茛科的多年生草本植物，祖國中醫常將其干燥根莖入藥，性寒，味極苦，入心肝、腎、胃及大腸經，有顯著清熱燥濕與瀉火解毒之功效，同時還具光譜抗生素、抗癌、抗放射以及促進細胞代謝的作用。特別是在近些年，黃連的藥理及臨床研究又表現有不同的突破與進展，其應用范圍也在不斷擴大［1］。然而在這些運用中急需出臺相關標準以供綜合評價其品質提供參考，基于此，筆者選擇黃連單煎液作為本研究既定品種，并以其主要有效成分生物堿～小檗堿作為含量標準項［2］，采用HPLC法進行考察，現報道如下。

資料與方法

儀器:島津LC～10A高效液相色譜儀，Sartorius分析天平，SPD－6AV紫外分光光度計，SB3200型超聲溶解儀。

試藥:小檗堿對照品由中國藥品生物制品鑒定所提供，純度99.9%;黃連單煎液為筆者在實習單位自制;甲醇與乙腈均為色譜純，實驗用水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

方法與結果

色譜條件:色譜柱:Kromasil C18 柱(200mm ×4.6mm，5μm);流動相:乙腈～0.05%磷酸二氫鉀(35:65，以磷酸將PH調節到3.0);柱溫:30℃;流速:1.0ml/min;檢測波長:345nm(采用對照品溶液進行紫外分光光度檢測，于345nm處有最大吸收峰);理論塔板數按小檗堿峰計算應不低于2800。對照品溶液制備:對照品溶液:精密稱定小檗堿對照品5mg，以甲醇充分溶解后定容至5ml并搖勻，取此液1ml置于5ml量瓶，再次定容至刻度搖勻即得對照品溶液，其濃度約為0.2mg/ml。供試品溶液:精密量取自制黃連單煎液30ml并置于帶塞的50ml錐形瓶中，加甲醇后超聲半小時，再以甲醇定容至刻度后搖勻即得供試品溶液。陰性對照溶液:剔除黃連后以原方按供試品溶液的制備方法制的陰性對照溶液。取以上3種溶液各10μl分別在上述色譜條件下進樣后檢測發現，小檗堿峰能與陰性對照溶液的所有色譜峰分離良好，故可排除實驗干擾，見圖1。

表3 黃連單煎液含量測定穩定性試驗

圖1 黃連單煎液干擾性實驗色譜圖

線性實驗:精密量取對照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別于10ml量瓶中定容后各自取10μl進樣，對濃度值(C)與峰面積(A)進行線性回歸，結果顯示小檗堿在20～100μg/ml的濃度范圍內具良好線性關系，見表1。

表1 黃連單煎液含量測定線性試驗

精密度試驗:精密量取對照品溶液3.0ml，置于10ml量瓶中定容后分別取10μl連續進樣5次，均測量各自峰面積并計算平均值與RSD，結果顯示精密度試驗結果良好，見表2。

表2 黃連單煎液含量測定精密度試驗

穩定性試驗:試驗進樣液與量同精密度試驗，但進樣時間分別選取在制得溶液后的0h，2h，6h，12h，24h等5個時間點，通過比較各時間點峰面積的變化情況及計算RSD，結果顯示在24h內小檗堿含量是比較穩定的，見表3。

重復性試驗:取同一次自制的黃連單煎液5份，并按供試品溶液的制備方法制得進樣液，對每份單煎液樣品進行含量的測定并就算RSD值，結果顯示本方法具有良好的可重復性，見表4。

表4 黃連單煎液含量測定重復性試驗

回收率試驗:在重復性試驗基礎上，利用其溶液作為回收率試驗試液，精密稱取一定質量的小檗堿加入到在這些溶液當中后再同上法進樣，測定出含量后進行回收率的計算，結果顯示平均回收率為99.75%，回收率試驗表現良好，見表5。

表5 黃連單煎液含量測定回收率試驗

結 論

綜上所述，黃連單煎液的主要成分為小檗堿生物堿，經以上試驗可知采用本方法測定其含量精密可靠，且重復性好，提示可在此類黃連單煎液中將HPLC法作為其質量標準含量測定項下的理想方法。

1 吳佳.HPLC法測定不同產地黃連中小檗堿的含量［J］.長沙民政職業技術學院學報，2010，17(2):132 ～134.

2 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京:化學工業出版社，2010.