酶聯免疫吸附法在沙門氏菌檢測中臨床應用

盛小皓

四川省阿壩州九寨溝縣疾病預防控制中心 623400

為了探討酶聯免疫吸附法在沙門氏菌檢測中臨床應用效果，本研究于2012年1月～2012年6月對我院接受的臨床樣本應用沙門氏菌特異性單抗3～47～26建立競爭ELISA法來進行沙門氏菌檢測，通過與國標法對樣品進行比較檢測，分析該方法在沙門氏菌檢測中的敏感性、特異性和準確性，現將分析結果報道如下。

資料與方法

樣本來源:2012年1月～2012年6月選擇我院接受的臨床糞便樣本105份。

檢測方法:①用碳酸鹽緩沖液(0.05mol/L pH9.6)稀釋腸炎沙門氏菌LPS～poly～L～Lysine 80g/L包被96孔酶標板，100μl/孔，用封板膜封板后置37℃溫育1h。②小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。③取未致敏的40孔酶標板，將樣品和酶標抗體室溫作用90min［1］。④取包被好的酶標板，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。⑤將作用后的樣品與酶標抗體混合液移入包被板，每樣加兩孔，100μl/孔。留下3孔分別設陽性、陰性、空白對照。用封板膜封板后置37℃溫育1h。⑥取包被好的酶標板，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。⑦取出酶標板，迅速加入50μl終止液，加入終止液后應立即在酶標儀上測定OD490光吸收讀值。⑧以國標法作為金標準進行ELISA方法的敏感性和特異性分析，另外采用稀釋法進行國標法和ELISA試驗的檢測限測定［2］。

數據處理:所有統計均在Windows SPSS17.0中完成，以抑制率的大小判定樣品的陰陽性，抑制率按以下公式計算樣品抑制率(%)=(陰性對照 OD值 ～樣品 OD值)/陰性對照 OD值 ×100%。敏感性為真陽性/(真陽性+假陰性)，特異性為真陰性/(真陰性+假陽性)，準確性為(真陽性+真陰性)/總數。

結 果

檢測限的確定結果:國標法的檢測限為4.9×101CFU/g糞便;C～ELISA為5.0×104CFU/g糞便。

樣品的檢測結果:ELISA法檢測的敏感性為94.4%，特異性為97.7%，準確性為97.1%。見表1。

表1 樣品的ELISA檢測結果［份］

討 論

沙門氏菌(Salmonella)沙門氏菌病屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌，是中一種重要的人畜共患病原菌，是細菌性食物中毒的重要致病菌［3］。沙門氏菌屬有的專對人類致病，有的只對動物致病，也有對人和動物都致病。可以使人類發生傷寒、副傷寒、敗血癥、胃腸炎和食物中毒，給國家經濟造成巨大損失，同時嚴重威脅著人們的身體健康。所以，沙門氏菌病是公共衛生學上具有重要意義的人畜共患病之一;在公共衛生、食品衛生、畜牧獸醫和出入境檢驗檢疫中均有重要意義。酶聯免疫吸附法(Enzyme linked immnosorbent assay，ELISA)是1971年ENGVELL等建立在免疫酶基礎上的一種新型免疫測定技術，是目前最常見的檢測手段之一。為了探討酶聯免疫吸附法在沙門氏菌檢測中臨床應用效果，本研究于2012年1月～2012年6月對我院接受的臨床樣本應用沙門氏菌特異性單抗3～47～26建立競爭ELISA法來進行沙門氏菌檢測，通過與國標法對樣品進行比較檢測，分析該方法在沙門氏菌檢測中的敏感性、特異性和準確性。研究結果顯示國標法的檢測限為4.9×101CFU/g糞便;C～ELISA為5.0×104CFU/g糞便。ELISA法檢測的敏感性為94.4%，特異性為97.7%，準確性為97.1%。上述研究結果表明酶聯免疫吸附法在沙門氏菌的臨床檢測中具有良好的特異性、準確性和敏感性，值得推廣使用。

1 石穎，楊保偉，師俊玲，等.陜西關中畜禽肉及涼拌菜中沙門氏菌污染分析［J］.西北農業學報，2011，20(7):22 ～27.

2 張江英.沙門氏菌檢測方法的研究進展［J］.家禽科學，2012(10):47～50.

3 孫園園，趙鵬，劉駿，等.沙門氏菌檢測方法研究進展［J］.中國畜牧獸醫，2011，38(1):218 ～221.