南平市延平區(qū)部分規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)初步調(diào)查

王有木 黃劍鋒 李 鶴 盧華龍 陳 聰

（福建省南平市延平區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 353000）

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，豬是該病的主要宿主和傳染源，健康豬與患豬、帶毒豬直接接觸可感染該病。通常引起妊娠母豬流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎和產(chǎn)弱仔；初生仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，感染率和死亡率可達(dá)100%，成年豬感染后多耐過，不發(fā)病呈隱性感染，造成長(zhǎng)期帶毒、排毒，成為最危險(xiǎn)的傳染源，嚴(yán)重影響種豬場(chǎng)生產(chǎn)。該病廣泛分布于世界各地，已有50 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道該病的流行，給養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成很大威脅。我國(guó)自1947年首次報(bào)道該病以來，隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化規(guī)模化的發(fā)展，已有20 多個(gè)省市報(bào)道發(fā)生了該病，并在許多種豬場(chǎng)呈暴發(fā)流行趨勢(shì)，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失［1］。

為了解延平區(qū)豬偽狂犬病的感染情況，筆者于2013年1～6月，抽取10個(gè)使用豬偽狂犬gE 基因缺失疫苗免疫的規(guī)模豬場(chǎng)共366 份血清樣品進(jìn)行了感染情況的檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 法國(guó)LSI 偽狂犬病gE 抗體檢測(cè)試劑盒（ADC-gE-Ab），診斷試劑購(gòu)自北京天之泰生物技術(shù)有限公司，診斷試劑盒（批號(hào)：2-PRVGEC-004、有效期：2014-06）。德國(guó)Transferpette 移液器；北京普朗DNM-9602 酶標(biāo)儀和TECANM8/2R 洗板機(jī)；恒溫水浴鍋；離心機(jī)。

1.2 樣品來源 耳靜脈采集延平區(qū)免疫豬偽狂犬病gE 基因缺失疫苗的10個(gè)不同豬場(chǎng)豬血樣共366 份，采集后直立擺放，放室溫待血清析出分離血清，-20 ℃冷凍保存待檢。

1.3 操作步驟與判定標(biāo)準(zhǔn) 首先將待檢血清和豬偽狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒恢復(fù)到室溫（18～25 ℃），然后按照產(chǎn)品說明書要求進(jìn)行孵育和操作。

1）取預(yù)包被的微孔板，用樣品稀釋液將待檢樣品、對(duì)照血清1：1 稀釋后加入板孔中，每孔100μL。其中陰性、陽性對(duì)照各設(shè)2 孔，對(duì)照孔內(nèi)加入陰性、陽性血清各50μL，剩余孔內(nèi)加待檢樣品50μL，每孔再加入稀釋液50μL，輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37 ℃溫育60 min。

2）用洗滌液洗板4 次，300μL/孔，最后一次在不掉屑干凈吸水紙上拍干。

3）每孔加酶標(biāo)二抗（抗豬IgG-HRP 結(jié)合物）100μL，置37 ℃溫育30 min。

4）洗滌4 次，方法同2）。

5）每孔加底物100μL，混勻，18～25 ℃避光顯色15 min。

6）每孔加入終止液100μL，混勻，置酶標(biāo)儀450 nm 處測(cè)各孔OD 值。30 min 內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

7）結(jié)果計(jì)算：用INH%來說明檢測(cè)結(jié)果。INH%=［（陰性對(duì)照平均值-樣品OD450值）/（陰性對(duì)照平均值）］×100%。

8）試驗(yàn)成立標(biāo)準(zhǔn)：陰性對(duì)照OD450平均值-陽性對(duì)照OD450平均值＞0.6，陽性對(duì)照阻斷值＞60%，試驗(yàn)結(jié)果成立。如果陰性對(duì)照OD450平均值-陽性對(duì)照OD450平均值≦0.6，試驗(yàn)結(jié)果不成立，樣品應(yīng)重新檢測(cè)。

9）結(jié)果判斷：INH%＜40為陰性，40≤INH%≤45為可疑，INH%＞45為陽性。

本次調(diào)查的血清大部分來自注射了基因缺失苗的規(guī)模化豬場(chǎng)，所以，PRVgE 抗體陽性可以判定為偽狂犬病野毒感染。在進(jìn)行豬場(chǎng)結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，只要豬場(chǎng)有一個(gè)樣品判定為陽性，則該場(chǎng)判定為偽狂犬病野毒陽性場(chǎng)。

2 結(jié) 果

檢測(cè)10個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)血清樣品366 份，有7個(gè)豬場(chǎng)檢出陽性，檢出陽性樣品66 份；豬場(chǎng)陽性率為70%，樣品陽性率為18.03%，見表1。

3 結(jié)論與分析

1）延平區(qū)的豬群基本進(jìn)行過該病的疫苗免疫，通過對(duì)10個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，該病陽性豬場(chǎng)數(shù)為7個(gè)，豬場(chǎng)陽性率為70.00%，檢測(cè)樣品數(shù)366份，樣品陽性數(shù)66 份，樣品陽性率為18.03%，說明豬偽狂犬病在延平區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)中普遍存在。豬體內(nèi)存在偽狂犬病病毒是潛在的發(fā)病因素，結(jié)果顯示，延平區(qū)豬偽狂犬病野毒感染場(chǎng)陽性率從0%至61%不等。由此表明，疫苗接種雖然能有效降低該病的發(fā)生率、減少病毒的散播，但大部分豬場(chǎng)并沒有徹底根除該病，部分免疫豬仍存在排毒的可能，給易感豬造成嚴(yán)重的威脅。

表1 延平區(qū)部分豬場(chǎng)豬偽狂犬病野毒抗體檢測(cè)結(jié)果

2）該次調(diào)查為初次調(diào)查，缺乏本區(qū)對(duì)比數(shù)據(jù)，今后將繼續(xù)開展該項(xiàng)調(diào)查，進(jìn)一步摸清延平區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病野毒感染情況。但根據(jù)陳如敬等［2］2009年對(duì)福建省部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病感染情況調(diào)查結(jié)果，檢測(cè)南平市豬偽狂犬病野毒抗體，豬場(chǎng)陽性率為100%（6/6），樣品陽性率為52.00%（82/158），本試驗(yàn)與該結(jié)果相差不大，說明延平區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病野毒感染情況普遍存在。本次調(diào)查檢測(cè)樣品均為母豬和公豬，在豬群中，病毒可通過鼻分泌物傳播，但另?yè)?jù)報(bào)道經(jīng)乳汁和精液傳播也是可能的途徑［3］。因此，PR的防疫和凈化工作在延平區(qū)仍是任重而道遠(yuǎn)，在這種高偽狂犬病野毒感染率的情況下，對(duì)于豬場(chǎng)而言，特別是對(duì)外供應(yīng)種豬和精液的種豬場(chǎng)，應(yīng)將PR的防疫和凈化工作及早納入日程，同時(shí)，做好常規(guī)疫病防治，采取綜合防治措施，加強(qiáng)生物安全和飼養(yǎng)管理等。

［1］李春華，王英，蔣鳳英，等.豬偽狂犬病研究進(jìn)展［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29（3）：68.

［2］陳如敬，王隆柏，魏宏，等.福建省部分地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病感染情況調(diào)查［J］.養(yǎng)豬，2010（1）：39-40.

［3］李國(guó)平，周倫江，王全溪.豬傳染病防控技術(shù)［M］.福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，2012：128.