IL－23對潰瘍性結腸炎患者外周血單個核細胞分泌IL－17、IFN－γ的影響及意義

譚海成

（北京市順義區中醫院綜合內科，北京 101300）

潰瘍性結腸炎（UC）為慢性非特異性結腸炎癥性疾病，病因和發病機制尚不完全清楚，目前認為免疫調節異常、腸道感染、腸壁黏膜屏障缺損等因素共同參與了UC的發生發展［1］。免疫系統分泌的細胞因子IL－23具有復雜的生物學功能，研究［2］表明IL－23在炎癥性腸病患者腸黏膜中的表達增高，推測其在UC的發生發展中發揮重要作用。本研究旨在觀察IL－23在UC患者外周血中的表達，及其對UC患者外周血單個核細胞（PBMCs）分泌IL－17、IFN－γ的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

入組患者來自2008年12月～2011年9月期間本院收治的60例活動期UC患者（UC組），其中男40例，女20例，年齡28～61歲，平均（43.3±5.1）歲。同期健康體檢者40例為對照組，其中男23例，女17例，年齡26～65歲，平均（40.1±4.3）歲。兩組患者年齡、性別等一般資料差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有患者清晨取肘靜脈血3mL，送實驗室進行PBMCs分離與培養，基本步驟為：1）1640培養基配制，細胞分離液及培養液平衡溫度，工作臺紫外線消毒。靜脈血疊加于淋巴細胞分離液上離心后吸取單核細胞，離心，加入含有10% 胎牛血清的RPMI1640；兩個細胞培養皿中均加入1mL細胞懸液，其中1個培養皿加入LPS（1μg／mL）；培養48h后收集上清液，ELISA法檢測上清液中IL－23含量。2）主要分離步驟（參考步驟1）：分離PBMCs后，兩個培養皿中加入細胞懸液后，其中1個加入IL－23（50ng／mL，5μL），培養72h后，收集上清液，ELISA法檢測上清液中IL－17、IFN－γ含量。

1.3 統計學方法

采用SPSS 10.0統計軟件進行數據處理，兩組均數比較用t檢驗，計量資料用均數±標準差（±s）表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組PBMCs上清液中IL－23表達水平比較

UC組（未經LPS刺激或經LPS刺激）上清液中IL－23水平均明顯高于對照組（P＜0.01）；兩組患者經LPS刺激后，上清液中IL－23表達水平均明顯高于LPS刺激前（P＜0.01）（見表1）。

表1 兩組PBMCs上清液中IL－23表達水平比較（±s，pg／mL）

表1 兩組PBMCs上清液中IL－23表達水平比較（±s，pg／mL）

與對照組比較，＊＊P＜0.01；與本組未經LPS刺激比較，＃＃P＜0.01

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2.2 IL－23對兩組患者IL－17及IFN－γ表達水平的影響

未經IL－23刺激的 UC組與對照組之間IL－17、IFN－γ表達水平差異有統計學意義（P＜0.01），UC組明顯高于對照組；IL－23刺激后兩組之間IL－17、IFN－γ表達水平，差異有統計學意義（P＜0.01），UC組明顯高于對照組。各組經IL－23刺激后，IL－17、IFN－γ表達水平均顯著高于IL－23刺激前（P＜0.05或P＜0.01）（見表2）。

表2 IL－23對兩組患者IL－17及IFN－γ表達水平的影響（±s，pg／mL）

表2 IL－23對兩組患者IL－17及IFN－γ表達水平的影響（±s，pg／mL）

與對照組比較，＊＊P＜0.01；與本組未經IL－23刺激比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01

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3 討論

UC主要是侵及結腸黏膜的慢性非特異性炎性疾病，常始自左半結腸，可擴散至結腸近端乃至全結腸。UC的發病與多種因素密切相關，目前發病原因尚不明確。感染學說認為，某些細菌和病毒在UC的發病過程中發揮重要作用；免疫學說認為，自身免疫介導的組織損傷是UC發病的重要因素之一。免疫調節、免疫系統所分泌的細胞因子在UC發生發展中的作用一直為臨床研究的熱點。近期研究［3］發現，IL－23在UC的發病過程中發揮重要作用。IL－23為IL－12分子家族，具有十分復雜的生物學功能。本研究通過檢測UC及對照組患者PBMCs上清液中IL－23的表達以及加入LPS后對IL－23生成的影響，探討IL－23在UC中的作用。研究結果顯示，UC患者與對照組患者IL－23表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.01），UC患者明顯高于對照組，提示IL－23在UC的發病中發揮一定作用。感染是UC的主要致病因素，LPS是IL－23產生的潛在因素［4］。本研究中進一步檢測了LPS對IL－23表達水平的影響，結果顯示，經LPS刺激后兩組患者IL－23水平均較刺激前升高，提示腸道細菌感染可刺激腸黏膜內產生IL－23引起炎癥性病變。

有報道［5］稱，IL－23與 CD4＋T 細胞、CD8＋T 細胞、NK細胞、單核巨噬細胞上的受體相結合后發揮相應的免疫學效應。IL－23通過作用于CD4＋T細胞，誘導其產生IFN－γ，作用于TH17細胞誘導產生IL－17［6］。TH17主要分泌的細胞因子為IL－17，已被證實在自身免疫、感染等疾病的發病中發揮重要作用，而IL－23在促進IL－17分泌的過程中必不可少［7］。IL－23／IL－17軸是今年來提出的，IL－23通過作用于分化成熟的TH17細胞促進IL－17的分泌，近期的研究［8］表明IL－23／IL－17軸在多種自身免疫性疾病中發揮重要作用。

IFN－γ為TH1細胞分泌的促炎性細胞因子，可以通過活化NK細胞發揮抗感染、抗腫瘤等生物學活性。有研究［9］表明，結腸炎大鼠的結腸組織勻漿中存在高水平的IFN－γ，而使用IL－23抗體后可顯著降低IFN－γ的水平。本研究通過檢測IL－23對 UC患者PBMCs上清液中IL－17、IFN－γ的影響，初步探討了IL－23在UC中的作用機制。研究結果表明，IL－23可誘導UC患者分泌大量IFN－γ，提示IFN－γ是炎癥的重要指標之一，是導致UC發病的重要因素。研究還發現UC患者較正常對照組IL－17明顯升高，經IL－23刺激后IL－17水平明顯高于刺激前，提示IL－23可刺激IL－17高水平分泌在UC發病中發揮重要作用。綜上所述，IL－23通過誘導IL－17和IFN－γ分泌參與了慢性結腸炎的炎癥發生，在慢性結腸炎的形成過程中發揮重要作用。

［1］Dai SX，Wu G，Zou Y，et al.Balance of CD8＋CD28＋／CD8＋CD28－T lymphocytes is vital for patients with ulcerative colitis［J］.Dig Dis Sci，2013，58（1）：88－96.

［2］Hayatbakhsh MM，Zahedi MJ，Shafiepour M，et al.IL－23receptor gene rs7517847and rs1004819SNPs in ulcerative colitis［J］.Iran J Immunol，2012，9（2）：128－135.

［3］Geremia A，Jewell DP.The IL－23／IL－17pathway in inflammatory bowel disease［J］.Expert Rev Gastroenterol Hepatol，2012，6（2）：223－237.

［4］馬小彤，吳克復，張秀軍，等.脂多糖和金黃色葡萄球菌對IL－23，IL－12表達的調控［J］.中國免疫學雜 志，2006，22（1）：33－36.

［5］Krajina T，Leith?user F，M?ller P，et al.Colonic lamina propria dendritic cells in mice with CD4＋T cell：induced colitis［J］.Eur J Immunol，2003，33（4）：1073－1083.

［6］范艷瑩，吳長有.細胞因子直接誘導正常人CD4＋T細胞產生IL－17和IFN－γ［J］.細胞與分子免疫學雜志，2007，23（10）：914－916，920.

［7］Kimura A，Naka T，Kishimoto T.IL－6－dependent andindependent pathways in the development of interleukin 17－producing T helper cells［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2007，104（29）：12099－12104.

［8］羅家明，秦新月，陳黎燕，等.甲基強的松龍抑制實驗性自身免疫性腦脊髓炎IL－23／IL－17軸機制研究［J］.中國神經精神疾病雜志，2008，34（6）：345－348.

［9］Hue S，Ahern P，Buonocore S，et al.Interleukin－23drives innate and T cell－mediated intestinal inflammation［J］.J Exp Med，2006，203（11）：2473－2483.