芪芍安胃膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

穆傳武

(連云港市中醫(yī)院，江蘇連云港 222004)

芪芍安胃膠囊是本院新研制中藥復(fù)方制劑，由黃芪、黨參、當(dāng)歸、白芍、茯苓、干姜、畢澄茄、香附、白術(shù)、陳皮、甘草等組成，具有健脾益氣、溫中和胃、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的功效，適用于胃隱痛，喜按喜暖，食后脹悶，痞滿少食，便溏，乏力，舌質(zhì)淡紅，苔薄白或有齒痕，脈沉細(xì)。為了控制該制劑的質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)［1-4］對黃芪、白芍、枸杞子和甘草進(jìn)行了薄層色譜鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法測定了制劑中芍藥苷的含量，建立了可靠、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Waters-2695型液相色譜儀，Waters-2996二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站;色譜柱:Phenomenex C18 Gemini(250 ×4.6 mm，5 μm);芍藥苷(批號0736-200219)、黃芪、當(dāng)歸、黨參、甘草、陳皮和香附等對照藥材均購自中國藥品生物制品檢定所，芪芍安胃膠囊3批產(chǎn)品由連云港市中醫(yī)院生產(chǎn)并提供(批號分別為 120510、120904、130203)。甲醇、乙腈為色譜純，磷酸為優(yōu)級純，其他試劑為分析純。

2 定性鑒別

2.1 黃芪的薄層色譜鑒別 取本品5 g研細(xì)，加乙醇50 ml，加熱回流20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3%氫氧化鈉溶液15 ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15 ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干。殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材，同法制成對照藥材溶液。按芪芍安胃膠囊處方比例，除黃芪外的各種藥材按制劑工藝制成膠囊，并按上述方法制備陰性對照溶液備用。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。

2.2 芍藥的薄層色譜鑒別 取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。取本品適量，研細(xì)，稱取5 g，加乙醇60 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，用乙醚提取2次，每次20 ml，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。按芪芍安胃膠囊處方比例，除白芍外的各種藥材按制劑工藝制成膠囊，并按上述方法制備陰性對照溶液備用。吸取上述3種溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(5∶40∶15∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛濃硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對照液無此斑點(diǎn)。

2.3 甘草的薄層色譜鑒別 取本品5 g，研細(xì)，加乙醚40 ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，棄去醚液，藥渣加甲醇30 ml，加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材，同法制成對照藥材溶液。按芪芍安胃膠囊處方比例，除甘草外的各種藥材按制劑工藝制成膠囊，并按上述方法制備陰性對照溶液備用。照薄層色譜法(2010附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1～2 μl，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對照液無此斑點(diǎn)。

3 含量測定

3.1 色譜條件 采用Phenomenex C18 Gemini(250×4.6 mm，5 μm)色譜柱，柱溫為室溫，以乙腈0-2%磷酸溶液(22∶78)為流動(dòng)相;流速為1.0 ml/min;檢測波長:231 nm流速1 ml/min。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的芍藥苷對照品，加甲醇制成每1 ml含0.542 mg的溶液，搖勻，作為母液。精密量取對照品溶液5 ml，置50 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成0.0545 mg/ml芍藥苷溶液，分別精密吸取此對照品溶液 1、3、5、7、10 ml置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成 5.42，16.26，27.1，37.94，54.2 μg/ml的系列溶液。

3.3 供試品溶液的制備 取本品細(xì)粉約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醚30 ml，超聲處理10 min，濾過，棄去乙醚液，殘?jiān)鼡]去乙醚，加水飽和的正丁醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用水飽和正丁醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，作為供試品溶液。將除白芍的其他藥材按處方所述方法制成陰性供試品，用同樣方法制成陰性供試品溶液。在相同色譜條件下進(jìn)樣，色譜圖見圖1。

3.4 系統(tǒng)適應(yīng)性考察 分別吸取芍藥苷對照液和各供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，理論板數(shù)以芍藥苷峰計(jì)，不低于2000;此時(shí)，芍藥苷峰與其它組分峰基線分離，分離度＞1.5，保留時(shí)間約為10.5 min。

3.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取5個(gè)不同濃度的對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，各進(jìn)2針，以進(jìn)樣量C(μg)對芍藥苷平均峰面積A進(jìn)行回歸處理，得回歸方程 C=3×106A+1240，r=0.9991，結(jié)果表明，指標(biāo)成分進(jìn)樣量在0.0542～0.542 μg之間線性關(guān)系較好。

3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為37.94 μg/ml的對照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果芍藥苷峰面積值的RSD=0.7%，表明進(jìn)樣的精密度良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取批號為120510的供試品溶液10 μl，每間隔2 h進(jìn)一針，連續(xù)考察10 h，結(jié)果芍藥苷峰面積值的RSD=1.8%，表明指標(biāo)成分在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 取批號為120510的芪芍安胃膠囊約2 g，共6份，精密稱定，分別置三角燒瓶中，各精密加入濃度為54.2 μg/ml的對照液5、10、15 ml，用“3.3”項(xiàng)下方法制得供試品溶液。吸取供試品溶液10 μl注入液相色譜儀中，采用隨行標(biāo)準(zhǔn)，外標(biāo)法定量，顯示加樣回收試驗(yàn)結(jié)果滿意。見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)

3.9 樣品測定

取3個(gè)批號芪芍安胃膠囊各約3 g，每批2份，精密稱定，分別按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。按上述色譜條件，分別吸取10 μl注入液相色譜儀，采用隨行標(biāo)準(zhǔn)，外標(biāo)法定量，結(jié)果滿意。

回收率等均較好，符合定量要求。根據(jù)測定結(jié)果，結(jié)合平均裝量，暫定每粒芪芍安胃膠囊中含白芍以芍藥苷(C23H28O11)計(jì)，不得少于0.05 mg(取3批平均含量的80%為其下限)。

圖1 芪芍安胃膠囊的色譜圖

本試驗(yàn)建立的黃芪、白芍、甘草鑒別專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，操作簡便。而香附、當(dāng)歸的鑒別，因陰性有干擾，專屬性不強(qiáng)，故未納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

本試驗(yàn)對芍藥苷含量測定方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，所建立的方法簡便、系統(tǒng)適用性、儀器的精密度、指標(biāo)成分的穩(wěn)定性、方法的重復(fù)性和加樣回收率等均較好，且專屬性較強(qiáng)，符合定量要求。

本試驗(yàn)建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于該制劑的質(zhì)量控制。

［1］ 沈志濱 ，朱俊訪.安神補(bǔ)腦膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，22(4)：12.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［3］ 曾惠芳，黃鳴清.調(diào)經(jīng)止血顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2005，16(5)：356.

［4］ 馮有龍，董小平.腎炎寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2005，19(5)：50.