IGF2R基因多態性與胃癌易感性的相關性

逄小紅 李效良 張國琴

(1.泰山醫學院，山東 泰安 271016;2.山東省泰山療養院，山東 泰安 271000)

胰島素樣生長因子2受體(insulin-like growth factor 2 receptor，IGF2R)與多種腫瘤的發生密切相關，是潛在的腫瘤抑制基因，對正性生長因子胰島素樣生長因子2(insulin-like growth factor 2，IGF2)降解和負性生長因子TGF-β1激活具有重要作用［1］。研究發現，人群中IGF2R基因codon 901(exon 6 C→G，Leu→Val)和 codon 2020(exon 40 A→G，Asn→Ser)具有單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism，SNP)。目前有關IGF2R基因多態性與腫瘤發病風險關系的研究尚不多見。因此，我們在華北地區開展了病例-對照研究，探討 IGF2R codon 901C/G和codon 2020 A/G基因多態性與胃癌易感性的關聯。

1 材料與方法

1.1 研究對象 105例胃癌患者為2007～2009年在當地兩所三甲醫院門診或住院就診的患者，均經胃鏡或手術切除病理活檢組織證實。其中男性57例，女性48例;年齡36～72歲，中位年齡52歲。對照組為235例同時期同一地區健康無血緣關系的漢族個體，男性102例，女性133例;年齡34～71歲，中位年齡50歲。均簽署知情同意書。兩組年齡、性別、吸煙和飲酒方面保持均衡可比。

1.2 DNA提取 采用酚/氯仿抽提、無水乙醇沉淀法提取外周血基因組DNA，-20℃備用。

1.3 IGF2R基因多態性的檢測 采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(polymerase chain reation-restriction fragment length polymorphism，PCRRFLP)方法確定codon 901和codon 2020基因型。引物設計由上海生工公司合成。codon 901:上游引物 5’-CACCAGGCGTTTGATGTTGG-3’，下游引物5’-CTCCAGCAAGGACCTGACTTTC-3’，擴增片段長度91 bp;codon 2020:上游引物5’-CGGCTGCTCTCCTCTCTCA-3’，下 游 引 物 5’-AAAGAGCCAACCATCGTCAAG-3’，擴增片段長度134 bp。PCR反應體系為20 μl，包括 100 ng模板 DNA，1 ×Go Taq反應緩沖液，0.8 mmol/L Dntp，0.5 μmol/L 上、下游引物，1.0 U Taq DNA聚合酶。反應條件為95℃ 3 min，95℃ 30 s，65℃ (codon 901)和 62℃ (codon 2020)50 s，72℃延伸1 min，共38 個循環;72℃延伸10 min。取15 μl PCR產物，分別用限制性核酸內切酶(NEB公司)共同溫浴(60℃)過夜，酶切產物通過2.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定基因型。

1.4 統計學方法 應用SPSS18.0統計軟件進行統計學處理。采用 χ2檢驗分析 codon 901和 codon 2020的基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律，采用非條件Logistic回歸模型，在校正混雜因素后，計算比值比(OR值)及95%可信區間(95%CI)，評價基因型與胃癌之間的相關性。所有的統計檢驗均為雙側檢驗，P≤0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病例組和對照組一般人口學特征的比較 兩組年齡、性別、有無吸煙和飲酒方面差異均無統計學意義(P＞0.05，表1)，具有可比性。

表1 兩組人群的一般人口學特征［n(%)］

2.2 IGF2R基因多態性與胃癌患病風險的相關性

Codon 901與codon 2020基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05)，見表2。在校正年齡、性別、吸煙史、飲酒史等混雜因素后，采用多因素Logistic回歸分析，病例組codon 2020基因型AG、GG分布頻率顯著低于對照組，且攜基因型AG、GG者胃癌發病風險分別是攜AA者的0.65倍(95%CI:0.38～0.89，P＜0.05)和0.72倍(95%CI:0.45～0.91，P＜0.05)。將 AG、GG 基因型合并計算，則其胃癌發病風險是AA基因型的0.68倍(95%CI:0.45～0.91，P＜0.05)。Codon901位點等位基因和基因型在兩組間分布的差異無統計學意義(P＞0.05)。

表2 IGF2R基因多態性與胃癌易感性的相關性［n(%)］

3 討論

IGF2R基因定位于6q26，全長約136 kb，含有48個外顯子，是陽離子依賴的細胞膜受體，選擇性地與細胞外促有絲分裂的IGF2結合，通過細胞吞噬作用將血液循環中多余的IGF2清除。IGR2R還可與細胞內負生長調節因子TGF-β1的前體pro-TGF-β1結合使之成為有活性的TGF-β1。因此IGF2R的缺乏或結構缺陷會引起IGF2水平增高，降低TGF-β1的水平。這些分子效應會促進細胞增殖，使細胞逃避凋亡，并促進浸潤和轉移。近年來研究顯示，IGF2R與多種腫瘤的發生密切相關，Oka Y等［2］發現在肝細胞癌中IGF2R基因座位有高頻率的雜合性缺失(LOH)，并且在相當比例的存留等位基因中存在點突變。在絨膜癌、結腸癌、膠質瘤等惡性腫瘤中也有一定比例的存留IGF2R基因的突變。因此IGF2R是潛在的腫瘤抑制基因。

人群中IGF2R基因DNA序列存在多態性，這種多態性改變可能修飾基因表達和(或)功能，從而與腫瘤遺傳易感性有關。Savage等［3］報道，IGF2R基因多個SNP與骨肉瘤的發病風險有關。Kong FM等［4］的研究結果也表明，肺鱗狀細胞癌中常見M6P/IGF2R突變。本研究表明，codon 2020基因多態性與胃癌的發生顯著相關，病例組等位基因(G)頻率顯著低于對照組(P＜0.05);與AA基因型相比，AG和GG基因型的罹患胃癌風險分別降低至0.65倍和0.72倍;將AG、GG基因型合并計算，則其胃癌發病風險是AA基因型的0.68倍。這些研究結果提示codon 2020基因型AG和GG能顯著降低胃癌的發病風險。朱忠政等［5］在對IGF2R基因與結直腸癌和肝癌遺傳易感性的相關性研究發現，IGF2R 2020Ser能顯著降低結直腸癌和肝癌的發病風險，IGF2R基因2020Ser等位基因是中國人群重要的結直腸癌和肝癌的遺傳保護分子。IGF2R 2020多態性改變在腫瘤發生中的確切作用及機制尚不清楚。Zhong等［6］報道，codon 2020位于胞外區15個部分重復結構域中的第14個結構域內。目前結構域14的生物學功能尚不清楚，因此有關codon 2020基因多態的功能學研究值得進行。本研究結果還顯示，Codon 901位點等位基因和基因型在兩組間分布的差異無統計學意義(P＞0.05)。提示codon 901與胃癌的患病風險無明顯關聯。

總之，IGF2R codon 2020多態性與胃癌的易感性明顯相關，2020 G等位基因是中國人群重要的胃癌遺傳保護分子，可作為胃癌發病風險的篩選指標。

［1］ Hébert E.Mannose-6-phosphate/insulin-like growth factor receptor expression and tumor development［J］.Biosci Rep，2006，26：7-17.

［2］ Oka Y，Waterland R A，Killian J K，et al.M6P/IGF2R tumor suppressor gene mutated in hepatocellular carcinomas in Japan［J］.Hepatology，2002，35：1153-1163.

［3］ Savage S A，Woodson K，Walk E，et al.Analysis of genes critical for growth regulation identifies insulin-like growth factor 2 receptor variations with possible functional significance as risk factors for osteosarcoma［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2007，16：1667-1674.

［4］ Feng-Ming Kong，Mitchell S Anscher，Mary Washington，et al.M6P/IGF2R is mutated in squamous cell carcinoma of the lung［J］.Oncogene，2000，19(12)：1572-1578.

［5］ 朱忠政，叢文銘，Hou Li-fang，等.IGF2R基因多態性與結直腸癌和肝癌遺傳易感性的相關性研究［J］.2008，29(11)：1289-1292.