驚厥性疾病患兒血漿和腦脊液中神經(jīng)肽Y、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、白介素－6的水平變化及相關(guān)性研究＊

陜西省人民醫(yī)院兒科（西安710068） 郭向陽(yáng) 焦富勇 王 俠 高 穎

驚厥發(fā)病機(jī)制可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育不成熟，腦內(nèi)某些神經(jīng)內(nèi)分泌物質(zhì)的改變以及免疫、遺傳等因素有關(guān)。近年來(lái)隨著研究的不斷深入，有關(guān)神經(jīng)肽在小兒驚厥性疾病中的作用日益受到關(guān)注。我們?cè)芯堪l(fā)現(xiàn)在急性驚厥發(fā)作后血漿、腦脊液中神經(jīng)肽Y（Neuropeptide Y，NPY）的水平增高［1］，為進(jìn)一步探討 NPY的作用，本研究通過(guò)檢測(cè)驚厥患兒NPY與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（Brain－derived neurotrophic factor，BDNF）、白介素－6（Interleukin－6，IL－6）的水平，以探討其在小兒驚厥性疾病中的臨床價(jià)值及相互關(guān)系，為早期診斷提供依據(jù)。

資料與方法

1 一般資料 所有研究對(duì)象均隨機(jī)來(lái)自2007年3月～2008年6月陜西省人民醫(yī)院兒科住院患兒。驚厥組74例，男34例，女30例，其中癲病組28例，熱驚厥組46例，年齡（6．85±2．25）歲，有明確的臨床表現(xiàn)，并經(jīng)腦電圖、腰穿、頭顱CT/MRI確診。對(duì)照組15例（男性8例，女7例），年齡（6．60±2．27）歲，均為臨床疑為神經(jīng)系統(tǒng)疾病，但無(wú)驚厥表現(xiàn)，并經(jīng)腰穿、腦電圖、頭顱CT/MRI檢查，最后排除神經(jīng)系統(tǒng)疾病，確診為低血糖、低血鈉、低鉀性麻痹、血管迷走性暈厥。各組在年齡分布、性別構(gòu)成、體重的差異均沒(méi)有顯著性（P＞0．05）。

2 研究方法 分別于入院后第1天、第7天清晨空腹肘部靜脈采血4 ml，且分別于入院后d1行常規(guī)腰穿檢查并進(jìn)行腦脊液常規(guī)、生化及其它等相關(guān)檢查，剔除損傷性標(biāo)本，并預(yù)留2 ml CSF。血和CSF均置于4oC預(yù)冷的試管（含10%EDTA．Na230μl和抑肽酶40μl）混勻，3000r離心15 min，放于－75oC貯存?zhèn)錅y(cè)。

采用放射免疫方法測(cè)定血漿和腦脊液中NPY、BDNF、IL－6水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明由專(zhuān)門(mén)的實(shí)驗(yàn)室人員操作。靈敏度＜10ng/L，批內(nèi)變異系數(shù)＜10%，批間變異系數(shù)＜10%，單位用ng/L表示。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉ）表示，用SPSS 16．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩樣本均數(shù)間的比較用t檢驗(yàn)，組間比較用方差分析，相關(guān)性檢驗(yàn)用直線相關(guān)分析與逐步回歸分析等，均以雙側(cè)P＜0．05為顯著性檢驗(yàn)性水平。

結(jié) 果

1 各組血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平比較 驚厥組各組血漿和CSF中NPY、IL－6水平均高于對(duì)照組（P＜0．001），且熱驚厥組和癲癇組也有顯著差異（P＜0．05），但BDNF水平與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05），見(jiàn)表1、2。

表1 各組血漿中 NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

表2 各組CSF中 NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

2 在不同類(lèi)型的熱驚厥患兒血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平比較：血漿和CSF中NPY、BDNF水平在單純性熱驚厥和復(fù)雜性熱驚厥比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05），但I(xiàn)L－6水平在單純性熱驚厥和復(fù)雜性熱驚厥比較顯著差異（P＜0．05），見(jiàn)表3、4。

表3 不同熱驚厥患兒的血漿中NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

表4 兩組CSF中 NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

3 不同類(lèi)型癲癇患兒血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平比較：血漿和CSF中NPY、BDNF水平在部分性發(fā)作和全面性發(fā)作比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0．05），但I(xiàn)L－6水平在部分性發(fā)作和全面性發(fā)作比較顯著差異（P＜0．05），見(jiàn)表5、6。

表5 不同類(lèi)型癲癇患兒的血漿中NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

表6 不同類(lèi)型癲癇患兒的CSF中NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

4 血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平與驚厥次數(shù)的關(guān)系：血漿和CSF中NPY、IL－6水平驚厥發(fā)作次數(shù)有關(guān)，發(fā)作次數(shù)＞3患兒明顯高于發(fā)作次數(shù)≤3者（P＜0．05），而B(niǎo)DNF水平與驚厥發(fā)作次數(shù)無(wú)明顯相關(guān)（P＞0．05），見(jiàn)表7、8。兩組比較，NPY第1天，第7天P均＜0．05，BDNF第1天，第7天P均＞0．05，IL－6第1天，第7天P均＜0．05

表7 血漿中 NPY、BDNF、IL－6水平與驚厥次數(shù)的關(guān)系（ng/L）

表8 CSF血漿中 NPY、BDNF、IL－6水平與驚厥次數(shù)的關(guān)系（ng/L）

5 血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6的相關(guān)分析：經(jīng)直線相關(guān)與回歸分析血漿和腦脊液中NPY、BDNF、IL－6均與性別、年齡、體重?zé)o相關(guān)性，P均＞0．05。無(wú)論在正常組和驚厥組、癲癇組，血漿中 NPY、BDNF、IL－6與腦脊液中的NPY、BDNF、IL－6均分別呈正相關(guān)（P＜0．05），而且血漿和腦脊液中的NPY與IL－6呈正相關(guān)（P＜0．01），與BDNF呈負(fù)相關(guān)（P＜0．01）；BDNF與IL－6呈負(fù)相關(guān)（P＜0．01）。

討 論

諸多因素參與驚厥的發(fā)生、發(fā)展，迄今為止驚厥發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，神經(jīng)－免疫－內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)失衡是其發(fā)生發(fā)展的重要因素之一［2］。在復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中，神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)相互影響，三大系統(tǒng)之間通過(guò)雙向調(diào)節(jié)作用維持機(jī)體正常的生理活動(dòng)，無(wú)論哪個(gè)系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題都可以影響整個(gè)系統(tǒng)的平衡，促進(jìn)驚厥的發(fā)作。

NPY廣泛分布于中樞及外周組織，尤以神經(jīng)系統(tǒng)濃度最高，在腦中起著神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)調(diào)質(zhì)的作用，主要分布在大腦皮層、丘腦及腦干，尤以海馬濃度最高，而大腦邊緣系統(tǒng)海馬區(qū)與免疫系統(tǒng)關(guān)系最為密切，海馬神經(jīng)元異常電活動(dòng)是許多類(lèi)型驚厥和癲癇的始動(dòng)因素。我們?cè)^察了在不同驚厥性疾病中血漿、CSF中NPY的變化［1］。本文結(jié)果再次表明驚厥發(fā)作后血漿、CSF中NPY濃度均增高，且二者間有相關(guān)性（P＜0．05），提示血漿NPY含量能間接反映CSF中NPY水平。眾多研究證實(shí)在動(dòng)物和人類(lèi)研究中驚厥發(fā)作后神經(jīng)肽Y含量增多［3］。在本研究中發(fā)現(xiàn)在第1天血漿、CSF中驚厥組患兒NPY水平明顯較對(duì)照組增高（P＜0．001），在第7天血漿中驚厥組患兒NPY水平較第1天升高，有顯著性差異（P＜0．01），驚厥組各組患兒NPY水平第7天較第1天升高也有顯著性差異（P＜0．05），且驚厥組各組患兒NPY水平之間也有顯著性差異（P＜0．001），提示在驚厥發(fā)作后NPY合成與釋放增加，而且血漿、CSF中NPY含量增多，并在驚厥發(fā)展的不同階段其水平不同。在我們的研究中也發(fā)現(xiàn)驚厥發(fā)作次數(shù)＞3次的患兒血漿和CSF中NPY水平與≤3次的患兒在第1天、第7天相比有顯著性差異（P＜0．05），而且前者在第7天增高程度較后者高，提示在驚厥發(fā)作后NPY合成與釋放增多，與驚厥的發(fā)作次數(shù)有關(guān)。這表明反復(fù)驚厥可導(dǎo)致內(nèi)源性NPY代償增加，發(fā)揮機(jī)體自我保護(hù)作用。但在不同驚厥發(fā)作類(lèi)型、不同癲癇發(fā)作類(lèi)型的患兒中無(wú)顯著差異（P＞0．05），這可能提示驚厥發(fā)作后NPY的釋放與驚厥程度有關(guān)，而與發(fā)作形式無(wú)關(guān)，仍需大樣本進(jìn)一步探討和研究。

BDNF對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多種類(lèi)型神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育、分布、維護(hù)和再生都具有重要作用，主要由腦組織合成，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要分布在與驚厥敏感性密切相關(guān)的海馬、杏仁核和皮質(zhì)。在神經(jīng)元內(nèi)BDNF主要定位于胞體和軸突。研究顯示BDNF有著營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)神經(jīng)元、促進(jìn)神經(jīng)發(fā)育的作用，但在BDNF與驚厥的發(fā)作關(guān)系上存在不同的觀點(diǎn)，有研究顯示BDNF減低神經(jīng)元興奮性，延緩點(diǎn)燃模型的發(fā)作，降低內(nèi)源性BDNF表達(dá)可加重驚厥發(fā)作，可能通過(guò)增加NPY的表達(dá)而達(dá)到延緩發(fā)作［4］；另一方面也有研究顯示BDNF有增強(qiáng)興奮性遞質(zhì)的作用，導(dǎo)致驚厥發(fā)作，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)海馬內(nèi)注入BDNF能夠誘發(fā)自發(fā)性發(fā)作［5］。驚厥發(fā)作后BDNF含量在動(dòng)物或人類(lèi)研究中也有增加或降低的報(bào)道［6～8］。在本研究中發(fā)現(xiàn)在驚厥組血和CSF中BDNF第1天和第7天均比對(duì)照組低，統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)差異，但第7天較第1天有所增高。在不同驚厥發(fā)作類(lèi)型、不同癲癇發(fā)作類(lèi)型的患兒中無(wú)顯著差異（P＞0．05），并與發(fā)作次數(shù)無(wú)顯著關(guān)系（P＞0．05），這提示驚厥發(fā)生后BDNF水平的變化與驚厥發(fā)生的形式和程度關(guān)系不大，很可能是在驚厥發(fā)生發(fā)展的不同階段其水平不同，這一點(diǎn)與最近研究報(bào)道相符［8］，也有研究認(rèn)為在驚厥發(fā)作后BDNF含量變化與引起驚厥發(fā)作的病變腦區(qū)、時(shí)間、年齡等有關(guān)系［8，9］。另外，由于驚厥發(fā)作與諸多因素有關(guān)，對(duì)于驚厥后BDNF的變化和驚厥間的關(guān)系，仍需進(jìn)一步的動(dòng)物和臨床研究。

IL－6主要由單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，廣泛參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的免疫反應(yīng)，可促進(jìn)小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)海馬和小腦部位的星狀膠質(zhì)增生，并可誘導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的B淋巴細(xì)胞分化成為可分泌免疫球蛋白的漿細(xì)胞，參與腦組織的免疫性炎癥。研究表明IL－6對(duì)谷氨酸釋放、興奮傳播具有明顯的抑制作用，減輕NMDA的神經(jīng)毒效應(yīng)及其對(duì)神經(jīng)元的損傷，有助于神經(jīng)元的存活和神經(jīng)元的保護(hù)，而且驚厥發(fā)作后IL－6 mRNA在大腦皮質(zhì)、海馬和視丘下部的表達(dá)明顯增加［10］。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)在驚厥發(fā)作后IL－6在血和CSF中都是增高的，均較對(duì)照組明顯升高，有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0．001），這與文獻(xiàn)結(jié)果相同［10～12］，而且在血中驚厥組各組患兒第7天較第1天升高，有顯著性差異（P＜0．05），驚厥組各組患兒血中IL－6水平在第1天、第7天也有顯著性差異（P＜0．05），并且血和CSF中的IL－6有一定的相關(guān)性，在不同的驚厥類(lèi)型、癲癇類(lèi)型間有差異（P＜0．05），與驚厥的發(fā)作次數(shù)也有關(guān)（P＜0．05），與文獻(xiàn)報(bào)道相同［10］。這些說(shuō)明IL－6與驚厥之間存在著密切的關(guān)系。

有研究表明，BDNF可誘導(dǎo)NPY在海馬高表達(dá)，而且注射N(xiāo)PY也可促進(jìn)致癇大鼠海馬內(nèi)BDNF的表達(dá)［13］，可見(jiàn)在驚厥中二者之間有一定的相互作用。本研究中，我們同時(shí)測(cè)定了驚厥患兒血漿和CSF中的NPY、BDNF、IL－6的水平，并發(fā)現(xiàn)CSF中 NPY、BDNF、IL－6水平的含量均高于其各自在血漿水平，且無(wú)論在正常組和驚厥組、癲癇組，血漿中NPY、BDNF、IL－6與CSF中的NPY、BDNF、IL－6均分別呈正相關(guān)（P＜0．05），提示血漿中NPY、BDNF、IL－6水平能間接反映其在CSF中水平，而且血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6均與性別、年齡、體重?zé)o相關(guān)性（P＞0．05）。在我們的研究中也發(fā)現(xiàn)血漿和CSF中的NPY與IL－6呈正相關(guān)（P＜0．01），與BDNF呈負(fù)相關(guān)（P＜0．01）；BDNF與IL－6呈負(fù)相關(guān)（P＜0．01）。這提示在驚厥的發(fā)生和發(fā)展中三者具有相互影響的作用。

總之，在本研究中觀察到在驚厥的發(fā)作和發(fā)展中，NPY、BDNF、IL－6三者在血和CSF中的水平在不同的驚厥階段是不同的，參與了驚厥時(shí)的異常神經(jīng)免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)失衡，進(jìn)而內(nèi)分泌免疫功能紊亂。不同水平的神經(jīng)肽、細(xì)胞因子等參與驚厥的發(fā)生過(guò)程，這可能是其發(fā)病的分子生物學(xué)基礎(chǔ)之一。同時(shí)，本文結(jié)果表明其共同參與了神經(jīng)免疫應(yīng)答反應(yīng)，其水平的變化間接反映了驚厥對(duì)腦組織的損傷。通過(guò)對(duì)其水平變化的檢測(cè)，可能有助于對(duì)驚厥的臨床診斷、治療及預(yù)后的判斷。

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