RegⅣ和EGFR在大腸癌中的表達(dá)

秦先鋒 朱惠明 劉玉杰

（廣東省東莞市中山大學(xué)附屬東華醫(yī)院，廣東 東莞 523110）

RegⅣ和EGFR在大腸癌中的表達(dá)

秦先鋒 朱惠明 劉玉杰

（廣東省東莞市中山大學(xué)附屬東華醫(yī)院，廣東 東莞 523110）

目的 研究再生基因蛋白Ⅳ(RegⅣ)及表皮生長(zhǎng)因子受體( EGFR)在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法 應(yīng)用S-P免疫組化技術(shù)檢測(cè)57例大腸癌及其相應(yīng)的癌旁正常組織中RegⅣ和EGFR的表達(dá)。結(jié)果 57例大腸癌組織中RegⅣ、EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RegⅣ與EGFR在大腸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論 RegⅣ可能通過(guò)激活EGFR/PI3K/Akt信號(hào)系統(tǒng)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

再生基因蛋白Ⅳ；大腸癌；表皮生長(zhǎng)因子受體；免疫組織化學(xué)

大腸癌是全世界最常見(jiàn)的癌癥之一，在中國(guó)的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。大腸癌臨床上發(fā)現(xiàn)時(shí)，大多已經(jīng)處于中晚期，治療后5年存活率仍然較低。通過(guò)對(duì)大腸癌癌變過(guò)程中復(fù)雜的分子機(jī)制的研究，有可能使得大腸癌的治療取得較大的突破。

Reg基因家族是鈣依賴性凝集素超家族，在一些胃腸道腫瘤中表達(dá)上調(diào)，參與細(xì)胞增殖和分化，RegⅣ是其中一個(gè)新成員。RegⅣ在克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎表達(dá)，并與大腸癌的惡性潛能和大腸腺瘤的惡性轉(zhuǎn)化能力相關(guān)。最近，RegⅣ已被證明可激活EGFR，蛋白激酶B/Akt和激活蛋白1，延長(zhǎng)大腸癌細(xì)胞的存活，增加Bcl-2，Bcl-xL和survivin的表達(dá)。本研究采用免疫組化染色法檢測(cè)RegⅣ與EGFR在大腸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)，探討RegⅣ和EGFR與大腸癌的關(guān)系，以及RegⅣ蛋白在大腸癌中的可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

本研究的標(biāo)本隨機(jī)取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2003年10月至2004年12月間手術(shù)切除的存檔蠟塊57例。男性28例，女性29例；中位年齡56歲（31～78歲）。所有患者術(shù)前均未接受化療，放療或其他針對(duì)腫瘤的治療。按Dukes分期為A+B期31例，C+D期26例；病理類型為管狀腺癌21例，管狀乳頭狀腺癌15例，黏液腺癌11例，印戒細(xì)胞癌10例；組織分化程度為高分化21例，中低分化36例；常規(guī)淋巴結(jié)檢查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。

1.2 試劑及來(lái)源

抗體及免疫組化試劑盒均購(gòu)自北京中杉公司。

1.3 研究方法

采用SP免疫組化技術(shù)，主要步驟如下：切片常規(guī)脫蠟和水化后，以檸檬酸緩沖液高溫高壓修復(fù)抗原，用3%H2O2作用10min，除去內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，以稀釋的羊血清封閉10min，加入一抗在濕盒里4℃過(guò)夜，PBS洗滌后加生物素標(biāo)記的二抗，第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉菌素工作液孵育各10min，PBS沖洗三次，最后在DAB溶液中顯色5min，自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，乙醇梯度脫水，封片觀察。

1.4 結(jié)果判定

陽(yáng)性細(xì)胞必須具備：細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，陽(yáng)性染色定位準(zhǔn)確，著色明顯高于背景。結(jié)果判斷采用半定量積分法，根據(jù)每張切片的陽(yáng)性細(xì)胞比例及著色深淺計(jì)數(shù)。陽(yáng)性細(xì)胞比例1/3以下為1分，1/3～2/3為2分，2/3為3分；細(xì)胞無(wú)著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。根據(jù)二者乘積判斷陽(yáng)性等級(jí)：（0～3分）為陰性，（4～9分）為陽(yáng)性。用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 RegⅣ和EGFR的表達(dá)

57例大腸癌組織中，RegⅣ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率52.6% (30/57)，其陽(yáng)性表達(dá)部位為細(xì)胞質(zhì)；EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率59.6% (34/57)，陽(yáng)性表達(dá)部位為細(xì)胞膜，見(jiàn)表1。

表1 RegⅣ和EGFR在大腸癌中的表達(dá)

2.2 REGⅣ和EGFR表達(dá)的相關(guān)性

REGⅣ和EGFR共同陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)為29例，共同陰性表達(dá)的例數(shù)為17例，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)，本組標(biāo)本中REGⅣ表達(dá)陽(yáng)性率同EGFR表達(dá)陽(yáng)性率存在顯著正相關(guān)關(guān)系。

3 討 論

Reg代表一組小的細(xì)胞再生和增殖所必需的分泌蛋白，形成一種免疫系統(tǒng)。人的Reg家族中，人RegⅣ基因位于1號(hào)染色體上。RegⅣ可在各種正常組織表達(dá)，如胃，大腸，小腸和胰腺，但其表達(dá)水平較癌組織中要低得多。有研究已經(jīng)證明[1]，在大腸癌組織中高表達(dá)RegⅣ蛋白。RegⅣ在大腸腫瘤相對(duì)于正常大腸組織，其表達(dá)增高。用PCR測(cè)定，大腸癌中RegⅣ基因的表達(dá)顯著高于正常組織。RegⅣ的抗凋亡特性與大腸癌的進(jìn)展和大腸癌化療耐藥性密切相關(guān)，RegⅣ的表達(dá)有望成為一個(gè)標(biāo)記高度惡性潛力的生物學(xué)標(biāo)志物[2-4]。本研究發(fā)現(xiàn)，RegⅣ在大腸癌中高表達(dá)，顯著高于癌旁正常組織中的表達(dá)，與文獻(xiàn)報(bào)道相符，進(jìn)一步證實(shí)了RegⅣ在大腸癌中的作用。不僅是大腸癌，同時(shí)也有很多報(bào)道表明[5]，RegⅣ在其他惡性腫瘤中的表達(dá)也是增高的。

表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）是一種跨膜蛋白，屬于ErbB家族受體酪氨酸激酶（RTK）。它被激活后與EGF家族的肽生長(zhǎng)因子結(jié)合，其中包括表皮生長(zhǎng)因子（EGF），轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（TGF-α）等，通過(guò)與配體結(jié)合誘導(dǎo)ErbB受體聚合物和異二聚體，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)的激酶結(jié)構(gòu)域的酪氨酸激酶自身磷酸化和激活。研究發(fā)現(xiàn)[6-8]，EGFR的高表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，同時(shí)也有很多報(bào)道表明[9,10]，EGFR與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展有很大關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)，EGFR在大腸癌中高表達(dá)，顯著高于癌旁正常組織中的表達(dá)，與其他相關(guān)研究一致，進(jìn)一步證實(shí)了EGFR在大腸癌中的作用。

RegⅣ激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路知之甚少。表皮生長(zhǎng)因子受體在MKN28和TMK1細(xì)胞中形成自分泌和旁分泌環(huán)路。據(jù)報(bào)道，高磷酸化水平的表皮生長(zhǎng)因子受體和RegⅣ在MKN28和TMK1細(xì)胞系中，RegⅣ與EGFR的高磷酸化水平與EGFR的磷酸化有關(guān)。許多研究表明，陽(yáng)性表達(dá)EGF和RegⅣ之間存在反饋回路中的信號(hào)通路。因此，阻斷Reg Ⅳ/EGFR信號(hào)傳導(dǎo)可作為人胃腸腺癌的潛在的治療干預(yù)措施。本研究發(fā)現(xiàn)，RegⅣ和EGFR在大腸癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，進(jìn)一步從蛋白水平證實(shí)了上述觀點(diǎn)。

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Reg Ⅳ and EGFR Expression in Colorectal Cancer

QIN Xian-feng, ZHU Hui-ming, LIU Yu-jie
(Donghua Hospital Affiliated Sun Yat-sen University of Dongguan, Dongguan 523110, China)

Objective To investigate the relationship and clinical significance between the expressions of RegⅣ and EGFR in colorectal cancer. Methods S-P Immunohistochemistry was used to detect the expression of RegⅣ and EGFR in pathological tissue with 57 cases of colorectal cancer and tumor-adjacent normal colorectal tissue. Results The positive expression rates of RegⅣ and EGFR proteins in 57 cases of colorectal cancer were significantly higher than the positive expression rates of tumor-adjacent normal colorectal tissues respectively. There was positive correlation between the expression of RegⅣ and EGFR in colorectal cancer. Conclusions RegⅣ may play an important role in tumorigenesis and tumor progression by activating EGFR/PI3K/Akt signaling pathway.

Regenerating gene typeⅣ(RegⅣ); Colorectal cancer; Epidermal growth factor receptor (EGFR); Immunohistochemistry

R735.3+4；R446

B

1671-8194（2013）36-0010-02