柴胡復(fù)方水提物對大鼠亞急性胃潰瘍的治療作用

鄧晉芳方蕾巴恩平趙云金永三★

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柴胡復(fù)方水提物對大鼠亞急性胃潰瘍的治療作用

鄧晉芳1方蕾2巴恩平1趙云3金永三3★

目的研究柴胡復(fù)方水提物對大鼠亞急性胃潰瘍的治療作用。方法大鼠胃漿膜層注射乙酸復(fù)制亞急性胃潰瘍模型,然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組，分別灌胃配給高、低劑量柴胡復(fù)方水提物進(jìn)行治療，同時以灌注生理鹽水組和胃潰瘍藥Stillen治療組為對照，通過比較各組間潰瘍愈合率、血清中一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性水平以及觀察胃組織形態(tài)學(xué)的改變，探討該復(fù)方中藥對實(shí)驗(yàn)性亞急性胃潰瘍損傷的保護(hù)作用。結(jié)果陽性藥物Stillen組（100 mg/kg）、柴胡復(fù)方水提物低劑量（100 mg/kg）和高劑量組（200mg/kg），潰瘍面積明顯低于潰瘍模型組（P＜0.01），潰瘍愈合率分別為93.5%、40%和92.9%，血清SOD較模型組顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性藥物和柴胡復(fù)方水提物低劑量組血清NO增加（P＜0.01）；胃組織病理形態(tài)學(xué)觀察，模型組胃黏膜脫落壞死，大量炎性細(xì)胞浸潤，陽性藥物組和柴胡復(fù)方高低劑量組胃組織病變有明顯改善。結(jié)論柴胡復(fù)方水提物對大鼠亞急性胃潰瘍模型有明顯的治療作用。

亞急性胃潰瘍模型；一氧化氮；超氧化物歧化酶

胃潰瘍屬于臨床常見的消化系統(tǒng)疾病，其發(fā)病機(jī)制主要涉及胃酸和胃蛋白酶分泌過多，或胃黏膜屏障作用的減弱，而氧自由基被認(rèn)為是胃黏膜損傷的重要起始因子[1]。中藥治療胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)研究表明，柴胡的有效單體成分如柴胡皂苷，柴胡復(fù)方如小柴胡湯、柴胡桂枝湯等，均對胃潰瘍模型有改善和治療效果[2～3]。本實(shí)驗(yàn)中采用的柴胡復(fù)方水提物由柴胡、黃連、白芍和甘草水提物組成，通過建立胃漿膜層注射乙酸致大鼠亞急性胃潰瘍模型，測定并計算潰瘍面積及潰瘍愈合率、血清一氧化氮（NO）、血清超氧化物歧化酶（SOD）和胃組織形態(tài)學(xué)改變來研究柴胡復(fù)方水提物對實(shí)驗(yàn)性亞急性胃潰瘍損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

清潔級雄性Wistar大鼠60只，體重200±20 g，購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，許可證編號：SCXR京2004-0006。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物和試劑

柴胡復(fù)方（柴胡、黃連、白芍和甘草）水提物由北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組胚教研室提供；Stillen，（東亞制藥公司，7A002）；NO試劑盒和SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：071102和071009）；甲醛（北京化學(xué)試劑公司，批號07010）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動物分組與造模[4～5]

大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只動物。空白對照組、模型組、陽性藥物Stillen對照組（200 mg/kg）、柴胡復(fù)方水提物低劑量組（100 mg/kg）和高劑量組（200 mg/kg）。除空白對照組以外，其余40只大鼠禁食不禁水24 h，以1.5%戊巴比妥（0.25 mL/100g）進(jìn)行麻醉后，常規(guī)手術(shù)消毒，于劍突下縱向切開腹壁2 cm，暴露全胃，用1 mL的注射器在胃前壁體竇交接處（避開血管），注射0.05 mL的冰乙酸。然后將胃放回腹腔，逐層縫合切口，術(shù)后常規(guī)護(hù)理。進(jìn)行常規(guī)消毒。之后大鼠每天灌胃給藥1次，空白對照組和模型組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥14 d后，大鼠10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血，取全胃，沿胃大彎剪開，生理鹽水沖洗胃內(nèi)殘留物，觀察胃黏膜損傷情況。

1.2.2 潰瘍面積和潰瘍愈合率

以游標(biāo)卡尺測定每只大鼠胃部所有潰瘍面積（mm2），潰瘍面積 =潰瘍最大長徑×垂直于最大長徑的最大寬徑，并以測得大鼠所有潰瘍面積的總和作為大鼠的潰瘍面積。潰瘍愈合百分率=[（模型組潰瘍面積-實(shí)驗(yàn)組潰瘍面積）/模型組潰瘍面積]×100%

1.2.3 胃組織病理形態(tài)學(xué)觀察

胃竇部取1 cm×0.5 cm×0.5 cm組織，于10 %福爾馬林固定，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，切取5 μm的切片，HE染色（蘇木精-伊紅染色），置于光學(xué)顯微鏡下觀察潰瘍病變情況。

1.2.4 血清NO和SOD的測定

全血于3000 rpm，4℃離心15 min取血清，參照南京建成生物工程研究所試劑盒說明書，測定血清NO和SOD的含量。

1.2.5 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)通過SPSS16.0軟件包用單因素方差分析進(jìn)行兩兩比較檢驗(yàn)，用（±s）表示結(jié)果，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 柴胡復(fù)方水提物對乙酸注射亞急性胃潰瘍模型大鼠的影響

2.1.1 潰瘍面積和潰瘍愈合率

結(jié)果如表1所示，陽性藥物Stillen和柴胡復(fù)方水提物高低劑量均可使乙酸注射大鼠亞急性潰瘍模型的潰瘍面積明顯減少（P＜0.01），抑制率分別為93.5%、40%、92.9%，表明柴胡復(fù)方水提物對乙酸注射亞急性胃潰瘍動物模型有明顯的保護(hù)作用。

表1 柴胡復(fù)方水提物對胃潰瘍模型潰瘍面積和潰瘍愈合率的影響（±s，n=10）Table1 The effect of radix bupleuri compound water extractionon ulcer areas and ulcer healing ratio in rat with gastric ulcer (±s, n=10)

表1 柴胡復(fù)方水提物對胃潰瘍模型潰瘍面積和潰瘍愈合率的影響（±s，n=10）Table1 The effect of radix bupleuri compound water extractionon ulcer areas and ulcer healing ratio in rat with gastric ulcer (±s, n=10)

*注：和模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

（mg/kg） Ulcer areas Ulcer healing ratio （%）Control 0 0△△ 100 Model 0 12.189±4.897 0 Stillen 100 0.784±1.612△△ 93.5 Low Dose 100 7.474±2.669△△ 40 High Dose 200 0.862±2.651△△ 92.9 Group Dose

2.1.2 胃組織病理形態(tài)學(xué)觀察

如圖1所示，正常組大鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)完整，無壞死。模型組大鼠胃組織黏膜層脫落壞死，大量炎細(xì)胞浸潤。陽性藥物Stillen組胃黏膜層有部分缺失、壞死，伴少量炎細(xì)胞浸潤。柴胡復(fù)方水提物高低劑量組胃黏膜基本完整，黏膜下層無充血、水腫，無壞死，或見極少量滲出物。

圖1 柴胡復(fù)方水提物對胃潰瘍模型病理形態(tài)學(xué)的影響（HE×10）Figure 1 The effect of radix bupleuri compound water extraction for the rats with gastric ulcer on pathology (HE×10)*注：A：空白對照組，B：模型組，C：陽性藥物Stillen組，D：復(fù)方低劑量組，E：復(fù)方高劑量組

2.2 柴胡復(fù)方水提物對乙酸注射亞急性胃潰瘍模型大鼠血清NO和SOD的影響

2.2.1 血清NO

結(jié)果如表2所示，陽性藥物Stillen組和柴胡復(fù)方水提物低劑量組的血清NO含量較模型組均見明顯增加（P＜0.01）。

2.2.2 血清SOD

結(jié)果如表3所示，與模型組比較，陽性藥物Stillen組和柴胡復(fù)方水提物高低劑量組的血清SOD明顯增加（P＜0.01），表明柴胡復(fù)方水提物對消炎痛胃潰瘍大鼠有明顯的抗氧化作用。

3 討論

胃潰瘍是十分常見的疾病，但是目前由于大量胃潰瘍疾病得不到及時的治療或者因?yàn)橹委煵粡氐讓?dǎo)致的反復(fù)發(fā)作，甚至進(jìn)一步惡化為胃癌。因此，及時預(yù)防和有效治療胃潰瘍具有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)采用胃漿膜層注射乙酸復(fù)制大鼠亞急性胃潰瘍模型，模型組潰瘍面積顯著高于空白對照組，病理形態(tài)學(xué)觀察到胃組織黏膜脫落壞死，伴大量炎性細(xì)胞浸潤，以上結(jié)果表明急性胃潰瘍模型成功。而應(yīng)用柴胡復(fù)方水提物可明顯降低潰瘍面積和改善胃組織病理改變，表明該藥對亞急性胃潰瘍具有保護(hù)作用。

表2 柴胡復(fù)方水提物對胃潰瘍模型大鼠血清NO的影響（±s，n=10）Table 2 The effect of radix bupleuri compound water extraction on NO of blood serum in rat with gastric ulcer(±s, n=10)

表2 柴胡復(fù)方水提物對胃潰瘍模型大鼠血清NO的影響（±s，n=10）Table 2 The effect of radix bupleuri compound water extraction on NO of blood serum in rat with gastric ulcer(±s, n=10)

*注：和模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

Group Dose（mg/kg） NO（μmol/L）Control 0 0.056±0.011 Model 0 0.064±0.017 Stillen 100 0.110±0.039△△Low Dose 100 0.126±0.028△△High Dose 200 0.075±0.013

表3 柴胡復(fù)方水提物對胃潰瘍模型大鼠血清SOD的影響

NO是一種血管活性物質(zhì)。作為內(nèi)源性血管舒張因子的NO在消化系統(tǒng)有廣泛的調(diào)節(jié)作用。在潰瘍的愈合過程中，NO可明顯擴(kuò)張胃黏膜血管，增加肉芽組織中微循環(huán)血流量，促進(jìn)修復(fù)過程，是細(xì)胞保護(hù)中遞質(zhì)之一。研究表明，乙酸致胃潰瘍模型血清NO明顯降低[6]，本實(shí)驗(yàn)中陽性藥物Stillen和柴胡復(fù)方提取物可增加血清NO含量，從而增加黏膜血流量，緩解了潰瘍損傷。

氧自由基誘導(dǎo)細(xì)胞和組織損傷的機(jī)制是使生物膜中的不飽和脂肪酸過氧化，形成多種脂質(zhì)過氧化物，破壞線粒體和溶酶體膜，造成細(xì)胞死亡，促進(jìn)潰瘍的發(fā)生。胃腸黏膜受化學(xué)物質(zhì)作用或缺血等因素刺激后，可產(chǎn)生大量的氧自由基。氧自由基在整體水平和細(xì)胞水平都可以引起胃黏膜或黏膜細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化，引發(fā)胃黏膜損傷。機(jī)體內(nèi)SOD活性與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)生的分解產(chǎn)物，不僅可以反映機(jī)體局部或整體的炎癥反應(yīng)情況，也可反映機(jī)體抗氧化反應(yīng)的能力[7]。實(shí)驗(yàn)中，陽性藥物Stillen和柴胡復(fù)方水提物高低劑量均可使?jié)兡Ｐ痛笫蟮难錝OD明顯增加，表明柴胡復(fù)方水提物對消炎痛胃潰瘍大鼠有明顯的抗氧化作用，進(jìn)而抑制潰瘍的發(fā)生和發(fā)展。同時低劑量組的柴胡復(fù)方水提物效果略次于高劑量組，但是不能說明劑量越高，治療效果越好，這有待進(jìn)一步的研究。

[1] Augusto A C, Miguel F, Mendonca S, et al. Oxidative stress expression status associated to Helicobacter pylori virulence in gastric diseases[J]. Clin Biochem, 2007, 40(9-10): 615-622.

[2] 刑德倫, 鄭邦英. 中藥復(fù)方治療胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2009, 31(1): 69-72.

[3] 馬海燕, 馬玉奎. 柴胡皂苷治療胃潰瘍作用的研究[J]. 齊魯藥事, 2011, 30(6): 318-319.

[4] 樊拖迎, 周虎, 樊群. 加味黃芪建中湯對大鼠乙酸胃潰瘍胃黏膜的保護(hù)作用[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2011, 20(15): 1846-1847.

[5] 曲怡, 才麗平, 鄭洪新, 等. 中藥消癰潰得康對乙酸胃潰瘍模型大鼠PGE_2及EGF含量的影響[J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2011, 26(10): 2255-2257.

[6] 馮云霞, 時昭紅, 張介眉, 等. 促愈顆粒對乙酸胃潰瘍大鼠血清一氧化氮、胃泌素和血漿神經(jīng)降壓素的影響[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2011, 17(17): 181-184.

[7] Amagase H, Murakami T, Misaki M, et al. Possible mechanism of gastric mucosal protection by epidermal growth factor in rats[J]. Life Sci, 1990, 47(14): 1203-1211.

Effects of radix bupleuri compound water extraction on treatment in rats with subacute gastric ulcer

DENG Jingfang1, FANG Lei2, BA Enping1, ZHAO Yun3, JIN Yongsan3★
(1.Department of Pathology, Chinese PLA General Hospital 301 Hospital, Beijing 100853, China; 2.Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Science, Beijing 100193, China; 3.Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China)

Objective To study effects of radix bupleuri compound water extraction on prevention in rats with subacute gastric ulcer. Methods The model of subacute gastric ulcer was established by acetic acid to observe effects of radix bupleuri compound water extraction on therapeutical effect in rats with subacute gastric ulcer. The ulcer areas and healing ratio of ulcer were measured. The slices of gastric tissues were observed after HE staining. Nitric oxide (NO) and superoxide dismutase (SOD) in serum were measured by nitric oxide reductase assay and xanthine oxidase assay. Results In Stillen group (100 mg/kg), low dose of radix bupleuri compound water extraction group (100 mg/kg) and high dose group (200 mg/kg), the ulcer areas were decreased compared with those in model group (P＜0.01). The ulcer inhibition ratios were 93.5%、40% and 92.9%, and the activities of SOD in serum were increased in drug-administrated groups (P＜0.01). The content of NO of serum in radix bupleuri compound water extraction groups were increased compared with those in model group (P＜0.05). In model group, deciduous and necrotic gastric mucosas with in fl ammatory cells in fi ltration were observed. Morphological changes were improved in drugs-administrated groups. Conclusion Radix bupleuri compound water extraction can be a therapeutical effect on the rats with subacute gastric ulcer.

Subcute gastric ulcer model; Nitric oxide (NO); Superoxide dismutase (SOD)

1.中國人民解放軍總醫(yī)院301醫(yī)院病理科，北京 100853 2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193 3.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，北京 100029

★通訊作者：金永三，E-mail:honglei@lenet.com.cn