反定型微板法在疾病預防控制中心的應用

周正茂 李育霞

反定型微板法在疾病預防控制中心的應用

周正茂 李育霞

保證反定型微板法在實際工作中順利進行，并不斷總結出血型誤判的原因，以便在血型鑒定中引起重視，保證檢測結果準確判讀，提高輸血安全系數(shù)。

反定型；微板法；血型誤判；血型鑒定

1 材料與方法

1.1 儀器STAR全自動加樣處理機，KUBOTA-4000平板離心機，上海無相微型振蕩器，帝肯SUNRISE酶標儀，ITWELL實驗室軟件，96孔U型板，手工加樣器。

1.2 試劑國家批準使用的反定血型試劑（上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司-國食藥監(jiān)械準字2011第3400169號）。

1.3 操作方法

1.3.1 加樣品（STAR加樣）

1.3.1.1 在STAR軟件上添加了XF1-48、XF49-96、O細胞檢測加樣程序的編輯，包括板的布局SA、SB位置從上到下重復一次的液體SAMPLE的加樣，編號分別為1-48、49-96、1-96，加樣量設定為40μl（血清和血球試劑），無預稀釋液體的加入，無對照空加入，質(zhì)控手工加入。

1.3.1.2 進行加樣通道1000μl容量的核查，保證A、B、O三種血球凝集實驗所需標本量的添加在整個1000μl允許范圍內(nèi)。

1.3.1.3 定義實驗微板順序，分別將反定型三塊微板定義為XF年月日01、XF年月日02、XF年月日03。

1.3.2 加試劑用手工加樣器在第一、第二（1-48、49-96）塊板上手工加入等量的A、B血球試劑，在第三（1-96）塊板上手工加入等量的O血球試劑。

1.3.3 離心KUBOTA-4000離心機有試管和微板兩種離心軸，在進行此種血型操作時需要用微板離心軸進行血型微板的離心。KUBOTA-4000離心機設定1000轉/min，離心時間為2min。血型微板要加蓋后進行離心以防止外濺。

1.3.4 振蕩振蕩懸浮溫度37℃，1000r/min，振蕩2min取出靜置5～10min。

1.3.5 判讀借助ITSWELL實驗室軟件進行判讀。讀取規(guī)則為主波長620nm；振動強度為弱；振動時間為1秒；4.3.4.5臨界值公式：A球=0.8，B球=0.8；臨界值A球=0.8，B球=0.8；表達式陽性（+），陰性（-），灰區(qū)或無效。

2 結果

試驗具體結果見實驗記錄見表1。

表1 血型對比實驗結果

此檢測方法實現(xiàn)了自動化加樣，避免了人為差錯的發(fā)生，同時實現(xiàn)了儀器判讀結果，保存了原始質(zhì)料；此方法尤其適合批量標本處理，節(jié)省了操作時間；滿足實驗室要求，符合確認標準；在此方法實際應用過程中0090913005199的標本一例正反定型不符，正定型結果為O型，經(jīng)肉眼觀察AB兩側均無凝集。反定型判讀結果為AB型，經(jīng)肉眼觀察AB兩側均無凝集。

3 處理

疑為該標本正反定型不符，于是同時進行微板及紙片和試管三種方式同時手工復核，結果反定型仍為AB型，報省血液中心血型參比實驗室檢測，反定型結果判定為O型。

4 討論

根據(jù)衛(wèi)生部關于印發(fā)《血站技術操作規(guī)程（2012版）》的通知中明確規(guī)定衛(wèi)醫(yī)政發(fā)〔2012〕1號4.11.2血型檢測方法：血型篩查常用方法有平板法和微板法、血型鑒定常用試管法和微板法。按照試劑說明書和《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第3版）的規(guī)定進行具體操作和質(zhì)量控制。附錄E提供了建立微板法，可供實驗室自行建立微板法時參考。

若出現(xiàn)2.4情況可從以下方面進行原因的排查。首先是操作者，是否有操作不當?shù)沫h(huán)節(jié)造成結果的偏差。其次是機器，運行是否正常，是否在有效的校準期內(nèi)。第三是物料，試劑是否在有效期內(nèi)，試劑的保存是否符合要求，微板是否刷洗干凈，在微孔板內(nèi)是否有少量殘留的水蒸氣，提供用于判讀的微板廠家是否具有相應的資質(zhì)，其產(chǎn)品是否合格。第四是操作方法，是否存在缺陷。最后是實驗環(huán)境，溫度、濕度是否達到相應的要求。從上述的人、機、法、環(huán)都滿足實驗要求的情況下，最有可能導致問題出現(xiàn)的原因則是物料。而在物料中，微板廠家具有相應資質(zhì)，微板涮洗潔凈并進行了干燥處理，最有可能導致問題出現(xiàn)的原因則是反定型試劑在有效期末（購置的反定型試劑有效期為2個月），造成部分反定型試劑的血球出現(xiàn)離心后溶血現(xiàn)象。

由此可得到結論，本室使用的反定型鑒定方法是標準方法，可以常規(guī)用于血液檢測。出現(xiàn)血型正反定型不符時，從上述方面找出原因，尤其在試劑使用有效期末，可手工配制血球試劑或有新批號血球試劑進行比對實驗，以減免類似差錯的發(fā)生。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.血站技術操作規(guī)程·衛(wèi)醫(yī)政發(fā)(2012)1號[S].北京,2012.

[2]王培華.輸血技術學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2002：113.

R817.1

A

1673-5846(2013)08-0305-02

吉林省遼源市疾病預防控制中心，吉林遼源 136200