轉(zhuǎn)錄因子Sp1在胃癌中的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系※

華召來朱陽春郭國平冷榮柏周 琴施愛武

轉(zhuǎn)錄因子Sp1在胃癌中的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系※

華召來1,2朱陽春1郭國平2冷榮柏2周 琴2施愛武2

目的對比分析Sp1在胃癌、不典型增生及正常組織中的蛋白表達(dá)差異，并探討Sp1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組化的方法，檢測并對比胃癌、不典型增生及正常組織中Spl蛋白的表達(dá)。結(jié)果Spl蛋白在胃癌組織中陽性表達(dá)率高達(dá)58.7%，顯著高于不典型增生（23.8%）及正常組織（14.3%）中Spl的陽性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Sp1蛋白陽性表達(dá)與腫瘤浸潤深度及腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間具有相關(guān)性。結(jié)論Sp1表達(dá)在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有一定作用，可作為胃癌預(yù)后評價(jià)的獨(dú)立影響因子，具有一定的實(shí)用價(jià)值。

轉(zhuǎn)錄因子Sp1；胃癌；不典型增生；病理

胃癌是世界最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均居我國惡性腫瘤前列，全世界每年約有70萬人死于胃癌，其中我國死亡31萬人，占44%[1-2]。在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，存在著多種癌基因及抑癌基因累積的復(fù)雜進(jìn)程[3]，對各種癌基因或抑癌基因在胃癌發(fā)展不同階段的水平進(jìn)行檢測，可進(jìn)一步揭示基因變化在胃癌發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中的作用，為尋找更有價(jià)值的早期診斷指標(biāo)提供有力的依據(jù)。核轉(zhuǎn)錄因子Spl是一種DNA結(jié)合蛋白，與基因啟動子區(qū)的GC盒相結(jié)合，參與細(xì)胞及病毒相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和調(diào)節(jié)，在腫瘤組織細(xì)胞存活、生長以及血管形成中具有關(guān)鍵性作用，其異常活化和表達(dá)還參與眾多惡性腫瘤的發(fā)展進(jìn)程。本研究通過免疫組織化學(xué)方法檢測了Spl蛋白在胃癌、癌前病變及正常組織中的表達(dá)情況，探討了Sp1蛋白表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展過程及其與臨床病理特征的相關(guān)性，為胃癌的早期診斷治療及預(yù)后評價(jià)提供了新的生物標(biāo)志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料75例胃癌病例標(biāo)本均來自2009年1月～2010年12月?lián)P中市人民醫(yī)院外科住院手術(shù)患者，其中高度分化、中度分化、低度分化患者分別為26、24、25例；另取同期普查人群中胃不典型增生組織21例、正常組織14例作為對照。所有胃癌病例均經(jīng)病理明確診斷并按UICC第5版進(jìn)行TNM分期，均接受胃切除術(shù)及淋巴結(jié)清掃術(shù)，術(shù)前無化療和放療史，所有病例均具有完整的臨床、病理及隨訪信息。

1.2 Spl免疫組織化學(xué)染色所有標(biāo)本均經(jīng)過10%甲醛固定、石蠟包埋、二甲苯脫蠟、梯度酒精至水化后切片。所有病理切片均應(yīng)用免疫組織化學(xué) SP法進(jìn)行染色，具體操作嚴(yán)格按試劑使用說明書進(jìn)行。使用Santa Cruz公司（code420）試劑盒作為Spl單克隆抗體，一抗工作液濃度 1：100；二抗及乙二胺四乙酸（DAB）顯色液、抗體稀釋液均由福州邁新生物技術(shù)公司提供，陽性對照采用已知Spl陽性結(jié)腸癌切片染色，陰性對照采用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗。

1.3 陰陽性結(jié)果判定由2名病理高年資醫(yī)師進(jìn)行盲法判讀，細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為染色陽性，并選取5個不同視野在顯微鏡下分別計(jì)數(shù)，每視野計(jì)數(shù)200個細(xì)胞，陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)≤10%者判定為陰性，＞10%者判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理Spl蛋白陽性表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性檢驗(yàn)采用Mantel-Haenszel卡方檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Sp1蛋白在胃癌、不典型增生及正常組織中的表達(dá)差異75例胃癌組織中Sp1陽性表達(dá)44例（陽性率58.7%）；21例不典型增生組織Sp1陽性5例（陽性率23.8%）；14例正常胃黏膜組織中Sp1陽性 2例（陽性率 14.3%）。結(jié)果顯示，胃癌組織中Sp1的表達(dá)與異型增生及正常胃黏膜中Spl表達(dá)存在顯著差異，同時(shí)隨著胃部病變程度的加深，Sp1陽性率有增加趨勢（χ2=14.7，P＜0.05）；而不同分化程度的胃癌組織中Spl蛋白陽性表達(dá)率差異并不顯著，見表1。

表1 Sp1蛋白在胃癌、不典型增生及正常組織中的表達(dá)差異(n)

2.2 胃癌患者Spl蛋白表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性Spl蛋白在胃癌組織中陽性表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小之間相關(guān)性無顯著性（P均＞0.05）；但Sp1陽性表達(dá)率隨臨床分期增加而逐漸升高；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率顯著高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組；陽性表達(dá)率還隨浸潤深度增加而增加，各組間進(jìn)行兩兩對比，差異均具有顯著性（P＜0.05），見表2。

表2 胃癌患者臨床病理特征與Sp1蛋白表達(dá)的相關(guān)性(n)

3 討論

Spl是序列特異的一種DNA結(jié)合蛋白，其過度表達(dá)和活化可正向調(diào)節(jié)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移潛能[4]，目前其它Sp轉(zhuǎn)錄因子（Sp2、Sp3、Sp4）也相繼被發(fā)現(xiàn)和克隆，它們具有相似結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄特性，共同組成了 Sp多基因家族[5]。進(jìn)一步研究[6-7]表明，SP1活性變化可能與Sp1與Sp3比率變化、Sp1結(jié)合位點(diǎn)的甲基化、Sp1/Sp3抑制蛋白等有一定關(guān)聯(lián)，在此進(jìn)程可能涉及到癌基因的激活與抑癌基因的失活，抑癌基因如P53、P73、VHL、Rb蛋白等可能與Sp1形成復(fù)合物，從而進(jìn)一步阻斷Sp1與下游基因啟動子相結(jié)合，影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展的進(jìn)程。

本組 75例胃癌組織中 Spl蛋白表達(dá)的陽性率（58.7%）顯著高于不典型增生組織（23.8%）及正常胃黏膜組織（14.3%），提示隨著胃病變程度的加深，Sp1表達(dá)也有增加的趨勢。本研究結(jié)果還提示，Spl蛋白高表達(dá)狀況與腫瘤細(xì)胞浸潤深度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切相關(guān)，提示Spl表達(dá)增加與腫瘤惡性程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在正相關(guān)。近年來的研究[8]還發(fā)現(xiàn)，Sp1陰性、弱陽性、強(qiáng)陽性表達(dá)患者的中位生存期分別為43個月、37個月和8個月，Sp1表達(dá)是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素。本組研究提示，監(jiān)測Sp1水平，可為腫瘤的早期診斷、預(yù)后評估及對推動腫瘤臨床綜合治療的發(fā)展提供重要的理論依據(jù)，同時(shí)可在腫瘤患者的早期治療中應(yīng)用Spl等多種癌基因抑制劑，干擾癌基因的異常表達(dá)和活化進(jìn)程，可降低癌細(xì)胞的浸潤程度，減少遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生的機(jī)率，從而進(jìn)一步增加患者生存率和提高生存質(zhì)量。

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R735.2

A

1673-5846(2013)09-0162-02

1揚(yáng)中市腫瘤防治研究所，江蘇鎮(zhèn)江 212200

2揚(yáng)中市人民醫(yī)院，江蘇鎮(zhèn)江 212200

江蘇省鎮(zhèn)江市科技發(fā)展項(xiàng)目（FZ2009012）