正交試驗優選酒炙丹參炮制工藝

張 穎 周 宙 劉 宏 姚有道 趙寶林

（安徽中醫藥高等專科學校，安徽 蕪湖 241000）

正交試驗優選酒炙丹參炮制工藝

張 穎 周 宙 劉 宏 姚有道 趙寶林

（安徽中醫藥高等專科學校，安徽 蕪湖 241000）

目的以丹參中丹酚酸B含量為指標，通過正交試驗探討酒制安徽丹參的炮制工藝。方法采用高效液相色譜法，以丹酚酸B含量為指標，通過正交設計篩選炮制工藝。結果對水溶性成分丹酚酸B含量有顯著影響，最佳工藝條件即10%的黃酒，加10%的酒量，在150℃炒炙6min。結論優選得到的提取工藝方法簡單，藥效成分提取率高。

丹參；酒制；正交試驗；丹酚酸B；高效液相色譜法

丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，《中國藥典》2010年版收載的丹參飲片炮制規格有生丹參片和酒丹參，丹參的炮制工藝具體參數沒有明確的描述，故而炮制時操作者仍憑工作經驗或習慣來指導炮制工作，造成各地炮制品質量有一定差異，對于丹參炮制品的質量控制造成困難，本試驗對各種因素加以控制研究，優選出酒制丹參的炮制工藝，并對其炮制方法和含量變化的原因進行探討，為酒制丹參生產工藝和質量控制提供一定的依據。

1 材料與方法

1.1 儀器和材料

美國waters E600高效液相色譜儀；waters 2489 UV/Visble Detector；浙江大學N2000色譜工作站。上海上平儀器公司分析天平。甲醇、冰乙酸為色譜純，南京化學試劑廠生產，水為娃哈哈純凈水。對照品丹酚酸B （111562—200807）由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用。

輔料黃酒（酒精度分別≥5%、≥10%、產地浙江紹興黃酒集團）、白酒（酒精度＞46%、產地安徽口子酒業股份有限公司）。供試品丹參Salvia miltiorrhiza Bge.采自安徽全椒縣，經過筆者鑒定。

1.2 方法

1.2.1 HPLC色譜條件 waters symmetry C185μm 4.6×150mm。檢測波長為281nm，柱溫25℃，流速0.8mL/min。流動相為甲醇和5%冰乙酸水溶液混合梯度洗脫，梯度洗脫條件如表1所示。

1.2.2 對照品溶液制備

精密稱取對照品，配制成丹酚酸B溶液97μg/mL待用。

1.2.3 樣品溶液制備

取丹參干燥樣品0.5g置于圓底燒瓶中，加入50mL甲醇，精密稱取質量后于沸水浴上加熱回流1h，冷卻放至室溫，補足所失甲醇，用0.45μm微孔濾膜過濾即得。

表1 HPLC梯度洗脫條件

1.2.4 單因素試驗考察

對丹參飲片進行加酒量、悶潤時間、炒制溫度、炒制時間單因素的影響程度考察，通過測量其中丹酚酸B成分含量變化的情況表明，悶潤時間對其含量影響不大，而加酒量、炒制溫度和時間，都是影響丹酚酸B成分含量重要因素，應該作為正交試驗設計的考察因素。

1.2.5 酒制丹參飲片的制備

取丹參藥材飲片9份，每份30g，按L9（34）正交表安排的9種工藝，加入輔料，拌勻后悶潤2h，用相應溫度炒至規定的時間，晾干，置干燥容器內備用。

稱取酒制丹參飲片10g，置于具塞三角燒瓶中，加水20mL悶潤15min，加熱并保持沸騰10min，過濾；濾渣加水20mL，加熱并保持沸騰10min，過濾；合并兩次濾液，定容至50mL，搖勻，得酒制丹參飲片溶液待用。

1.2.6 精密度試驗

精密吸取丹參藥材供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，重復進樣6次，RSD=1.7%。結果表明儀器具有良好的精密度。

1.2.7 穩定性試驗

精密吸取丹參藥材供試品溶液10μL，注人液相色譜儀，測定，每隔20min進樣一次，連續進樣5次，RSD=1.4%。結果表明供試品溶液穩定性良好。

2 正交試驗與結果分析

2.1 正交試驗設計

根據1.2.4中所得結論，選取酒種類、加酒量、炒制溫度和時間為考察因素，以丹酚酸B的含量為指標，采用正交試驗法進行工藝優選。分別設3個水平，不考慮交互作用，選用L9（34）正交表安排試驗，因素水平見表2。

表2 正交試驗因素水平表

2.2 正交試驗結果及分析

正交試驗測定數據和統計結果見表3。分析可知，各因素的主次順序是B＞D＞C＞A，即酒的用量（%）＞炒炙時間（min）＞炒炙溫度＞酒種類，最佳的工藝條件定為A2B1C3D2，即10%的黃酒，加10%的酒量，在150℃炒炙6min。

表3 丹酚酸B的正交試驗結果

2.3 驗證試驗

為保證結果真實可信，按上述工藝再進行2次試驗，驗證結果分別為16.91、17.23mg/g，丹酚酸B成分含量較高且穩定，說明所選工藝條件最佳A2B1C3D2是最佳工藝。

3 討 論

3.1 指標的選擇與最佳工藝

我們采用的提取方法為傳統用藥方法即飲片水煎煮，脂溶性成分在水當中的煎出率非常低，不可能是用藥時起作用的主要成分，且對其含量測量也造成困難，實際意義不大，丹酚酸B是丹參水溶性成分的代表成分，故選擇丹酚酸B的含量作為指標。水溶性成分提取最佳工藝，即10%的黃酒，加10%的酒量，在150℃炒炙6min。

3.2 影響因素探討

方差分析表明，酒的用量影響最顯著，10%的黃酒確實增加了有效成分的溶解，有利于有效成分的溶出，這與大多數文獻報道相類似；其次是炒炙時間，而炒炙溫度、酒種類影響較小，悶潤時間在前期的選擇試驗中即表現出對有效成分的溶出不具有重要意義，通常悶潤時間只要能保證將藥材全部悶透即可，綜合文獻，一般2h以上的悶潤即可保證，特別要強調的是，室內溫度對于悶潤時間有一定影響，當氣溫較高時，酒精揮發較快，悶潤時間要適當加長，以保證悶透藥材的需要。本研究采用80、110、150℃進行炒炙，最佳工藝的炒炙溫度為150℃，與文獻報道文火的溫度掌握在120～130℃略高，并且150℃酒炙品焦斑明顯，甚至呈焦褐色，成品外觀較差。

3.3 炮制對化學成分的影響

丹酚酸B的結構不穩定，光照及溫度對其都會影響其結構穩定性，暴曬、加熱可使丹酚酸B部分損失，含量降低。丹參酒炙品水煎出物中脂溶性成分的含量非常低，在此不作特別分析，但其中的丹酚酸B的含量明顯高于生品（11.76mg/g），可能是因為酒炙過程改變了藥材細胞物理性狀，浸透了細胞壁，使有效成分易于從植物中溶出，提高了其溶出率。此外，含有酒精的介質對成分的溶解以及傳運都較有效，有利于丹酚酸B的浸潤、溶解、擴散等，提高溶出含量。

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R282.710.2

B

1671-8194（2013）15-0095-02

安徽高校省級自然科學研究項目（編號：KJ2008B078）