CMIA法與ELISA法測定乙型肝炎標志物的比較分析

陳清林

（泉州市第一醫院檢驗科，福建 泉州 362000）

CMIA法與ELISA法測定乙型肝炎標志物的比較分析

陳清林

（泉州市第一醫院檢驗科，福建 泉州 362000）

目的 探討化學發光微粒子免疫分析法（CMIA）及酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法測定乙型肝炎標志物的比較分析。方法 采用CMIA及ELISA 2種方法及相應儀器分別檢測300份臨床血清，比較分析血清中乙型肝炎標志物的水平，對結果進行統計分析。結果 ELISA與CMIA法兩種方法對0.1IU/ml以下的HbsAg均具有檢出效果；HbsAg、HbsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的檢測相互符合率有差異。結論 ELISA法檢測乙型肝炎特殊模式的自動化程度較CMIA法差，CMIA法可動態觀察HBsAg 和 HbsAb的變化，對病情進行有效監測。

乙型肝炎；乙肝病毒標志物；CMIA；ELISA

乙型肝炎病毒（HBV）感染在我國已經流行多年，其中乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的攜帶者約占乙型肝炎（以下簡稱乙肝）患者的十分之一。乙肝的實驗室檢測對診斷/治療有重要參考價值[1]，目前國內醫院檢驗科檢測血清乙肝兩對半大多數采用ELISA的方法，當臨床出現HBsAg低濃度標本時，檢測方法的敏感度尤為重要，由于影響檢測結果的因素眾多，濃度處于灰區附近的標本檢測結果差異性大，臨床重復性差。隨著檢驗技術的不斷發展，CMI分析法以高靈敏度攻克了HbsAg低濃度不易被檢測的問題。本文將ELISA、CMI兩種方法進行比較，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2009年1月至2012年3月300例體檢者，其中男性192例，女性108例，年齡37～55歲，平均（38±3.9）歲。研究對象空腹，無菌情況下用無肝素真空采血管采集肘靜脈血5mL，1小時內， 用3000r/min轉速離心10min，分離并吸取上層血清，溶血樣本棄用，即刻檢測或4℃保存3天內檢測。檢測前樣本恢復至室溫，不可反復復溫。ELISA法測定乙肝“兩對半”試劑盒由廣州達安基因股份有限公司提供，酶標儀、洗板機由上海滬峰生物科技有限公司提供。CMI采用美國雅培全自動酶免分析儀 ARCHI-TECT-i2000及相應配套試劑產品。同時將本省臨床檢驗中心提供的臨界值控制品作為質控標準。操作方法嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.2 檢測方法

1.2.1 Elisa法

根據說明書進行上樣、孵育、洗滌、加酶標抗體、顯色、數據讀取、統計分析。在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1.2.2 CMIA法

本研究CMIA法采用儀器全自動檢測，事先設置標本的位置、檢測內容，儀器自動檢測讀取數據，根據數據進行統計分析。

1.3 結果判讀

將本省臨床檢驗中心提供的臨界值控制品稀釋成不同濃度的標本，利用2種檢測方法進行5次檢測。ELISA法在HBsAg OD值與臨界OD值的比例超過1時顯示為陽性，HBeAb與HbcAbOD值與臨界OD值的比例≤1時顯示為陽性。HBsAg與HbsAb在CMIA法中采取定量法，使用相對光強度（RLU）與標準曲線計算出上述2種指標的濃度，HBeAg、HBcAbRLU與臨界值RLU的比值超過1時顯示為陽性，HBeAbRLU與臨界值RLU的比值≤1時顯示為陽性。

1.4 統計學處理

采用SPSS13.0軟件進行數據分析，數據采用均數±標準差表示。組間比較采用t檢驗，兩組間的相關性采用直線相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 ELISA與CMIA法：兩種方法對0.1IU/ml以下的HbsAg均具有檢出效果，具體如表1。

表1 2種檢測方法敏感度的比較

2.2 ELISA與CMIA法檢測時，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb四項標志物的檢出符合率均高于95%，而HBcAb的檢出符合率僅有87.3%。具體如表2。

表2 ELISA與CMIA法檢測乙肝標志物的結果（n=300）

2.3 兩種方法精密度比較

ELISA法批內3%～5%，批間5%～10%，而CMIA法批內＜3%，批間＜5%。

3 討 論

ELISA檢測法是目前國內各血液檢查最常用的方法之一，根據結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開[2-4]。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。ELISA操作簡單故被廣泛運用，但其加樣、溫度、孵育時間、洗板、顯色等因素的影響，導致有一定的假陽性或假陰性結果，給臨床結果判讀帶來一定程度的影響[5]。

CMIA法將單克隆抗體所包被的磁性微粒，作為固相載體（如磁性微粒、樹脂、聚苯乙烯珠），使小分子顆粒與抗體結合，使抗體捕捉能力得到提高，并增強了表面積的吸咐，且能與液體在磁場中分離，使其檢測具有檢測速度快、靈敏度高、重復性好、操作簡便的優點，對提高臨床有關疾病的診斷的速率有重要意義[6]。且該方法所使用的試劑對人體無危害、準確度高、線性范圍廣，值得臨床推廣。美國雅培全自動酶免分析儀ARCHI-TECT-i2000系統的自動化使人工操作誤差減少，標本間相互交叉污染率低，且儀器的自動化做到了隨機連續檢測，適于臨床檢驗即時之需，所以可檢出人群中低濃度和自然感染獲得的乙肝核心抗體。

本研究顯示ELISA及CMIA均能夠滿足臨床檢驗的需求，但是從自動化程度可知CMIA技術較為理想，但其試劑、儀器費用較高，醫療單位可根據實際情況進行檢測方法的選擇。

[1] 駱抗先.乙型肝炎基礎和臨床[M].2版.北京:人民衛生出版社, 2001:56-532.

[2] Kessler HH. Comparison of currently available assays for detection of hepatitis B virus DNA in the routine diagnostic laboratory [J].Expert Rev Mol Diagn,2005,5(4):531-536.

[3] 閆伯英,胡志東.乙型肝炎病毒變異的臨床研究進展[J].檢驗醫師,2006,6(3):126-128.

[4] 陳慧英,張錦鋒,岑小鵬,等.ELISA檢測乙型肝炎HBsAg室內質控血清的試劑和使用[J].上海醫學檢驗雜志,2000,15(4):203-205.

[5] 朱惠君,徐志康,劉和錄,等.全自動酶聯免疫分析儀最佳操作模式探討[J].醫療衛生裝備,2008,29(5):99-100.

[6] 趙玉瑩,李維娜.兩種方法對乙型肝炎HBc-IgG陽性結果的比較[J].黑龍江醫學,2008,32(6):444-445.

R512.6+2

B

1671-8194（2013）25-0213-02