乳腺癌中CD44S和CD44V6基因蛋白表達的實驗研究

章 革 李 濤

（營口市婦產兒童醫院，遼寧 營口 115000）

乳腺癌中CD44S和CD44V6基因蛋白表達的實驗研究

章 革 李 濤

（營口市婦產兒童醫院，遼寧 營口 115000）

乳腺癌；基因；蛋白表達；實驗研究

細胞黏附因子為一種細胞表面跨膜糖蛋白分子，分布于諸多細胞表面，包括淋巴細胞、單核細胞、RBC，成纖維細胞、上皮細胞、平滑肌細胞及腫瘤細胞等。

CD44參與淋巴細胞的激活，以及細胞間透明質酸的特異性黏附，變異性CD44基因的多樣性表達與腫瘤的生長、轉移、復發等腫瘤生物學行為相關。

我們應用免疫組化方法對乳腺癌中CD44S和CD44V6基因蛋白產物表達與組織學分型、脈管浸潤、淋巴轉移、預后、復發等相關性進行實驗研究。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集本院2000年1月至2010年12月間，161例原發性乳腺癌根治術后的臨床病理及隨訪資料，最大年齡83歲，最小年齡29歲，中位56歲。病史9個月～6年，最長隨訪時間為7年。根據WHO（2003）乳腺癌分類及分級標準，進行組織學分類。

1.2 方法

每例選出最具組織學分型代表性、最大腫瘤表面部分，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，常規4～5μm連續切片供實驗研究。采用免疫組化檢測CD44s、CD44V6、CD34在乳腺癌中的表達，具體實驗步驟參照試劑盒說明書進行。用PBS代替一抗作為陰性對照。抗原修復：檸檬酸鹽緩沖液中120℃ 5min Monoclonal Antibody CD44S 瑞典（NOVO Castra）1∶50稀釋。Monoclonal Antibody CD44V6美國（R&D 1∶1000） 稀釋。ABC方法免疫染色，脈管浸潤實驗研究采用CD34單抗（R&D1:100）標記脈管內皮細胞，與H·E雙重染色鑒別血管、淋巴管。

1.3 判斷標準

CD44S 200X全視野：（—）：陽性細胞數＜25%、（1+）：陽性細胞數25%～50%、（2+）：陽性細胞數50%～75%、（3+）：陽性細胞數＜75%。CD44V6×200全視野：（—）：陽性細胞數＜25%、（1+）：陽性細胞數25%～50%、（2+）：陽性細胞數50%～75%、（3+）：陽性細胞數＜75%。

脈管浸潤：以CD34陽性表達確認脈管內皮細胞，管腔內觀察到腫瘤細胞或瘤栓者為浸潤陽性。（管腔內觀察到RBC為血管，無RBC是淋巴管）。

1.4 統計學分析

采用SPSS11.5統計學軟件進行處理，各組間相關性檢測采用Spearman等級相關分析檢驗。

2 結 果

2.1 乳腺癌組織中，CD44S表達陽性率為32.9%，CD44V6表達陽性率為67.0%；CD44表達陽性率與組織學類型之間無顯著性差異；脈管浸潤在各組織學分型中，分別為硬癌＞導管內癌＞乳頭狀腺癌；脈管浸潤與淋巴結轉移（P＜0.001）或遠隔轉移（P＜0.05）間有顯著性差異；脈管浸潤陽性者中CD44S表達陽性率為70%，CD44V6表達陽性率為58%；腋窩淋巴結轉移灶與原發灶間CD44基因蛋白的表達為原發灶CD44S表達陽性率72.7%，CD44V6表達陽性率100%；腋窩淋巴結 CD44S表達呈陰性，CD44V6表達陽性率為63.6%；脈管內癌細胞CD44S表達陽性率為8.7%；脈管內癌細胞CD44V6表達陽性率為（20%）；CD44陽性表達與死亡呈正相關；CD44陽性表達與腫瘤復發呈正相關。

2.2 CD34基因蛋白標記脈管內皮細胞，突出顯現脈管形態學特征。

3 討 論

CD44是一種由單一基因編碼構成的一類具有高度特異性的多功能單鏈跨膜糖蛋白，其變構體CD44V6主要參與異質性黏附，即瘤細胞與宿主細胞及宿主基質的黏附，異質性黏附在癌細胞侵襲、轉移過程中起到促進作用[1]。本實驗研究檢測161例乳腺癌標本中，CD44S陽性表達為32.9%，CD44V6陽性表達為67.0%，CD44V6的陽性表達率明顯高于CD44S。見表1。

表1 乳腺癌中CD44S、CD44V6表達

腋窩淋巴結轉移灶中CD44S無表達，CD44V6表達64%，其原發灶CD44S表達72%，V6表達100%。提示已有轉移的原發灶和轉移灶中均能檢測出CD44V6的高表達。符合Yoshida等[1]張真等[2]的觀點。

原發灶與轉移灶中，CD44基因蛋白產物表達的減弱與缺失提示CD44S基因蛋白在伴隨癌細胞轉移到轉移灶之前，擔負著癌細胞與內皮細胞的黏附及在基質中的運動，在癌細胞轉移、擴散、浸潤的過程中，癌細胞突破腫瘤與宿主間的免疫屏障受CD44S特異性單克隆抗體的抑制，以至表達缺失。

在原發灶與轉移灶中，CD44V6的高表達率提示腫瘤細胞可能獲得淋巴細胞的“偽裝”逃避人體免疫屏障的識別，且易于進入淋巴結，并依賴CD44V6的黏附特性，完成腫瘤細胞轉移，侵襲等生物學行為，與左文述等的報道一致[3]。

Kim H等認為：“CD44的表達可能與腫瘤細胞增殖、分化有關”[4]。我們的實驗結果認為：不能否定CD44的表達可能與腫瘤細胞增殖、分化有關，但就乳腺癌組織學分類而言，各組織學類型間CD44基因蛋白的表達無顯著性差異。見表2。

同時，本實驗研究中，CD44與腫瘤預后，復發統計結果顯示：CD44V6的陽性表達提示腫瘤預后不良，且證實與腫瘤的轉移潛能有相關性。與Ponta H[5]等的觀點一致。見表3。

瘤細胞在脈管內出現是建立轉移不可缺少的物質基礎，應用CD34標記脈管內皮細胞，突出顯現脈管形態學特征，同時配合H·E復染，準確地觀察到了脈管內瘤細胞的浸潤及血管、淋巴管的鑒別。觀察結果顯示：CD34單克隆抗體標記，內皮細胞著色清晰，脈管形態顯現明了[6,7]。脈管內經Esin復染可確切觀察RBC的有無，以此鑒別血管或淋巴管。應用其方法觀察發現：脈管浸潤與乳腺癌中各組織學分型的生物學行為相吻合，其發生率依次為硬癌＞導管內癌＞乳頭狀腺癌。脈管浸潤與淋巴結轉移（P＜0.001）遠隔轉移（P＜0.005）有顯著性差異，提示CD44基因蛋白產物的表達有脈管浸潤，淋巴結轉移、遠隔轉移及脈管浸潤與組織學分型及生物學行為中有直接或間接意義。

表2 CD44基因蛋白表達與組織學分型

表3 CD44表達與腫瘤復發

綜上所述：細胞黏附因子CD44S、CD44V6在乳腺癌轉移、復發等生物學過程中，發揮著生物學介導、黏附作用。CD44S、CD44V6在癌組織中的強表達提示腫瘤復發、轉移、預后不良。腫瘤原發灶與轉移灶間CD44S表達缺失或減弱可能與CD44單抗的抑制、阻止及蛋白終產物生物學效應的改變相關[8,9]。CD44的變異性表達可做為早期診斷瘤細胞浸潤轉移、預后的生物學指標。CD34基因蛋白標記脈管內皮細胞，突出顯現脈管形態學特征，可作為脈管內瘤細胞觀察及血管、淋巴管鑒別的客觀指標和方法。

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[3] 左文述.黏附分子CD44V6和P53基因在乳腺癌組織中的表達及其與DAN倍體的關系[J].癌癥,2004,23(11s):1418-1422.

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R737.9

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1671-8194（2013）11-0073-02