SCNN1A基因多態性與氫氯噻嗪降壓療效的相關性

徐嬌霞 向 波 向 輝 熊 文 彭林林 張建文 王冬麗

（吉首大學第一附屬醫院，湖南 吉首 416000）

SCNN1A基因多態性與氫氯噻嗪降壓療效的相關性

徐嬌霞 向 波 向 輝 熊 文 彭林林 張建文 王冬麗

（吉首大學第一附屬醫院，湖南 吉首 416000）

目的 探討上皮細胞鈉通道α亞基（SCNN1A）基因單核苷酸多態性位點rs2228576與氫氯噻嗪降壓療效的相關性。方法 選取新發的輕中度原發性高血壓患者110例，均來自吉首市的常住苗族人群。予以氫氯噻嗪口服治療8周，對降壓療效進行評定。用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）技術分析患者SCNN1A基因rs2228576多態性的分布頻率。結果 EH患者存在三個基因型（AA、AG及GG），頻率分別為（0.127，0.509，0.364）。rs2228576位點不同基因型與經DHCT治療后DBP的降低幅度有關，降壓療效間差異有統計學意義（F=11.522，P＜0.05），收縮壓降低幅度間無統計學意義（F=2.841，P＞0.05）。結論 SCNN1A基因rs3828942多態性可能與DHCT的降壓療效有關。

上皮細胞鈉通道α亞基；基因多態性；原發性高血壓；氫氯噻嗪

原發性高血壓（essential hypertension，EH）是由遺傳與環境多因素相互作用所致的疾病，成人發病率超過20%[1]。采取正確有效的降壓治療方案，能大大降低腦血管意外事件和急性心梗等心血管疾病發生率。氫氯噻嗪（DHCT）通過抑制腎臟的遠曲小管鈉離子重吸收，增加水分排出而降低血壓。DHCT是一線利尿降壓藥物，適用于輕中度EH患者。DHCT具明顯個體差異，其作用靶點的基因多態性與降壓療效及不良反應密切相關，體現出明顯遺傳易感性。分布于腎臟集合管和遠曲小管的上皮細胞鈉通道α亞基（epithelial sodium channel，ENaC）是控制鈉排除的重要細胞器。目前有報道[1-2]，SCNN1A基因單核苷酸多態性與EH發病相關，但未見有關SCNN1A基因多態性與DHCT降壓敏感性的相關報道。本研究旨在探討在吉首地區苗族EH患者中，SCNN1A基因多態性位點rs2228576與DHCT降壓療效的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象

隨機選擇2012年1～12月來湘西州人民醫院首次確診的苗族EH患者。所選病例均符合《1999年WHO/ISH高血壓治療指南》分類標準：收縮壓（systolic blood pressure，SBP）≥140mmHg和（或）舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）≥90mmHg，且排除繼發性高血壓。病例排除標準：SBP≥180mmHg和（或）DBP≥110mmHg，及需聯合用藥的復雜病例；單純收縮期高血壓、腎動脈狹窄者；合并糖尿病，近1年內有心肌梗死、充血性心力衰竭、腦卒中或部位定性心絞痛史者；肝腎功能不全者。經過篩查共入選140例EH患者，其中30例患者因為不能耐受藥物副作用等原因未完成隨訪，所有受試者均簽署了知情同意書。完成數據統計的患者共110例，其中男54例，女56例，年齡范圍35～68歲，平均年齡（50.0±9.2）歲。

1.2 方法

1.2.1 DHCT治療方案及隨訪：所有EH病例均予以DHCT（常州制藥廠有限公司，批準文號：H32021683）進行降壓治療。每日劑量：50mg/1-2次，隨訪頻率：2周/次。若第4周末，血壓≥140/90mmHg，加倍劑量。第8周后，按照衛生部制定的心血管藥物臨床研究指導原則進行降壓療效評定，DBP下降≥10mmHg并降至正常，或下降≥20mmHg者為顯效；DBP下降＜10 mmHg并降至正常，或下降10～19mmHg，或下降≥30mmHg為有效；未達到上述標準判為無效。

1.2.2 基因提取與擴增：取100微升EDTA抗凝全血，采用北京厚生博泰試劑盒提取DNA，-20℃保存。運用本課題組前期設計的擴增方案[3]，引物序列為：1：5'-TCGGCTCCTCGGTGTTGT-3'，2：5'-GCCCTT ACCCATCTTGCTT-3'。引物由上海生工公司合成。PCR擴增體系：5μL 10×PCRbuffer，5μL 2mM dNTP，3μL 25mM MgCl2，引物各1μL，0.2μL 5U/μL Taq酶，2μLDNA，加水至50μL。擴增條件：94℃預變性4min；然后94℃變性30sec，58℃ 40sec，72℃ 50sec，30個循環。

1.2.3 基因型鑒定：運用本課題組前期設計的方案[3]，取10μL 產物，加5U ×cmI內切酶（NEB公司），2μL 10×buffer，37℃酶解3h，用2.0%瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像系統中分析酶切產物基因型。

1.3 數據處理

采用單因素方差分析Hardy-Weinberg平衡及各種計量資料，用χ2檢驗統計計數資料，用多元逐步回歸分析基因型與降壓幅度的相關，用Ridit分析等級資料。采用SPSS15.0進行統計學處理，以P＜0.05為有統計學意義。

2 結 果

2.1 SCNN1A基因不同基因型一般數據比較

見表1。

表1 不同基因型患者的一般資料比較

2.2 SCNN1A基因多態性與DHCT降壓療效的相關性

吉首苗族不同基因型間DBP降低幅度差異有統計學意義（P＜0.05）；不同基因型間SBP降低幅度差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同基因型患者的降壓療效比較

2.3 多元逐步回歸分析

對可能影響DHCT降壓的因素校正（年齡、性別、BMI、飲酒、吸煙、心率、藥物劑量和肝腎功能等）。結果顯示：治療后DBP的降低幅度與不同基因型與有關（R2=1.021，P＜0.05）；未發現SBP降低幅度與基因型存在相關性。見表1。

3 討 論

藥物治療是目前治療EH的主要方式，幾十年來，雙氫克尿噻（DHCT）一直是臨床一線的重要降壓藥物。盡管DHCT運用廣泛，但是不同個體對其降壓療效有很大差異。雖然生活環境、年齡和性別等非遺傳因素都可以影響降壓效果，但近年國內外的研究發現個體的基因變異與抗高血壓藥物的療效存在密切關系[4]。水鹽代謝調控通路上的基因變異可以解釋20-80%的利尿藥降壓反應的個體差異。故有關高血壓相關基因多態性與降壓藥物療效的研究具有重要的意義，也是降壓藥領域的熱點之一。

SCNN1A基因位于12號染色體短臂13區，總共有27個外顯子及內含子，囊括3萬余個堿基對。rs2228576是指14號外顯子的A可突變為G，在蛋白質翻譯過程中α亞基羧基末端發生丙氨酸取代蘇氨酸。有研究證實，上皮細胞鈉通道羧基末端特定序列（即突變所在位點的序列）與Nedd4-2結合以及通道的泛素化參與上皮細胞鈉通道降解[2]。Samaha等報道[5]，未發生突變的上皮鈉通道其電流量高于突變型，人類上皮細胞鈉通道的內攝降解與活性可能與該多態性密切相關。本課題組前期研究未發現SCNN1A基因rs2228576多態性與EH密切相關[3]。但國內外有研究發現該多態性與EH相關[6-8]。本研究結果發現，吉首地區苗族SCNN1A基因AA/AG基因型的DBP降壓療效高于GG基因型（P＜0.05）。這與本課題組前期研究假設的相互印證，即這提示該多態性可能會影響通道的表達數目以及活性。

目前，有關rs2228576多態性與原發性高血壓患病率相關性，及其影響DHCT降壓敏感性的機制尚不明了，有待運用表觀遺傳學等理論深度剖析上述問題。

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R544.1

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1671-8194（2013）31-0165-02