Smad7在胃癌組織中表達及其與幽門螺桿菌關系的臨床研究

楊小艷 楊 勇 張 旭 鐘玉全

（內江市第一人民醫院消化內科，四川 內江 641000）

Smad7在胃癌組織中表達及其與幽門螺桿菌關系的臨床研究

楊小艷 楊 勇 張 旭 鐘玉全

（內江市第一人民醫院消化內科，四川 內江 641000）

目的 研究Smad7在胃癌組織中的表達及其與幽門螺桿菌的關系。方法 采用免疫組織化學方法檢測30例胃癌、20例不典型增生、25例慢性胃炎和20例正常對照的胃黏膜組織中Smad7蛋白、TGF-β1的表達變化。結果 在胃癌和不典型增生組織中Smad7蛋白和TGF-β1表達均明顯高于慢性胃炎和正常胃黏膜組織，各組相比差異有統計學意義（P均＜0.01），幽門螺旋桿菌陽性的患者中，Smad7的表達量顯著高于陰性者（P均＜0.05）。結論 Smad7蛋白和TGF-β1共同參與胃癌的形成，Smad7在幽門螺旋桿菌相關性胃病中發揮重要作用，Smad7高表達對于胃癌的發生發展也起著非常重要的促進作用，抑制Smad7高表達有可能可以抑制腫瘤發展，可能成為防止腫瘤進展的新策略。

胃癌；Smad7；轉化生長因子β1；幽門螺桿菌

TGF-β/Smads信號通路在惡性腫瘤的發生和發展中起著舉足輕重的作用，在胃癌組織中，TGF-βl及其受體的異常表達可能促進腫瘤的發生和演進[1]，Smad7對TGF-β受體后信息調控表現為負性調節，其在器官纖維化方面研究比較多，而在胃黏膜各種病變組織中研究報道甚少。標本中Smad7和TGF-βl蛋白表達，以期了解TGF-β/Smads信號傳導通路在胃癌發生中的作用，及Smad7在研究組織中的變化及其與幽門螺桿菌的關系。

1 材料與方法

1.1 材料

30例胃癌組、20例不典型增生組、25例慢性胃炎組和20例正常胃黏膜組織（正常組）蠟塊標本均取自內江市第一人民醫院胃鏡室送檢至病理科的活體蠟塊。

1.2 方法

每個蠟塊連續切片6張，切片厚度3um，載玻片預先處理備用，采用SP法對二種指標進行檢測，每種抗體均以已知陽性片做陽性對照。Smad7、TGF-βl蛋白陽性染色表現為細胞漿內均勻的棕黃色顆粒。采用雙盲法根據陽性細胞百分比和陽性細胞染色強度進行打分，然后根據兩項打分之積判斷結果，≤3分為陰性，＞3分判定為免疫反應陽性，按每張切片的陽性細胞數比例及著色深淺計分，行半定量分析[2]。

1.3 統計學方法

用SPSS 13.0統計學軟件對相關數據進行統計分析，P＜0.05有統計學意義，計數資料用χ2檢驗，計量資料用兩樣本t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1 Smad7蛋白表達

Smad7蛋白表達在胃癌組及不典型增生組中的陽性率高于慢性胃炎組及正常組，各組相比差異有統計學意義（分別為χ2＝45.542，P＜0.01，χ2＝48.663，P＜0.01，χ2＝34.302，P＜0.01，χ2＝37.592，P＜0.01）各組中Smad7免疫組織化學染色結果：胃癌組（30例）：陽性26例，陰性4例，陽性率86.7%；不典型增生組（20例）：陽性17例，陰性3例，陽性率85%；慢性胃炎組（25例）：陽性7例，陰性18例，陽性率28%；正常組（20例）：陽性3例，陰性17例，陽性率17.6%。

2.2 TGF-βl蛋白表達

TGF-βl蛋白表達在胃癌組及不典型增生組中的陽性率高于慢性胃炎組及正常組，各組相比差異有統計學意義（分別為，χ2＝19.985，P＜0.01，χ2＝23.325，P＜0.01，χ2＝17.369，P＜0.01，χ2＝19.583，P＜0.01），各組中TGF-βl免疫組化染色結果為：胃癌組（30例）：陽性23例，陰性7例，陽性率76.7%；不典型增生組（20例）：陽性13例，陰性7例，陽性率65%；慢性胃炎組（25例）：陽性4例，陰性21例，陽性率16%；正常組（20例）：陽性3例，陰性17例，陽性率15%。

2.3 Smad7在各組中的表達及其與幽門螺桿菌（HP）的關系

幽門螺旋桿菌陽性的患者中，細胞漿中Smad7的表達量顯著高于陰性者（P＜0.05），且胃癌組患者中Smad7 的表達高于不典型增生組、慢性胃炎組與正常組，相比有統計學意義（P均＜0.05），見表1。

表1 Smad7在各組中的表達（）

表1 Smad7在各組中的表達（）

注：幽門螺旋桿菌陽性的患者中，胃癌組及不典型增生組與其他組相比P均＜0.05

分組例數表達強度胃癌組HP(+) 183.78±1.62 HP(-) 123.12±0.85不典型增生組HP(+) 122.65±1.23 HP(-) 82.12±0.61慢性胃炎組HP(+) 141.81±0.53 HP(-) 111.60±0.19正常組HP(+) 60.69±0.84 HP(-) 140.55±0.47

3 討 論

轉化生長因子-β（TGF-β）哺乳動物存在3種亞型（TGF-βl～3），在細胞的生長、分化、遷移、凋亡等方面發揮重要的調節作用，其中含量最高具有生物活性的是TGF-βl，幾乎所有腫瘤細胞內可檢測到TGF-βmRNA。

SMAD蛋白是唯一的TGF-β受體后信使分子，介導TGF-β信號從細胞膜傳入細胞核。TGF-β/Smads信號傳導是通過與受體依次結合、磷酸化實現的，激活特定靶基因，調節細胞生長和分化，若其中任何因子異常均可導致異常生物學效應。Kim SH等[3]研究發現TGF-β和Myc基因的晚期階段呈正相關，Smad1/2/3、Smad4與早期的階段密切相關，表明TGF-β/Smads貫穿在胃腫瘤發生過程中。Lu B等[4]研究TGF-βRII，Smad4和Smad7表達與胃癌預后的臨床病理特點，發現TGF-β/Smads信號通路蛋白異常表達可導致胃癌的發生，胃癌細胞中存在著不同程度的TGF-βRII缺乏或突變，不能與TGF-β正常結合，最終引起負反饋調節，使TGF-βl表達過度，Smad7的表達與腫瘤分化程度相關，Smad4陽性胃癌患者比陰性患者有較好的預后，Smad4的表達與患者的生存率相關。本研究表明，Smad7蛋白、TGF-βl表達在胃癌組及不典型增生組中的陽性率高于慢性胃炎組及正常組，各組相比差異有統計學意義。

Smad7的高表達導致TGF-β信號通路發生紊亂，TGF-β對細胞生長、增殖的抑制能力降低，從而促進細胞的惡性轉化。在胰腺癌中Smad7表達增高，并且轉染了Smad7基因的胰腺癌細胞惡性程度明顯增加[5]，其可抑制TGF-β信號通路，在反饋調控中起關鍵作用，提示Smad7表達的增高可促進腫瘤的發生。本研究結果顯示，Smad7蛋白在胃癌組織中表達顯著增高，說明Smad7高表達對于胃癌的發生發展也起著非常重要的促進作用。

幽門螺桿菌是胃癌的重要致病因素，Monteleone G[6]研究在HP感染患者的胃粘膜中的誘導和調控作用，研究表明Smad7可抑制在HP感染的活檢標本，使有缺陷的TGF-βl，Smad3蛋白磷酸化，這與抑制性Smad7高表達有關，其可防止內源性TGF-βl的下調。目前已知，IL1β啟動子多態性與HP相關性胃十二指腸潰瘍相關，Datta De D 等[7]研究發現差分激活的Smad7的IL1B啟動子表達下調，使Smad7的水平明顯降低。Smad7在幽門螺旋桿菌相關性胃炎中發揮重要作用，研究認為幽門螺旋桿菌陽性的患者中，細胞漿中Smad7的表達量顯著高于陰性者[8]。本研究結果與此項研究結果一致，在幽門螺旋桿菌感染的患者中，胃癌組患者中Smad7 的表達高于不典型增生組、慢性胃炎組與正常組，相比有統計學意義（P均＜0.05）。

胃癌嚴重危害人民的身體健康，發病機制多種多樣，我們曾成功構建大鼠Smad7真核表達質粒，研究外源Smad7可有效表達[9]，提示其可能參與TGF-β/Smads信號轉導，我們將在以后作進一步的研究。

[1] Guo W,Dong Z.Association of polymorphisms in transforming growth factor-β receptors with susceptibility to gastric cardia adenocarcinoma[J].Mol Biol Rep,2012,39(4):4301-4309.

[2] Sinicrope FA,Ruan SB.bcl-2 and p53 oncopro-tein expression during colorectal tumorigenesis[J].Casmr Res,1995,55(2):237-241.

[3] Kim SH,Lee SH.Extensive alteration in the expression profiles of TGFB pathway signaling components and TP53[J].Histol Histopathol,2008,23(12):1439-1452.

[4] Lu B,Zhou YN.Correlations of TGF-betaRII,Smad4 and Smad7 expression to clinicopathologic characteristics[J].Ai Zheng,2009, 28(5):538-542.

[5] 姜琳,孫燦林.胰腺癌組織中Smad7、uPA及PAI-1的表達及臨床意義[J].江蘇大學學報,2010,20(6):527-530

[6] Monteleone G,Delvecch O.Induction and regulation of smad7 in the gastric mucosa of patients[J].Gastroenterology,2004,126(3): 674-682.

[7] Datta De D,Maitra M.Roychoudhury S.IL1B induced Smad 7 negatively regulates gastrin expression[J].PLoS One,2011,6(3): e14775.

[8] Li Z,Li J.Local expressions of TGF-beta1,TGF-beta1RI,and Smad-7 in Helicobacter pylori-associated gastritis[J].Scand J Gastroenterol,2006,41(9):1007-1012.

[9] 楊小艷,楊勇.大鼠Smad7真核表達質粒的構建及在肝星狀細胞中的表達[J].世界華人消化雜志,2008,16(28):3146-3151.

The Clinical Study on the Expression of Smad7 and Its Relationship with Helicobacter Pylori in Gastric Carcinoma

YANG Xiao-yan, YANG Yong, ZHANG Xu, ZHONG Yu-quan
(Department of Gastroenterology, First People's Hospital of Neijiang, Neijiang 641000, China)

Objective To study the expression of Smad7 in gastric carcinoma and the relationship with Helicobacter pylori.Methods Immunohistochemistry method was used to detect the changes of Smad7 and TGF- β1protein expression in 30 cases of gastric carcinoma, 20 cases of atypical hyperplasia, 25 cases of chronic gastritis and 20 cases of normal gastric mucosa tissues.Results Smad7 and TGF- β1protein expression in gastric cancer and atypical hyperplasia tissue were significantly higher than that in chronic gastritis and normal gastric mucosa tissues. the difference has statistical significance(P＜0.01). Expression of Smad7 cells was significantly higher in H. pylori positive patients than that of negative(P＜0.05).Conclusion The formation of Smad7 protein and TGF-β1in gastric carcinoma, Smad7 play an important role in Helicobacter pylori associated gastric disease, high expression of Smad7 in the occurrence and development of gastric carcinoma also plays an important role in promoting, inhibition of Smad7 expression may inhibit tumor development,may become the new strategies to prevent tumor progression.

Gastric carcinoma; Smad7; Transforming growth factorβ1; Helicobacter pylori

R735.2

B

1671-8194（2013）31-0053-02