高效液相色譜法測定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿和麻黃堿的含量

單婷婷 陳玉敏 水彩紅 胡 丹

（總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 100071）

高效液相色譜法測定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿和麻黃堿的含量

單婷婷 陳玉敏 水彩紅 胡 丹

（總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗(yàn)所，北京 100071）

目的 建立高效液相色譜法測定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿、麻黃堿的含量。方法 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS C18柱 (150mm× 4.6mm，5μm)；流動相：乙腈 -0.01mol/L 庚烷磺酸鈉與 0.02mol/L 磷酸二氫鉀等量混合溶液（用 10% 磷酸調(diào)節(jié) pH 值 2.8）（19 ∶ 81）；檢測波長：206nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃。結(jié)果 鹽酸偽麻黃堿在 1.51 ～ 48.4ng、鹽酸麻黃堿在 16.09 ～ 515ng 線性范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好。平均回收率分別為偽麻黃堿 90.98%（RSD=2.22%）、麻黃堿 95.91%（RSD=2.68%）。結(jié)論 此方法簡便，準(zhǔn)確，靈敏，可用于麝香接骨膠囊中麻黃的質(zhì)量控制。

麝香接骨膠囊；偽麻黃堿；麻黃堿；高效液相色譜法

麝香接骨膠囊是由赤芍、麻黃、牛膝、當(dāng)歸、沒藥、黃瓜子、血竭、朱砂、土鱉蟲、續(xù)斷、紅花、川芎、兒茶、硼砂 、馬錢子、三七、骨碎補(bǔ)、桂枝、蘇木、乳香、自然銅、人工麝香等22味藥組成得中藥復(fù)方制劑，收載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第五冊。具有散瘀止痛，續(xù)筋接骨的功效，主要用于跌打損傷，筋傷骨折，瘀血凝結(jié)，閃腰岔氣[1]。本品中所含的麻黃具有顯著的中樞興奮作用，為易制毒品，標(biāo)準(zhǔn)中均沒有相應(yīng)含量控制項(xiàng)目。本研究采用高效液相色譜法，成功建立了同時測定麝香接骨膠囊中偽麻黃堿和麻黃堿的含量測定方法[2-4]，從而為麝香接骨膠囊中麻黃的控制提供了可靠的方法和依據(jù)。

1 儀器與試藥

SHIMADZU LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司），Mettler XS205-DU 電子天平（瑞士 Mettler公司）；乙腈、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）；對照品：鹽酸偽麻黃堿（171237-201208）、鹽酸麻黃堿（171241-201007）均購自中國藥品生物制品檢定所；麝香接骨膠囊（批號：20120401、20100301、20110801）由山西黃河中藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：SHIMADZU VP-ODS（5μm，150×4.6mm）；流動相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉與0.02mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8）（19∶81）；檢測波長：206nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：5μL。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氫氧化鈉試液6mL，充分振搖濕潤，放置30min，加入三氯甲烷約60mL，密塞，70℃水浴回流2h，用鋪有少量無水硫酸鈉的濾紙濾過，再加入少量三氯甲烷蕩洗容器后過濾，合并濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?甲醇（3∶7）混合液使溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加混合液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

取鹽酸偽麻黃堿和鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1mL各含5μg和50μg的混合溶液，即得。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 專屬性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各5μL，進(jìn)樣比較上述3種溶液的HPLC圖，結(jié)果表明樣品中偽麻黃堿、麻黃堿與其他組分色譜峰能達(dá)到基線分離，陰性對照品中色譜峰對測定無干擾。見圖1。

圖1 專屬性實(shí)驗(yàn)高效液相色譜圖A.對照品溶液（1.偽麻黃堿2.麻黃堿）；B.供試品溶液；C.陰性對照品溶液

2.4.2 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取不同濃度鹽酸偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿的混合對照溶液5mL，依次注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為見表1。結(jié)果表明，鹽酸偽麻黃堿在1.51～48.4ng、鹽酸麻黃堿在16.09～515ng范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。見表1。

表1 線性關(guān)系考察表

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一批號的麝香接骨膠囊（批號20120401）6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，測定其含量，結(jié)果兩種成分峰面積值得RSD（n=6）分別為2.58%（偽麻黃堿）、2.56%、（麻黃堿）表明本方法有較好的重復(fù)性。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品（批號20120401）3g，按供試品制備方法制備同一份供試品溶液，在相同條件下分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h進(jìn)樣測定，結(jié)果峰面積值得RSD（n=6）分別為2.53%（偽麻黃堿）、2.71%（麻黃堿）表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的同一批次麝香接骨膠囊（批號20120401）樣品1.5g，精密稱定，精密加入兩種對照品混合溶液適量，按供試品溶液的制備方法操作，測定其含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率（n=6）分別偽麻黃堿90.98%（RSD=2.22%）、麻黃堿95.91%（RSD=2.68%）。

2.5 含量測定

取樣品分別按供試品制備方法制備供試品溶液，測定兩種成分的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討 論

3.1 通過實(shí)驗(yàn)，偽麻黃堿和麻黃堿在206nm吸收都較強(qiáng)，故選擇吸收波長為206nm。

3.2 提取溶劑的選擇：試驗(yàn)選用甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷作為提取溶劑進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，三氯甲烷提取率最高。故選擇三氯甲烷作為提取溶劑。

3.3 提取方法的選擇：以三氯甲烷為溶劑，提取方法分別采用超聲提取30min、加熱回流提取30分鐘、1h、2h、3h。結(jié)果顯示回流提取率較高，最終選取加熱回流2h。

3.4 采用氫氧化鈉堿化，有利于生物堿從水溶液中鹽析，易于被三氯甲烷萃取，但要嚴(yán)格控制氫氧化鈉的加入量，否則就成為液液分配萃取，導(dǎo)致所測成分不能被三氯甲烷完全萃取出來。

[1]國 家 藥 典 委 員 會 .中 國 衛(wèi) 生 部 藥 品 標(biāo) 準(zhǔn) 中 藥 成 方 制 劑 (第 五冊)[S].1999:209.

[2]國家 藥典 委員會.中華人 民 共和國 藥典 (一 部 )[S].北 京:中國醫(yī) 藥科技出版社,2010:47-48.

[3]劉濤,王曉輝,趙云麗,等.離子對色譜法測定麻杏石甘湯中的麻黃堿和偽麻黃堿[J].色譜,2006,24(4):417.

[4]郭青,孫姍,呂霞,等.反相離子對高效液相色譜法測定疏風(fēng)活絡(luò)丸中4種生物堿的含量[J].藥物分析雜志,2009,29(1):6-9.

R282.710.3

：B

：1671-8194（2013）09-0094-02