注射用雙黃連的體外抗菌活性研究

李國慶 胡辛欣 李聰然 王秀坤 張偉新 宋坤改 母立新 游雪甫 楊信怡

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，北京 100050）

注射用雙黃連的體外抗菌活性研究

李國慶 胡辛欣 李聰然 王秀坤 張偉新 宋坤改 母立新 游雪甫 楊信怡

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，北京 100050）

目的 評價(jià)注射用雙黃連的體外抗菌活性。方法 采用平皿二倍稀釋法測定注射用雙黃連對多種臨床分離菌的 MIC 值，以評價(jià)注射用雙黃連的體外抗菌活性。結(jié)果 注射用雙黃連對包括革蘭陽性菌和革蘭陰性菌在內(nèi)的多種細(xì)菌均具有一定的體外抗菌活性。結(jié)論 注射用雙黃連對多種革蘭陽性菌和革蘭陰性菌細(xì)菌具有體外抗菌作用。

注射用雙黃連；體外抗菌活性；最低抑菌濃度

注射用雙黃連是由金銀花、黃芩和連翹制成的中藥粉針劑，具有抗病毒、抗菌和增強(qiáng)免疫力等多種藥理作用，目前臨床上廣泛應(yīng)用于上呼吸道感染、肺炎、腮腺炎等多種由病毒和細(xì)菌引起的感染性疾病，有確切的臨床療效[1]。但截至目前，尚未有注射用雙黃連抗菌活性的系統(tǒng)研究，因此本論文開展了其對多種細(xì)菌的體外活性初步研究，以為進(jìn)一步研究雙黃連的系統(tǒng)抗菌活性和作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)菌

試驗(yàn)菌株為47株實(shí)驗(yàn)室保存標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離菌，其中有甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌（MRSA）、甲氧西林耐藥表皮葡萄球菌（MRSE）、青霉素耐藥肺炎鏈球菌（PRSP）、萬古霉素耐藥腸球菌（VRE）、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌等多種耐藥菌。質(zhì)控菌選用金黃色葡萄球菌ATCC29213、糞腸球菌ATCC29212、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.1.2 藥品及試劑

注射用雙黃連（凍干）由黑龍江省松花江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號分別為070522和090403-1，其中090403-1為070522成品經(jīng)10K膜過濾后濾液的凍干粉針。質(zhì)控藥左氧氟沙星，批號30455-200604，為中國食品藥品檢定研究院標(biāo)準(zhǔn)品。CAMH肉湯、腦心浸液培養(yǎng)基均為美國BD公司產(chǎn)品。MH瓊脂購自中國食品藥品檢定研究院。

1.1.3 儀器

英國Denley公司的多點(diǎn)接種器；美國Oxford公司的自動(dòng)分裝器；美國Forma公司的二氧化碳培養(yǎng)箱；日本Sanyo公司的超低溫冰箱；廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)公司的IKA MS2型液體渦漩混合器。

1.2 方法

參照CLSI/NCCLS標(biāo)準(zhǔn)[2]，采用平皿二倍稀釋法和Denlay多點(diǎn)接種器進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)菌用營養(yǎng)肉湯及腦心浸液增菌。藥物用CAMH肉湯二倍稀釋成各種所需濃度，分別加適量到平皿中，MH瓊脂培養(yǎng)基熔化后定量注入含藥液平皿內(nèi)混勻，藥物終濃度分別為：雙黃連0.03，0.06……128mg/mL，左氧氟沙星0.03，0.06……128μg/mL，肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌的培養(yǎng)基內(nèi)含5%脫纖維的羊血，接種試驗(yàn)菌（接種量為104 CFU/點(diǎn)）后置35℃恒溫培養(yǎng)18h（肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌置5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h）后觀察結(jié)果，無菌生長的平皿中所含藥物最小的濃度即為最低抑菌濃度（MIC）。

2 結(jié) 果

注射用雙黃連（凍干）070522和090403-1均具有廣譜抗菌活性，兩者抗菌活性相近，沒有明顯差異，結(jié)果見表1和表2。注射用雙黃連對革蘭陽性菌中金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌，包括MRSA、MRSE的抗菌活性較強(qiáng)，MIC為1～2mg/mL；對化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌，包括PRSP有一定抗菌活性；對糞腸球菌、屎腸球菌，包括VRE的抗菌活性差，MIC值為＞128mg/mL。此外，注射用雙黃連對革蘭陰性菌同樣具有活性，其中對普通變形桿菌、奇異變形桿菌和雷極普魯菲登桿菌的活性強(qiáng)，MIC值為2～4mg/mL，對大腸埃希菌、肺炎克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌、志賀氏菌和其他腸桿菌等革蘭陰性菌，包括產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌、肺炎克雷伯桿菌，均有一定抗菌活性，MIC為2～32mg/mL。質(zhì)控藥物左氧氟沙星的MIC值均在正常范圍以內(nèi)。

表1 注射用雙黃連對革蘭陽性菌的抗菌活性*

表2 注射用雙黃連對革蘭陰性菌的抗菌活性*

3 討 論

目前，注射用雙黃連在臨床中應(yīng)用廣泛，在治療細(xì)菌引起的感染性疾病方面，兒科領(lǐng)域較為常用[3，4]。注射用雙黃連除單獨(dú)使用外，還經(jīng)常與青霉素類和頭孢菌素類抗生素合用[5]，以達(dá)到更好的治療效果。

以往使用注射用雙黃連治療細(xì)菌性感染時(shí)，多針對大腸桿菌和肺炎克雷伯桿菌引起的呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)疾病。本研究結(jié)果顯示，其對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抗菌活性也較強(qiáng)，這為今后擴(kuò)大其抗菌譜，探索針對此兩種細(xì)菌所致感染的治療及輔助治療研究奠定了基礎(chǔ)。

有報(bào)道顯示，注射用雙黃連對產(chǎn)ESBL的大腸桿菌和肺炎克雷伯桿菌具有抑制作用[6]，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。此外，本實(shí)驗(yàn)證明，注射用雙黃連對其他多種耐藥菌的活性與對敏感菌的活性沒有明顯差異，如對MSSA和MRSA，MSSE和MRSE活性均較強(qiáng)，所以對于治療或輔助治療抗生素不敏感葡萄球菌引發(fā)的感染具有一定優(yōu)勢。

試驗(yàn)所用兩個(gè)批號的注射用雙黃連凍干粉由同批原料制備，區(qū)別是090403-1為070522經(jīng)再次過濾的產(chǎn)品，從抗菌結(jié)果可以看出，過濾后產(chǎn)品的抗菌活性與過濾前相近，說明10K膜過濾對活性無影響。

總之，作為一種已被廣泛使用并得到有效驗(yàn)證的中藥制劑，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確了注射用雙黃連的體外抗菌譜及抗菌活性，并且在驗(yàn)證已有結(jié)果的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)其新的抗菌特點(diǎn)，為擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，并為今后進(jìn)一步研究其作用機(jī)制打下了基礎(chǔ)。

[1]張 叢 梅.雙 黃 連 粉 針 的主 要 臨 床應(yīng) 用[J].廣 西 醫(yī) 學(xué),2001,23(6): 1562-1563.

[2]CLSI.Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria That Grow Aerobically:Approved Standard M7-A7. Wayne,Pennsylvania 19087-1898 USA[R].2007.

[3]劉 軍 ,徐 鷹 .雙 黃 連 注 射 劑 的 臨 床 應(yīng) 用 概 況 [J].新 疆 中 醫(yī)藥,2005,23(5):78-81.

[4]張 海 英 ,任 曉 蕾,李玉 珍.雙 黃 連 注 射 液 治 療小兒 肺 炎有 效 性 的Meta分析[J].中國藥房,2010,21(44):4205-4208.

[5]李仲昆,林 杉,李 海 蜀,等.雙黃 連粉 針與4 種 抗 生素伍 用的體外最小抑菌濃度研究[J].中成藥,1999,21(3):137-139.

[6]陶慶春,田歡 棟.雙黃 連粉 針劑 對產(chǎn)ESBLs大 腸埃希菌的 體外 抑菌作用[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,20(6):1382-1384.

R978.1

：B

：1671-8194（2013）09-0084-02

國家自然科學(xué)基金（81273427）；國家十二五科技重大專項(xiàng)（2012ZX09301002）

*通訊作者:E-mail: yangxinyi1976@hotmail.com