HPLC法測(cè)定跌打巴布劑中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1含量

陳文珠 袁小紅

（廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120）

HPLC法測(cè)定跌打巴布劑中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1含量

陳文珠 袁小紅

（廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120）

目的 建立跌打巴布劑中三七皂苷 R1 和人參皂苷 Rg1 的含量測(cè)定方法。方法 采用 HPLC 法，以 Agilent TC-C18ODS 柱為色譜柱，以乙腈 -水 (24:76)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng) 203nm，流速 1mL/min。結(jié)果 三七皂苷 R1 線(xiàn)性范圍為 0.583～29.15μg（r=0.9999，n=5），回收率為 99.9%～100.3%。人參皂苷 Rg1 線(xiàn)性范圍為 0.336～16.8μg（r=0.9999，n=5），回收率為 99.8%～100.2%。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確、可靠、靈敏度高，可用于跌打巴布劑的定量檢測(cè)。

跌打巴布劑；高效液相色譜法；三七皂苷 R1；人參皂苷 Rg1

跌打巴布劑是由乳香、沒(méi)藥、三七、冰片等中藥經(jīng)提取制備而成的巴布劑。原方為《中醫(yī)傷科學(xué)講義》中的跌打膏，具有活血祛瘀，消腫止痛的功效，臨床上用于跌打損傷，骨折傷筋，腫脹疼痛等的治療。方中的三七為名貴中藥，含有多種化學(xué)成分，其中三七總皂苷（PNS）為主要有效活性成分，其含量8%～12%[1]。皂苷類(lèi)成分主要包括三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1等[2]。為了控制跌打巴布劑的質(zhì)量，建立良好的質(zhì)量控制方法，本實(shí)驗(yàn)以跌打巴布劑中用量較大的三七為質(zhì)量控制的研究對(duì)象，參考文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC方法[3，4]，建立跌打巴布劑中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1含量測(cè)定方法，以有效控制跌打巴布劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（美國(guó)WATERS，515泵，2487紫外檢測(cè)器，浙江大學(xué)N3000色譜工作站）；GR-202AND分析天平（日本）。

人參皂苷Rg1對(duì)照品（編號(hào)110703-201027，中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所）；三七皂苷R1對(duì)照品（編號(hào)110745-200617，中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所）；跌打巴布劑（自制，批號(hào)：120316， 120519，120721），陰性制劑按處方制備缺三七巴布劑。乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜條件Agilent TC-C18ODS柱（5μm，250mm×4.6 mm）；Phenomenex保護(hù)柱；流動(dòng)相:乙腈-水（24:76）；流速1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。在上述的色譜條件下，由對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照溶液分析可知，人參皂苷Rg1、三七皂苷R1的出峰時(shí)間分別為15.6、11.1min。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1計(jì)算不低于8000，按三七皂苷R1計(jì)算不低于9000，且巴布劑輔料和方中其他成分無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取干燥的人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對(duì)照品各1.0mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻；精密量取溶液5mL，置50mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，即得。

供試品溶液：取跌打巴布劑1片，揭去防粘層，剪成細(xì)條，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50mL，置80℃水浴加熱2h，濾過(guò)，濾液揮去甲醇，加水20mL混懸，用水飽和正丁醇萃取4次，每次20mL，正丁醇液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0mL，作為供試品溶液。

陰性對(duì)照溶液：取不加三七藥材的巴布劑1片，按照供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系

精密稱(chēng)取人參皂苷Rg13.36mg、三七皂苷R15.83mg，用生理鹽水分別定容至100mL的容量瓶中，振搖即得濃度為33.6μg/mL的人參皂苷Rg1和58.3μg/mL的三七皂苷R1標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品貯備液進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)玫饺藚⒃碥誖g1質(zhì)量濃度為0.336，0.672，1.344，6.72，16.8μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品液；三七皂苷R1質(zhì)量濃度為0.583，1.166，2.332，11.66，29.15μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品液。均進(jìn)樣10μL以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（X）對(duì)峰面積（Y）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，分別得回歸方程Y= 4088.2X-740.97，r=0.9999；以及Y=1100.9X-462.9，r=0.999。人參皂苷Rg1在0.336～16.8μg/mL，三七皂苷R1在0.583～29.15μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，在該色譜條件下的最低檢測(cè)限分別為0.168、0.194μg/mL。

圖1 三七皂苷R1、人參皂苷Rg1的HPLC圖A.混合對(duì)照品；B.樣品；C.陰性對(duì)照（缺三七）；1. 三七皂苷R1；2. 人參皂苷Rg1

2.4 精密度試驗(yàn)

將上述對(duì)照品溶液于冷藏（0～4℃）、避光條件下儲(chǔ)存，吸取10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得人參皂苷Rg1、三七皂苷R1峰面積RSD分別為0.91%、1.22%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

以16.8，11.66μg/mL的人參皂苷Rg1、三七皂苷R1溶液分別在0，8，12，24h進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，其RSD 分別為1.22%、1.72%，顯示人參皂苷Rg1、三七皂苷R1在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取缺三七藥材的陰性制劑，分別精密加入人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對(duì)照品各2.0、3.0、4.0mg，按照“2.2”中供試品制備項(xiàng)下操作。將上述溶液用0.2μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液1.0mL用甲醇稀釋至10.0mL，取10μL進(jìn)樣分析。測(cè)得人參皂苷Rg1平均回收率為100.2%、99.8%、100.1%，RSD為0.27%、0.45%、0.39%（n=5）；三七皂苷R1平均回收率為99.9%、101.1%、100.3%，RSD為0.44%、0.54%、0.35%（n=5）。

2.7 樣品測(cè)定

按“2.2”項(xiàng)下方法，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討 論

3.1 流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)中分別考察了不同的流動(dòng)相甲醇-水、乙腈-水-冰醋酸和乙腈-水，并以不同比例進(jìn)行測(cè)定，以減少出峰時(shí)間，獲得良好的峰型以及溶劑無(wú)干擾為主要目的。結(jié)果表明，以乙腈-水（24∶76）作為流動(dòng)相時(shí)，供試品中其它成分對(duì)三七皂苷R1測(cè)定無(wú)干擾，并且三七皂苷R1色譜峰峰形好，分離度高，出峰時(shí)間也較早。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3.2 供試品提取方法的選擇

三七原藥材的提取方法，2010版藥典采用甲醇回流提取，本實(shí)驗(yàn)對(duì)比研究了乙醇和甲醇的提取效果，結(jié)果甲醇提取更好，故采用甲醇回流提取，水飽和正丁醇萃取，減少其他雜質(zhì)的干擾。

[1]張繼,趙朝偉,趙睿.三七的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè),2003, 12(11):76.

[2]國(guó) 家 藥 典 委 員 會(huì).中 國(guó) 藥 典 .一 部 [S].北 京:中 國(guó) 醫(yī) 藥 科 技 出 版社,2010:11.

[3]宋茹,袁繼民,劉欣.高效液相色譜法測(cè)定三七藥材中人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2005,22(1):69.

[4]藍(lán)義琨,何錦鈞,李子鴻.復(fù)方三七口服液中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量測(cè)定[J].中國(guó)藥業(yè),2005,14(7):44.

HPLC Determination of Notoginsenoside R1 and Ginsenoside Rg1 in Dieda Cataplasm

CHEN Wen-zhu, YUAN Xiao-hong
(Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120,China)

ObjectiveDetermine notoginsenoside R1 and ginsenoside Rg1 in Dieda cataplasm by HPLC.MethodsAgilent TC-C18ODS column was used with the mobile phase containing acetonitrile-water(24:76).The wavelength of detector was set at 203nm.The flow rate was 1mL/min.ResultsThe calibration curves were linear in the range of 0.583～29.15μg for notoginsenoside R1(r=0.9999, n=5) and 0.336～16.8μg for ginsenoside Rg1(r=0.9999, n=5). The recovery of notoginsenoside R1 was 99.9%～100.3%, and that of ginsenoside Rg1 was 99.8%～100.2%.ConclusionThe method is accurate, reliable and simple, and is suitable for the determination of Dieda cataplasm.

Dieda cataplasm; HPLC; Notoginsenoside R1; Ginsenoside Rg1

R282.710.3

：B

：1671-8194（2013）09-0062-02