HPLC法測定復方阿司匹林片中阿司匹林的含量

張毅能 章 霞 劉曉林 劉 君 黃東杰 陳 文

（長沙醫學院 湖南 長沙 410219）

復方阿司匹林片（APC）中含有三個有效成分，分別是A－阿司匹林（乙酰水楊酸）、P－非那西汀（乙酰對氨苯乙醚）和C－咖啡因（1，3，7－三甲基黃嘌呤）。阿司匹林容易潮解生成水楊酸，此外樣品在溶解和分析過程中也有降解現象［1］，因此在APC片的有效成分測定中不可忽視其水解產物水楊酸的干擾。在本實驗中，發現阿司匹林在酸性含水體系中水解現象可以得到抑制，在甲醇－水體系中加入少量乙酸和磷酸作為流動相，既能有效避免阿司匹林的進一步水解，又能將水楊酸與三個有效組分很好的分離，據此建立的測定方法可以同時且準確測定APC中阿司匹林的含量。

1 實驗

1.1 儀器與試劑：LC－100高效液相色譜儀；十八烷基鍵合固定相色譜柱；20μL定量進樣管；LC－UV600紫外檢測器；電子天平。

甲醇為色譜純；乙酸和磷酸為分析純；阿司匹林標準品為分析純；復方阿司匹林片為市售品。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照標準品的配制和樣品溶液的制備

1.2.1.1 對照品標準溶液的制備：精密稱取阿司匹林對照品0.0100 g，置100mL的容量瓶中，加1%乙酸的無水甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL置100mL的容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濃度分別為10、20、30、40、50μg·mL－1。濾膜濾過，取續濾液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜峰面積和濃度c（μg·mL－1）進行線性回歸。

1.2.1.2 樣品溶液的制備：取市售APC片20片于研缽中研細混勻，準確稱取相當于一片的重量（0.5227g）置于干凈的燒杯中，用適量1%乙酸的無水甲醇溶液充分溶解并濾過殘渣后，轉移至500mL容量瓶中稀釋至刻度。再加水超聲溶解約10min，最后加水稀釋至刻度。用濾膜過濾后，棄去初濾液，取續濾液為供試品溶液。

1.3 色譜條件的選擇：本實驗選擇的色譜條件為：流動相是甲醇－水－乙酸－磷酸，體積比為68∶30∶1.5∶0.5；紫外檢測波長為276nm；流速為1.0mL·min－1；柱溫30℃。

2 結果和討論

2.1 線性關系和精密度：色譜峰面積和濃度c（μg·mL－1）進行線性回歸，回歸方程為y＝4077.8x＋1319.5（r＝0.9998）。結果表明，在10～50μg·mL－1范圍內，峰面積與濃度有良好的線性關系。見表1。取線性項下用30μg·mL－1的溶液連續平行測定6次，考察其精密度。結果表明，精密度良好，能夠滿足含量測定的需要。有關結果見表2。

表1 線性關系考察結果

表2 精密度測定結果

2.2 溶液穩定性：取線性項下用30μg·mL－1的溶液，于0、15、30、60、90、120min測其吸收度，考察溶液的穩定性。結果見表3，本品溶液的穩定性良好，吸收度在2h內未見明顯變化，能滿足含量測定的需要。

表3 溶液穩定性考察

2.3 復方阿司匹林片阿司匹林的含量測定：準確移取8.00mL樣品儲備溶液于250mL容量瓶中稀釋至刻度制成供試液，按上述色譜條件進行測定，用外標法以峰面積計算含量。平行測定四次得平均結果（見表4）。

表4 阿司匹林的含量

2.4 加樣回收率實驗：取已知含量的樣品，精密稱定，置50mL容量瓶中，共6份，精密加入阿司匹林對照品，按供試液制備方法制備成相當于樣品測定項下濃度的80%、100%、120%的溶液按上述色譜條件測定。計算阿司匹林平均回收率為99.7%，RSD（n＝6）為0.8%。

3 結論

3.1 樣品溶劑：通過多種溶劑對APC片各組分的溶解性和穩定性的測試發現，1%乙酸甲醇溶液做溶劑時對APC的溶解性和穩定性均較好。實驗表明，在2h內測定樣品溶液，各組分峰面積均無明顯變化，說明降解現象不明顯。

3.2 流動相：本實驗比較了多種流動相體系，實驗發現阿司匹林在酸性含水體系中水解現象可以得到抑制。本實驗以流動相是甲醇－水－乙酸－磷酸，體積比為68∶30∶1.5∶0.5為流動相，既可以使各組分有很好的分離效果，又能保證組分在2h內無水解現象。

3.3 檢測波長的選擇：精密移取阿司匹林對照品溶液（30μg·mL－1），在200～400nm的波長范圍內掃描紫外吸收圖譜，結果在276和227nm處有最大吸收。放置24h后，再掃描吸收圖譜，發現阿司匹林對照品溶液在303nm的波長處有明顯吸收，說明此溶液在放置過程中發生了水解反應，有水楊酸產生，然而在276nm的波長處的變化不大，故選定276nm為測定阿司匹林的波長。

本方法簡便，準確，重復性好，能準確測定復方阿司匹林中阿司匹林的含量，為復方阿司匹林的質量標準提供依據。根據實驗結果，擬確定復方阿司匹林片中阿司匹林的平均含量為224.4mg／片。

［1］ 姚如心，許慶琴，杜黎明.大口徑毛細管氣相色譜法直接測定復方阿司匹林制劑［J］.分析科學學報，2007，23（3）：295－04

［2］ 趙懷清，王學婭，楊麗，程麗珠.膠束薄層色譜法同時測定APC片中3組分含量［J］.沈陽藥科大學學報，2001，18（9）：684－689

［3］ 許占方，徐云室，陳立柱.HPLC法測定阿司匹林的含量［J］.齊齊哈爾醫學院學報.2007，28（3）