多重耐藥鮑曼不動桿菌的β內酰胺酶基因型研究

歐陽英娥 湯鳳珍 陳廣新 胡英華

（廣東省廣州市花都區人民醫院，廣東 廣州510800）

多重耐藥鮑曼不動桿菌的β內酰胺酶基因型研究

歐陽英娥 湯鳳珍 陳廣新 胡英華

（廣東省廣州市花都區人民醫院，廣東 廣州510800）

目的 了解臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌 β 內酰胺酶基因的存在情況。方法 采用 MicroScan40 微生物全自動鑒定系統微量肉湯稀釋法測定菌株的耐藥性。采用聚合酶鏈反應（PCR）方法檢測 β-內酰胺酶基因型。結果 30 株鮑曼不動桿菌除對阿米卡星和左氧氟沙星耐藥率分別為 23.3% 和 30.0% 外，對其他抗菌藥物均達 80.0% 以上。檢出 β-內酰胺酶基因 26 株（86.7%），OXA-23 樣陽性 20 株（66.7%），OXA-51 樣陽性 18 株（60.0%），AMPC 酶陽性 18 株（60.0%），TEM 陽性 5 株 (16.6%)，SHV 陽性 4 株（13.3%），PER 陽性 3 株（10%），14 株（46.6%）同時攜帶 2 種以上基因，未檢出 IMP、VIM、CTX-M-9，DHA、OXA-24、OXA-58。結論 我院多重耐藥鮑曼不動桿菌攜帶多種 β-內酰胺酶基因，而且同時攜帶 3種以上 β-內酰胺酶基因比率高。

鮑曼不動桿菌；多重耐藥；耐藥基因

鮑曼不動桿菌（ABA）是醫院感染常見的病原菌之一，也是目前能夠引起醫院內感染的一種重要的病原菌。近年來其從臨床標本中分離率不斷增加，在非發酵菌中分離率僅次于銅綠假單胞菌，居第2位。隨著抗菌藥物的廣泛使用，多重耐藥鮑曼的不動桿菌比例也在不斷地上升[1]。為了解我院多重耐藥ABA菌株對抗菌藥物的耐藥機制，現在采用聚合酶鏈的反應方法對臨床上分離的多重耐藥30多株ABA菌株檢測其相關β-內酰胺酶的基因型，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源

自2008年09月到2010年10月對我院患者的臨床標本分離進行收集的銅綠假單胞菌進行篩選，一共篩選出32株多重耐藥菌株。多重耐藥的判定標準主要是3類或者以上的抗菌藥物的耐藥菌株，其中中段尿占2株、痰液占28株，以及傷口分泌物占2株，病區主要是來源于神經外科ICU和中心ICU。質控菌株主要是銅綠假單胞菌（ATCC27853）、大腸埃希菌（ATCC35218）。

1.1.2 對儀器和試劑進行選擇，選用美國MicroScan40的微生物全自動進行鑒定的藥敏分析儀器、電泳儀和PCR擴增儀，成像系統選擇UVI凝膠成像儀器。

1.2 方法

1.2.1 藥敏試驗選擇微量肉湯的稀釋法，采用藥敏分析儀，對抗菌藥物的敏感性進行測定，藥敏結果的主要判斷依據是2010年美國的臨床實驗室標準化的研究所標準[3]。

1.2.2 模板制備主要采用煮沸法，選擇已經分純的多個菌落到離心管，離心管里面置入滅菌蒸餾水0.5mL，經過10min的煮沸之后立刻放在冰上進行冷卻冷卻，在4℃1200r/min進行離心5min，選取無菌清液作為DNA模板液，放置在-20℃冰箱中保存備用[4]。

1.2.3 對耐藥基因進行檢測，選擇PCR法，β-內酰胺酶相關耐藥基因PCC擴增引物的序列如表1所示，氨基糖苷類修飾酶基因PCR擴增引物序列如表2所示。靶基因PCR的反應體系主要包括Premix Tag酶體系25μL、上下游的引物各10pmol、模板DNA 4μL、用ddH2O進行補足，一直到50μL。熱循環的參數都是：首先是94℃預變性的45s，然后94℃45s→55℃45s→72℃1min，一共循環35個周期，最后的72℃延伸到10min。取出5μL產物經過2%的瓊脂糖凝膠電泳，檢測基因陽性主要表現為出現目的條帶，最后選擇凝膠成像系統進行觀察、保存攝像[5]。

表1 β-內酰胺酶相關耐藥基因PCC擴增引物的序列

2 結 果

2.1 藥敏試驗結果

30株鮑曼不動桿菌除對阿米卡星和左氧氟沙星耐藥率分別為23.3%和30.0%外，對其他抗菌藥物均達80.0%以上。見表2。

表2 30株鮑曼不動桿菌對15種抗菌藥物的耐藥情況（%）

2.2 基因PCR檢測結果

30株多重耐藥鮑曼不動桿菌檢出β-內酰胺酶基因26株，檢出率為86.7%。20株（66.7%）OXA-23樣陽性，18株（60.0%）OXA-51樣陽性，18株（60.0%）AMPC酶陽性，5株（16.6%）TEM陽性，4株13.3%SHV陽性，3株（10%）PER陽性。同時攜帶3種或以上耐藥基因有14株（46.7%），其中14株同時攜帶OXA-23+OXA-51+AMPC，2株SHV同時攜帶OXA-23+OXA-51+AMPC，2株PER同時攜帶OXA-23+OXA-51+AMPC基因，5株TEM同時攜帶AMPC酶基因。未檢出VIM、IMP、OXA-24、OXA-58、CTX-M-9以及DHA組。

3 討 論

隨著抗菌藥物的廣泛使用，多重耐藥鮑曼的不動桿菌比例也在不斷地上升，鮑曼不動桿菌是醫院感染常見的病原菌之一，也是目前能夠引起醫院內感染的一種重要的病原菌成為了臨床治療中的棘手難題。對鮑曼不動桿菌的耐藥情況進行監測，能夠讓耐藥基因在醫院的流行和散播進行有效控制。β內酰胺類和碳青霉烯類抗菌藥物曾經是ABA菌感染治療的首選藥物。近年來，由產β內酰胺酶ABA菌引起的感染發病率在逐年上升，暴發或流行時有發生[2-5]。本組研究顯示，從臨床各類標本中均可分離出該菌，包括痰液、傷口分泌物和中段尿等，但尤其集中在痰液標本，且分布科室集中在中心ICU和神經外科ICU，說明多重耐藥ABA菌是引起ICU病房獲得性肺炎的重要病因菌之一。本組研究藥敏結果多重耐藥情況嚴重，對亞胺培南耐藥率60.2%，對三代以上頭孢菌素耐藥率均在70.0%以上，因此，應規范該類抗菌藥物的應用，加強抗生素的使用管理，延緩細菌耐藥性的產生[6-7]。

鮑曼不動桿菌耐藥基制復雜，其通過產生多種β-內酰胺酶、金屬β-內酰胺酶、質粒頭孢菌素酶及外膜孔蛋白OprD2缺失等，對多種抗菌藥物產生耐藥性，因此其耐藥情況嚴重，攜帶多種β-內酰胺酶基因且同一菌株同時攜帶3種以上β-內酰胺酶基因比率高[8]。細菌耐藥情況應引起臨床高度重視。合理應用抗菌藥物，采取有效措施控制耐藥菌株的出現，及時切斷多重耐藥菌株的傳播。

[1]汪復,朱德妹,胡付品,等.2007年中國CHINET細菌耐藥性監測[J].中國感染與化療雜志,2008,8(5):325-333.

[2]蔡少華,張進川,俞森洋,等.呼機機相關肺炎的病因學和耐藥性監測[J].中華醫藥感染學雜志,2001,14(4):365-368.

[3]Heritier C,Proiret L,Lambert T,et al.Contribution of Acqured Carbapenem-Hydrolyzing Oxacillinases to Carbapenem Resistance in Acinetobter baumannii[J].Antimicrob Agents Chcntother,2005,49(8): 3198-3202.

[4]Jeon BC,Jeong SH,Bae IK,et al.Investingatian of a nonsocomial outbreak of imipenem Acintobacter baumannii producting the OXA-23 beta-lactamase in korea[J].J Clin Microbiol,2005,43(5): 2241-2245.

[5]黃支密,陳榆,毛培華,等.鮑曼不動桿菌耐藥性及β-內酰胺酶基因型研究[J].中華檢驗醫學雜志,2003,26(11):683-685.

[6]王輝,孫紅莉,廖康,等.北京和廣州地區四家醫藥不動桿菌碳青霉烯基因型研究[J].中華檢驗醫學雜志,2005,28(6):636-641.

[7]史偉峰,姜建平,姚玉華.鮑曼不動桿菌的耐藥性及β-內酰胺酶基因型研究[J].臨床檢驗雜志,2005,23(4):275-276.

[8]湯鳳 珍,張偉紅,陳惠 玲.碳 青霉烯類 抗 生素耐藥鮑曼不動桿菌 碳青霉烯基因型研究[J].中國感染與化療雜志,2010,10(5):636-641.

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：1671-8194（2013）05-0080-02