Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白與喉癌浸潤轉移的關系※

張瑞迪 王樂秋 張立晨 李麗娟 馬秀鳳

Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白與喉癌浸潤轉移的關系※

張瑞迪 王樂秋 張立晨 李麗娟 馬秀鳳

目的研究Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白與喉鱗狀細胞癌（LSCC）的腫瘤浸潤、轉移的關系。方法應用免疫組織化學SP法，檢測30例LSCC標本癌組織中Galectin-3、ret及nm23-H1蛋白的表達情況。結果Galectin-3、ret在LSCC不同病理分化組間的表達差異均有統計學意義（P＜0.05），nm23-H1的表達差異無統計學意義；此三種蛋白在不同的臨床分期及有無淋巴結轉移組間比較差異均有統計學意（P＜0.05）；nm23-H1的表達與Galectin-3、ret的表達呈負相關，Galectin-3與ret的表達無明顯相關（P＞0.05）。結論Galectin-3、ret、nm23-H1與LSCC的浸潤、轉移密切相關。

喉鱗狀細胞癌；Galectin-3； ret；nm23-H1

喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，腫瘤的局部復發、淋巴結轉移和遠處轉移是影響喉癌患者預后的重要因素。本研究通過觀察喉癌組織、和轉移灶中原癌基因ret蛋白、腫瘤轉移抑制基因nm23-H1蛋白、內源性凝集素Galectin-3的表達情況，了解ret蛋白、nm23-H1蛋白和Galectin-3與喉癌病理分化程度、臨床分期及淋巴結轉移之間的關系。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2011年8月～2012年8月期間來我院我科手術切除并經病理學檢查確診的原發性LSCC標本30例，其中男28例，女2例，年齡38～73歲，平均（52.1±6.3）歲，根據2002年國際抗癌協會（UICC）分期方案行臨床分期分組：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期12例；分化程度分組：高分化7例，中分化14例，低分化9例；有否淋巴結轉移分組：有轉移16例，無轉移14例。病例術前均未做過放射治療和化學治療，患者簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑兔抗人nm23多克隆抗體（即用型）、兔抗人ret單克隆抗體和兔抗人Galectin-3單克隆抗體購自武漢博士德公司，SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2.2 免疫組織化學方法臨床標本組織取得后由病理科常規石蠟包埋、切片，行HE染色及Galectin-3、ret、nm23-H1抗體免疫組化S-P法染色。

1.2.3 結果判定由病理科醫生對所有切片進行雙盲閱片及記錄，陽性為細胞質中有棕褐色顆粒染色。陰性為對照組黏膜細胞著色。于高倍鏡下每張切片隨機抽取10個不重復視野計數200個細胞（對極少數不足10個高倍視野的，以觀察到的最多高倍視野計算均值），根據陽性細胞所占百分比分別記錄為不同結果如：陽性細胞數＜10%為陰性，≥10%為陽性。

1.3 統計學處理用SPSS 13.0軟件分析，用χ2檢驗及確切概率法，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 喉癌臨床病理表現與Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白的關系在LSCC不同分化程度各組中，Galectin-3在高分化組與中分化組、低分化組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），ret在組間兩兩比較差異均有統計學意義（P＜0.05），ret的表達與分化程度成負相關，低分化組中表達明顯高于中分化組；nm23-H1的表達在組間兩兩比較差異無統計學意義（P＞0.05）。在不同臨床分期各組中，Galectin-3的表達在各分期間比較差異有統計學意義（P＜0.05），成正相關；ret、nm23-H1蛋白表達在Ⅰ～Ⅱ期組與Ⅲ～Ⅳ期組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。Galectin-3、ret、nm23-H1的表達在有無淋巴結轉移組間比較差異均有統計學意義（P＜0.05），且有淋巴結轉移組表達率明顯高于無淋巴結轉移組，見表1。

2.2 nm23-H1表達與Galectin-3、ret表達的相關性在喉癌組織中nm23-H1的表達與Galectin-3（P＜0.05）、ret（P＜0.05）的表達呈負相關，Galectin-3與ret在喉癌組織中的表達無明顯相關（P＞0.05）。

表1 喉癌中相關基因表達與各臨床病理指標的關系

3 討論

凝集素（Lectin）被廣泛發現于植物及動物組織中，其通過參與或交聯特異的糖結合物，在調節生理過程中扮演了很重要的角色。Galectin-3是唯一的嵌合體凝集素，已知Galectin-3調節相當大一部分細胞的生物學過程，尤其是抑制凋亡和促進細胞增殖[1]。近年來的大多數研究表明，Galectin-3過表達與一些腫瘤發生、發展、侵襲、轉移及預后密切相關，即隨著Galectin-3的表達水平升高，腫瘤易發生侵襲、轉移及預后不良，與國內外學者的研究結果部分一致[2]。本研究結果顯示Galectin-3在LSCC不同病理分化程度中，高分化組與中分化組、低分化組間比較差異有統計學意義（P＜0.05）。由此可見，Galectin-3表達與LSCC組織分化程度密切相關，組織分化程度高，惡性程度低，其蛋白低表達；表達或表達強者多見于組織分化程度低，惡性程度高的LSCC，提示在誘導LSCC分化過程中Galectin-3起重要作用。且本實驗中Galectin-3在臨床Ⅲ～Ⅳ期組及淋巴結轉移組表達率明顯高于其對應對照組，其之間的差異有統計學意義，表明Galectin-3高表達與LSCC的發生、發展、浸潤、轉移密切相關。

ret原癌基因位于10q11.2，編碼一種酪氨酸激酶受體[3]，ret蛋白由胞膜外配體結合區、跨膜區和胞內酪氨酸蛋白激酶功能區組成，其中胞膜外區分為半胱氨酸富集區和鈣粘著蛋白樣配基結合區兩部分，與細胞間的信號轉導有關。ret原癌基因對神經內分泌系統、腎臟的發育，對調節神經嵴細胞的增殖、分化、遷移及腸神經系統的發育都起著重要的作用。在神經生長、分化、成熟中起重要作用[4]。本實驗結果顯示，ret蛋白的表達隨著LSCC分化程度的降低而增加，中分化組中表達明顯低于低分化組（P＜0.05），提示ret在誘導腫瘤分化過程中起重要作用。本研究還顯示，在各臨床分期間及有無淋巴結轉移組間比較差異均有統計學意義（P＜0.05），由此可見，ret蛋白的表達與LSCC的淋巴結轉移及臨床分期相關，隨淋巴結轉移及臨床分期的增加，ret蛋白陽性表達率逐漸升高，提示ret蛋白在LSCC的發展、侵襲轉移過程起重要作用。其機制可能為由于激活性異源基因使癌蛋白形成二聚體引起TK區功能的組成性激活，跨膜區的丟失改變了ret癌基因的細胞內定位，允許這些癌蛋白與異常的底物相互作用，同時ret與普遍表達的異源基因融合而改變了啟動子，使得在正常喉黏膜組織細胞內靜止的ret開始表達，激發酪氨酸激酶自動磷酸化，誘導細胞增生過度以至癌變。

nm23基因（Nometastatic gene 23）是1988年Steeg等[5]在研究小鼠黑色素瘤K-1735的亞細胞克隆株以及化學誘導大鼠乳腺癌細胞時發現的一種cDNA基因。小鼠和人中nm23基因均編碼為分子量為17kD的核內及胞漿蛋白質，人類nm23基因的兩個亞型nm23-H1和nm23-H2均位于17號染色體長臂17q 21～3處，分別編碼18.5kD和17kD兩種蛋白。而轉移抑制功能主要由 nm23-H1 和nm23-H2 體現，其中nm23-H1基因與腫瘤的侵襲轉移最為密切。本實驗結果顯示，nm23-H1表達在不同分化程度組間兩兩比較差異無統計學意義（P＞0.05），在各分期間及有無淋巴結轉移組間比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。由此可見，nm23-H1的表達與LSCC的病理分化程度無明顯相關性。與轉移及臨床分期呈相關性。即隨著nm23-H1表達水平的降低，LSCC表現出臨床分期晚以及更易發生轉移的特點，與國內外學者報道一致。綜上所述，nm23-Hl表達的缺失或失活與LSCC的臨床分期及淋巴轉移密切相關，尤其在反映LSCC向鄰近器官侵犯和淋巴轉移方面有重要價值。

在惡性腫瘤相關的癌基因研究中，許多學者提出了基因協同作用的假說，認為在惡性腫瘤發生、發展和轉移的各個階段，至少有兩個或兩個以上的功能各異且異常激活的基因各自發揮不同作用，并在發生先后及發生位置上相互配合，共同促進了細胞的癌變。本實驗結果顯示nm23-H1的表達與Galectin-3、ret的表達呈負相關，Galectin-3與ret的表達無明顯相關（P＞0.05）。總之，Galectin-3、ret和nm23-H1蛋白在LSCC中的不尋常表達，導致細胞無限增殖和細胞凋亡受阻，在喉癌的發生和發展過程中發揮重要作用。聯合檢測Galectin-3、ret及nm23-H1蛋白可能成為LSCC早期診斷及判斷惡性程度的指標之一。可指導臨床準確估計LSCC的侵襲性和淋巴轉移趨勢，并有助于選擇適宜的治療方案以及評估預后。

[1] Miranda FA, Hassumi MK, Guimaraes MC, et al. Galectin-3 overexpression in inasive laryngeal carcinoma, assessed by computer-assisted analysis[J]. J Histochem Cytochem, 2009,57(7)：665-673.

[2] Sakaki M, Fukumori T, Fukawa T, et al.Clinical significance of Galecyin-3 inc-ear cell renal cell carcinoma[J]. J Med Invest, 2010, 57(1-2)：152-157.

[3] 賈萬鈞,郭艷.CK19、gal-3、HBME-1和Ret蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達[J].浙江臨床醫學,2007,9(11)：1443-1444.

[4] Drosten M, Putzer BM.Mechanisms of Disease, cancer targeting and the impact of oncogenic RET for medullary thyroid carcinoma therapy[J]. Nat Clin Pract Oncol, 2006,3(10)：564-574.

[5] 符生苗.鼻咽癌nm23-H1基因外顯子的檢測[J].醫學研究雜志, 2007,36(9)：30-32.

R34

A

1673-5846(2013)06-0289-03

牡丹江醫學院紅旗醫院耳鼻咽喉科，黑龍江牡丹江 157011

黑龍江省衛生廳科研課題項目（項目編號：2011-301）

王樂秋，女，現任牡丹江醫學院紅旗醫院耳鼻咽喉科主治醫師，碩士，主要從事耳鼻咽喉臨床研究，E-mail：mdjwangleqiu@163.com。