CD14基因多態性與維吾爾族人群支氣管哮喘的相關性研究

夏 宇 閆 芳 齊曼古力?吾守爾 何元兵 米合熱古力?司馬義 楊增榮 王 晶 文 進

CD14基因多態性與維吾爾族人群支氣管哮喘的相關性研究

夏 宇1閆 芳1齊曼古力?吾守爾1何元兵1米合熱古力?司馬義1楊增榮1王 晶1文 進2

目的探討CD14基因啟動子區-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個SNP位點的多態性和新疆維吾爾族人群支氣管哮喘（簡稱哮喘）的關系。方法126例明確診斷的哮喘患者為哮喘組，按1：1配對法收集同性別、族別、居住地、年齡（相差5歲以內）的健康體檢者為對照組。采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）技術檢測各組-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點的多態性。結果CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個SNP位點基因型頻率和等位基因頻率在哮喘組和對照組的分布差異無顯著性（P＞0.05）。-159T/C和-1145G/A位點等位基因頻率在維吾爾族、漢族和高加索人群總體分布上差異有統計學意義（χ2=11.295，P=0.004和χ2=13.029，P=0.001）。結論CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個SNP位點基因型頻率和等位基因頻率分布與維吾爾族人群哮喘無直接關聯。

支氣管哮喘；白細胞分化抗原14基因；維吾爾族；基因多態性

白細胞分化抗原14（Cluster of Dieffrentiation Antigen,CD14）屬于細胞表面糖蛋白的家族成員之一，既是單核細胞分化的一種標記，也是針對微生物以及其它內、外源性應激因子的先天性免疫應答過程中的一種重要的模式識別分子，能與革蘭氏陰性菌內毒素脂多糖（LPS）或脂多糖-脂多糖結合蛋白（LBP-LPS）復合物相結合，介導LPS激活靶細胞，并釋放多種炎性細胞因子，從而在炎癥和感染性疾病的發生、發展過程和調控中發揮重要作用[1]。本研究采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）方法，擬探討CD14基因多態性與維吾爾族哮喘患者發病間的關系，在不同民族、人群中闡明基因型與哮喘的聯系，為揭示哮喘的發病機制提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料在新疆醫科大學第一附屬醫院就診并明確診斷的126例維吾爾族哮喘患者，其中男66例，女60例；年齡16～79歲，平均年齡（41.06±9.75）歲。按1：1配對原則，選擇同性別搭配、同族別、年齡（相差在5歲以內），與患者無血緣關系，無特應疾病史及慢性呼吸系統病史的健康體檢者。研究對象均為長期居住在新疆地區，三代或三代以上未與其他民族通婚的維吾爾族人。所有研究對象受檢個體均簽署知情同意書。采集研究對象外周靜脈血5ml，用枸櫞酸鈉抗凝，迅速（2h內）放入-70℃凍儲，用于提取白細胞DNA。肺功能測定嚴格按照操作常規及程序進行。哮喘組依據中華醫學會呼吸學會2008年制定的支氣管哮喘防治指南[2]診斷標準中的定義、診斷、嚴重程度分級進行分類。

1.2 方法CD14基因分型：按常規酚/氯仿抽提核酸法提取DNA。序列數據來源NCBI的可用數據庫http：//www.ncbi.nlm.nih.gov。引物由上海生工生物有限公司合成。CD14基因3個SNP位點引物序列、PCR擴增、各個片段對應的限制性內切酶及擴增產物大小，見表1。

表1 CD14基因SNP位點PCR引物序列、擴增產物、限制性內切酶及酶切產物

1.3 統計學處理采用SPSS 16.0軟件進行統計學數據處理。兩組基因頻率使用χ2檢驗以確認是否符合Hardy-Weinberg平衡；組間比較采用χ2檢驗；關聯程度用OR及95% CI表示。檢驗水準ɑ=0.05。

2 結果

2.1 CD14基因Hardy-Weinberg平衡定律的檢驗維吾爾族人群哮喘組和對照組3個研究位點均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P＞0.05），具有群體代表性。

2.2 CD14基因基因型分布及等位基因分布頻率比較兩組CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點三種基因型分布比較，差異無統計學意義（χ2=0.104，P=0.949；χ2=0.444，P=0.801和χ2=0.182，P=0.913）。兩組三位點等位基因頻率比較，差異無統計學意義（χ2=0.073，P=0.787；χ2=0.410，P=0.522和χ2=0.171，P=0.679），見表2。

表2 CD14基因三位點基因型分布頻率及等位基因頻率比較(n,%)

2.3 CD14基因-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點等位基因頻率與不同人群、種族的比較分析將研究的新疆維吾爾族人群在CD14基因啟動子區-159T/C、-1145G/A、-1359G/T位點等位基因頻率與中國漢族人群、白種人群比較后發現，-159T/C位點等位基因頻率在上述三組人群總體分布上差異有統計學意義（χ2=11.295，P=0.004），進一步兩兩比較發現，維吾爾族人群-159T/C位點C等位基因頻率（44.0%）和中國漢族人群（42.9%）低于白種人（54.0%），（χ2=6.766，P=0.009和χ2=8.113，P=0.004）；該位點等位基因頻率在維、漢兩民族之間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。-1145G/A位點等位基因頻率分布在吾爾族人群、漢族人群和白種人中比較差異有統計學意義（χ2=13.029，P=0.001），進一步兩兩比較發現，維吾爾族人群-1145G/A位點A等位基因頻率（40.1%）與中國漢族人群（33.8%）或白種人（45.4%）比較差異無統計學意義（P＞0.05）。-1359G/T位點等位基因頻率在上述三組人群總體分布上差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

3 討論

CD14基因位于第5號染色體長臂3區1帶-長臂3區3帶，其中包含有許多與變應性疾病、哮喘、氣道高反應（BHR）相關的候選基因[3-4]。已有研究表明，在美國人群[5]、捷克人群[6]、拉丁美洲人群[7]、日本人群[8]和韓國人群[9-10]的研究中均發現CD14基因啟動子區的多態性與哮喘及過敏性疾病相關聯。而在德國[11]、波蘭和高加索兒童[12-13]的研究中卻未得出相似結論。我國有研究顯示，CD14-159T/C多態性與中國部分地區兒童先天性過敏患者T-IgE水平互相關聯，提示其是中國人群過敏性疾病的遺傳易感因素[14]。但最近一項針對溫州兒童CD14基因啟動子區的研究并未顯示出-159T/C位點多態性與哮喘或T-IgE相關[15]。

表3 三位點等位基因頻率在中國維吾爾族、漢族和白種人的比較[n(%)]

我國地域廣闊，少數民族數量較多，各地區居住環境及生活習慣差別較大，為進一步探求該基因多態位點與哮喘的關系，選擇相對隔離的少數民族群體作為研究對象，其具有較為相似的遺傳背景和生活方式，從理論上降低了遺傳異質性的影響。研究結果顯示，CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個SNP位點在哮喘組和對照組中的基因型分布經統計學計算，符合Hardy-weinberg定律，證實樣本的隨機性和遺傳背景的統一。新疆維吾爾族人群CD14基因多態性分布頻率與中國漢族人群、白種人群分布有所不同。維吾爾族人群-159T/C位點C等位基因頻率（44.0%）和中國漢族人群（42.9%）低于白種人（54.0%），但該位點等位基因頻率在維、漢兩民族之間比較無顯著性差異。推測不同群體的遺傳結構有所不同，也可能與環境影響有關。當然，還需進一步在大規模的混合群體中證實這種差別是由民族差異還是由群體的結構差異所造成。本研究中CD14基因中-159T/C、-1145G/A、-1359G/T三個SNP位點基因型頻率和等位基因頻率分布在維吾爾族人群哮喘組與對照組中均未觀察到有差異。研究結果與對德國新生兒進行10年隨訪觀察，對波蘭和高加索兒童的研究[11-13]所得結論相似。

在不同種族，不同國家，甚至同一國家的不同地區，CD14基因啟動子區多態性的基因型分布與疾病的相關性存在較大差異。尋找不同種族在不同環境下CD14基因多態性與疾病的關系，將有助于深入闡明疾病的發展機制。在條件允許的情況下，筆者還計劃在今后的工作中，對新疆漢族哮喘人群以及其他民族進行CD14基因多態位點檢測，有助于對上述基因與哮喘的關系進行更深入的了解。

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R562.2+5

A

1673-5846(2013)06-0143-04

1新疆醫科大學第一附屬醫院呼吸一科，新疆烏魯木齊 830054

2新疆醫科大學第二附屬醫院重癥醫學科，新疆烏魯木齊 830028

王晶，副主任醫師，副教授。郵箱：zgjkyk2010@126.com。