膠質母細胞瘤PTEN基因突變和Ki-67表達的研究

張宏敏

膠質母細胞瘤PTEN基因突變和Ki-67表達的研究

張宏敏

目的對膠質母細胞瘤內部PTEN基因突變以及Ki-67表達情況進行研究，并對兩者關系展開探討。方法取膠質瘤石蠟切片102例為研究對象，其中膠質母細胞瘤切片42例，對所選樣本行聚合酶鏈反應-單鏈構象多態性處理分析（PCR-SSCP），對其PTEN基因突變進行檢測；并對Ki-67在膠質瘤中的表達行免疫組化SP檢測法進行檢測。結果在膠質母細胞瘤中，PTEN基因突變發生率與剩余60例相比明顯更高（P＜0.05）；在Ki-67平均標記指數方面，膠質母細胞瘤與其它膠質瘤相比數值更高（P＜0.05）。結論在膠質母細胞瘤中，PTEN基因突變對其發生以及發展具有重要作用；其病理惡性程度則與Ki-67表達程度呈明顯的正相關；Ki-67表達程度同PTEN基因突變之間的關系也表現為正相關。

PTEN基因；Ki-67表達；膠質母細胞瘤；基因突變

在膠質瘤分型中，膠質母細胞瘤具有極高的惡性程度，而相關治療技術的發展并未對其術后復發率以及致殘率產生任何有效改善，患者平均生存時間極低[1]。要使膠質母細胞瘤當前的治療狀況得到有效改善，則應對影響瘤體發生及發展的主要相關因素進行研究。基于此，筆者對膠質母細胞瘤內部PTEN基因突變以及Ki-67表達情況進行研究，并對兩者關系展開探討，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料取2007年7月～2012年8月期間的膠質瘤石蠟切片102例，其中膠質母細胞瘤切片42例，其它類型膠質瘤切片為60例。所有切片均與WHO相關診斷標準相符，均排除Cowden病家族史以及其它各類惡性腫瘤，所有患者術前均未進行化學治療或放射治療。其中男71例，女31例，年齡12～79歲；35例為星形細胞瘤，15例為間變型星形細胞瘤，5例為少枝膠質細胞瘤，5例為混合性少支-星形細胞瘤，42例為膠質母細胞瘤。

1.2 試驗方法①PCR-SSCP法檢測：在分級酒精中置入石蠟切片作脫蠟處理，并在PCR反應管內置入載玻片刮取物，同時取基因釋放劑加入并用微波爐進行加熱后于PCR擴增儀上放置。PCR擴增：PCR反應體積總量為40μl，其中包括1μmol/L每對引物、200μmol/L每種dNTP、雙蒸水0.5μl、amplitaq酶0.5μl、1×amplitaq PCR buffer，鎂離子濃度數值設定為2mmol/L；PCR反應條件：94℃預變性10min，然后循環35或38次，每循環過程中均有94℃與56℃各30s以及72℃ 40s，72℃增加至10min[2]。檢測突變：取適量聚丙烯酰胺凝膠（12.0%），在其中置入PCR產物后實施SSCP檢測，若與正常腦組織相比，凝膠內部的瘤組織2條待位置存在差異性則證實為基因突變[3]。②免疫組化檢測：采用微波抗原修復處理石蠟切片，然后實施免疫組化染色并判斷染色結果：陽性細胞判定依據為細胞核呈現出棕黃色[4]，高倍鏡下計數為5個視野，細胞500個，對其中陽性細胞所占比率進行計算，并以計算結果為Ki-67LI數值，即Ki-67標記指數。

1.3 統計學處理采用SPSS 13.0統計學軟件對本次試驗數據進行統計學處理，膠質母細胞瘤及其它分型膠質瘤內部PTEN基因突變差異采用卡方檢驗；膠質母細胞瘤及其它分型膠質瘤內部Ki-67的表達差異、Ki-67表達與PTEN基因突變在膠質母細胞瘤內部的關系則用秩和檢驗分析，P＜0.05表明差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 膠質母細胞瘤及其它分型膠質瘤內部PTEN基因突變差異對比行PCR擴增后，采用SSCP方法對所有擴增物進行檢測[5]，結果表明在膠質母細胞瘤病例中，PTEN基因發生突變例數為11（26%）；其它分型膠質瘤中PTEN基因發生突變者僅1例。因此與其它分型膠質瘤相比，膠質母細胞瘤中PTEN基因發生突變幾率更高[6]，差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 PTEN基因在不同腫瘤分型下突變幾率對比[n(%)]

2.2 Ki-67LI在不同分型膠質瘤中的表達差異對比Ki-67LI在膠質母細胞瘤中平均數值為（24.62 ±6.79），而在其它分型膠質瘤中的平均數值則為（6.71±4.67），兩者數值具有顯著差異（P＜0.05）。

2.3 Ki-67表達與PTEN基因突變在膠質母細胞瘤內部的關系在膠質母細胞瘤患者中，PTEN基因發生突變的11例瘤體內Ki-67指數明顯比未變異的31例更高，差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

在本次研究中，與膠質母細胞瘤相比，PTEN基因在非膠質母細胞瘤中的突變發生率明顯更低，這充分證明了PTEN基因發生突變的情況一般存在于具有高惡性程度的膠質母細胞瘤體組織內部，而很少發生于低惡性程度的其它膠質瘤體組織內[7-8]。而結合分子生物學相關研究數據可發現，與表皮生長因子受體的過度表達及P53基因突變相比，PTEN基因發生突變對于膠質母細胞瘤體組織的發生及發展進程具有同樣重要的作用。

作為大分子蛋白質的一種，Ki-67分布于細胞核內部，并在細胞G1、S、G0周期中表達，其峰值位于M期，因而對于全增殖期的細胞來說，Ki-67可作為一種有效的標記物[9]。本次試驗中，在Ki-67平均標記指數方面，膠質母細胞瘤與其它膠質瘤相比數值更高，差異明顯，說明膠質瘤體組織的病理惡性程度與Ki-67在瘤體組織內部表達呈顯著的正相關。也就是說，隨著Ki-67表達的增高，瘤細胞所具有的增殖活性也隨之更大，因而對于膠質瘤來說，Ki-67表達指數可對其惡性程度作出標志性判斷[10]。此外，在膠質母細胞瘤患者中，PTEN基因發生突變的11例瘤體內Ki-67指數明顯比未變異的31例更高，也提示了Ki-67的表達強度與PTEN基因發生突變幾率之間存在正相關的關系[11]。

綜上所述，在膠質母細胞瘤中，PTEN基因突變對其發生以及發展具有重要作用；其病理惡性程度則與Ki-67表達程度呈明顯的正相關；Ki-67表達程度同PTEN基因突變之間的關系也表現為正相關。

[1] 邱吉慶,朱戰鵬,李蘊博,等.腦膠質瘤組織PTEN mRNA表達及其基因突變SSCP分析[J].吉林大學學報(醫學版),2008(3)：507-510.

[2] 李松,許復郁.抑癌基因PTEN和Ki-67抗原在人腦膠質瘤中的表達及意義[J].山東醫藥,2002(21)：5-7.

[3] 張海令.鼻息肉中ICAD、Ki-67及PTEN的表達及其意義[D].山東大學學報,2005.

[4] 郭敏敏,孟祥菊,盛修貴,等.宮頸腺癌主要腫瘤標志物研究進展[J].腫瘤防治雜志,2005,12(8)：630-634.

[5] 車德海,張華,魏海波,等.胸腔積液細胞PTEN基因突變與肺癌相關性的探討[J].現代檢驗醫學雜志,2011,26(6)：49-51.

[6] 鄧秀娟,吳海根.PTEN、Ki-67在卵巢惡性腫瘤組織中的研究進展[J].現代腫瘤醫學,2012(10).

[7] 王晨亮.PTEN與腎透明細胞癌預后的關系[J].南昌大學學報(醫學版),2011(06).

[8] 張莎莎,馮一中.大腸腺癌中微血管密度和Ki-67表達及其臨床意義[J].江蘇醫藥,2011(11).

[9] 范益民,劉曉東,王宏勤.膠質瘤耐藥機制的相關研究進展[J].中國醫藥科學,2011(15).

[10] 李欣,胡曉麗,劉俊剛.小兒腎腫瘤病理與影像學診斷[J].放射學實踐,2011(07).

[11] 王晨亮.PTEN與腎透明細胞癌預后的關系[J].南昌大學學報(醫學版),2011(06).

Study on the Expression of Ki-67 and Mutation of PTEN Gene in Glioblastoma

Zhang Hongmin

ObjectiveTo study the glioblastoma internal PTEN gene mutation and Ki-67 expression,and to probe into the relationship between the two.Methods102 cases of gliomas paraffin section as the object of study, including 42 patients with glioblastoma, analysis of the sampling of the polymerase chain reaction, single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) treatment, the PTEN gene mutations were detected; and on the expression of Ki-67 in gliomas immune groups were detected with SP assay.ResultsIn glioblastoma, mutation rate and the remaining 60 cases significantly higher PTEN gene (P＜0.05); in the average Ki-67 labeling index, glioblastomas compared with other glioma higher (P＜0.05).ConclusionIn glioblastoma,the mutation of PTEN gene plays an important role in the occurrence and development; the malignant degree and the expression of Ki-67 was positively related to the degree of expression of Ki-67 degree; relationship between mutations of the PTEN gene also showed positive correlation.

PTEN gene; Ki-67 expression; Glioma; Gene mutation

R739.4

A

1673-5846(2013)06-0141-02

佛山市第二人民醫院，廣東佛山 528000