三七總皂苷對痛風的干預※

陸再華 張福康 楊妍華

三七總皂苷對痛風的干預※

陸再華 張?？?楊妍華

目的本文以尿酸鈉100μg?mL-1誘導體外急性炎癥模型，觀察三七總皂苷對ICAM-1表達及內皮細胞凋亡的影響，探討臨床用于痛風的價值。方法采用2.5、5.0、10.0μg?mL-1濃度的三七總皂苷進行預干預，實時定量PCR檢測ICAM-1的基因表達，流式細胞儀測定細胞凋亡率。結果三七總皂苷組2.5、5.0、10.0μg?mL-1明顯抑制細胞凋亡（6.90 ±1.07）%，與模型組比較P＜0.01；能顯著抑制ICAM-1基因的表達。結論三七總皂苷顯著抑制炎癥因子ICAM-1的表達及細胞凋亡。

三七總皂苷；ICAM-1；痛風

三七總皂苷可以調節細胞免疫炎癥因子表達的作用，具有降低氧化應激、減輕炎癥[1]，可調節細胞因子水平，改善外周血T淋巴細胞亞群，調節T淋巴細胞釋放保護性細胞因子增多，釋放有害細胞因子減少，改善患者免疫紊亂狀態，使細胞因子水平恢復正常，可增強對急性期炎癥及病情活動的控制[2]，能夠減輕oxLDL對內皮細胞的損傷，升高內皮細胞活性，降低內皮細胞免疫炎癥因子CD40、VCAM-1的表達[3]，能抑制心肌細胞的肥大以及心肌細胞凋亡[4]。本文以尿酸鈉100μg?mL-1誘導體外急性炎癥模型，觀察三七總皂苷對炎癥因子ICAM-1表達及內皮細胞凋亡的影響，以探討臨床用于痛風患者的干預價值。

1 儀器與方法

1.1 實驗儀器電熱恒溫水浴箱（上海精宏實驗設備有限公司）；CO2恒溫培養箱；超凈工作臺（蘇州凈化設備有限公司）；Olympu顯微鏡；Bio-Red全自動酶標儀；NAPCO，細胞培養箱；9SORVALL高速冷凍離心機；GeneMate PCR循環儀；DYY-6B電泳儀；BIO-RAD Gel DocTM XR凝膠紫外s成像系統；BD流式細胞檢測儀。

1.2 方法實驗方法分為空白對照組、陽性對照組、模型組（尿酸鈉刺激組）、三七總皂苷（血塞通）干預組?？瞻讓φ战M（200μL 1640培養液）、模型組（尿酸鈉刺激組50μg?ml-1MSU溶液）、陽性對照組（50μg?ml-1吲哚美辛），三七總皂苷（血塞通）干預組（2.5、5.0、10.0μg?mL-1）。

1.3 HUVEC細胞的培養HUVEC細胞株經支原體檢測符合要求，HUVEC細胞經0.25%胰蛋白酶消化，含10%胎牛血清的1640培養液中和，離心后去上清液，加含10%胎牛血清的1640培養液培養，移入細胞培養瓶中，在37℃ 5% CO2培養箱中傳代培養。

1.4 流式細胞儀檢測細胞凋亡對處于對數生長期的HUVEC用0.25%的胰蛋白酶消化，輕輕吹打，制成細胞懸液，調整好細胞密度為5×106/L，接種于普通細胞培養瓶中。待細胞長滿后，再進行三七總皂苷藥物干預，PBS收集細胞，離心去上清液，加入CD54單克隆抗體，30min后，PBS洗滌，應用流式細胞儀檢測細胞凋亡。觀察細胞凋亡的現象，具有明顯抑制細胞凋亡的作用。

1.5 統計學處理計量資料以表示，組間采用t檢驗，以P＜0.01為具有顯著性差異。

2 痛風患者的治療前后尿酸值變化情況

見表1。

表1 臨床治療痛風患者尿酸值的變化

3 結果

用MSU誘導刺激HUVEC細胞，對ICAM-1的基因表達進行檢測。空白對照組對ICAM-1的基因表達僅有少量，模型組對ICAM-1的基因表達明顯高于空白對照組P＜0.01，陽性對照組和三七總皂苷（血塞通）明顯降低對ICAM-1的基因表達P＜0.01，具有顯著性差異。三七總皂苷（血塞通）組2.5/μg?ml-1對MSU誘導的HUVEC致炎癥模型下的ICAM-1的表達有顯著抑制作用，具有抗炎作用。

流式細胞儀染色檢測細胞凋亡：將收集的細胞用PBS洗滌，懸浮于buffer中，取100μL的細胞懸液于試管中，加入5μL Annexin V-FITC和5μL PI，混勻，于室溫避光30min，在反應試管加入400μL buffer液，雙染后流式細胞儀檢測細胞凋亡。雙染后流式細胞儀檢測可見，在由4個象限組成的散點圖上。與正常組比較，模型組細胞凋亡率明顯增加為（9.30±1.32）%；三七總皂苷組2.5、5.0、10.0μg/ml明顯抑制細胞凋亡（6.90±1.07）%，與模型組比較P＜0.01，具有顯著性差異。

4 結論

用尿酸鈉溶液刺激血管內皮細胞株可以形成急性炎癥模型，三七總皂苷（PNS）對以尿酸鈉（MSU）100μg?mL-1誘導體外急性炎癥模型，對MSU誘導的HUVEC損傷致炎癥模型下的ICAM-1的表達都有顯著抑制作用。模型組明顯高于空白組P＜0.01，三七總皂苷組2.5μg?mL-1降低MSU對HUVEC刺激的基因表達，P＜0.01。三七總皂苷（血塞通）組2.5、5.0、10.0μg?mL-1明顯抑制細胞凋亡（6.90± 1.07）%，與模型組比較P＜0.01。

臨床應用血塞通治療痛風患者療效確切，使用方便，患者的依從性好，且癥狀得到改善，尿酸值治療前后有顯著性差異。通過臨床治療，體外藥效評價，構建成分基本清楚，作用靶點明確的中藥治療方案和體系。體內外結合評價治療標準的方法，體內主要是藥物療效的體現，體外主要是藥物作用機制的探討和評價。減少中藥成分復雜，作用機理不明確的弱點，形成成分清楚、作用目標明確、質量穩定可靠的特點，同時又具有傳統中成藥相似的整體功能，毒副作用小的特點。

[1] 張?？?陸再華,楊妍華.三七總皂苷對細胞免疫炎癥因子作用的研究進展[J].中國藥師,2011,14(9)：1349-1350.

[2] 張佳紅,王晉平,王慧娟.三七總皂苷調整類風濕關節炎免疫相關內環境失衡狀態的臨床研究[J].中國中西醫結合雜志,2007, 27(7)：589-592.

[3] 劉桂林,竇迎春,劉粉葉,等.三七總皂苷對oxLDL誘導的人臍靜脈內皮細胞CD40,VCAM-1表達的影響[J].山東大學學報,2010, 48(10)：14-19.

[4] 謝輝,陳俊.三七總皂苷對心肌細胞肥大及凋亡的影響[J].山西醫藥雜志,2010,39(11)：1059-1060.

PNS on Gout the Hntervention

Lu Zaihua Zhang Fukang Yang Yanhua

ObjectiveIn this paper, uric acid sodium 100μg?mL-1induced acute inflammation model in vitro, to observe the effect of total saponins of three seven on ICAM-1 expression and apoptosis of endothelial cells, to investigate the clinical value of for ventilation.MethodsThe total saponins of three seven 2.5,5.0,10.0μg?mL-1concentration of pre intervention, expression of real-time quantitative PCR detection of ICAM-1 gene,cell apoptosis was detected by flow cytometry.ResultsTotal saponins of three seven groups of 2.5,5.0,10.0μg?mL-1significantly inhibited apoptosis (6.90±1.07)%, compared with model group,P＜0.01; expression can significantly inhibit ICAM-1 gene.ConclusionTotal saponins three seven inhibited the cell apoptosis and expression of ICAM-1 cytokines.

Total saponins three seven; ICAM-1; Gout

R259

A

1673-5846(2013)06-0027-02

江蘇省常州市第七人民醫院，江蘇常州 213011

常州市科技計劃項目：血塞通（三七總皂苷）對痛風的治療及對痛風炎癥損傷的ICAM-1的表達，編號（CS20109011）