多花野牡丹黃酮類成分的研究

葉穎霞

多花野牡丹主要含有黃酮、鞣質和酚酸類等物質, 其黃酮類成分為發揮抑菌活性的主要藥效成分［1,2］。本論文主要對多花野牡丹的黃酮類成分進行研究, 為進一步研究多花野牡丹資源提供實驗基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 EL303 電子天平；HH-6恒溫水浴鍋；UV1102紫外-可見分光光度計；WFH-203B 紫外燈；玻璃板；RE-3000D 旋轉蒸發儀。試藥 多花野牡丹植株；硅膠G、HF254；羧甲基纖維素鈉；甲醇；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 多花野牡丹中黃酮類化合物的提取 取多花野牡丹葉片粗粉1 kg用95%乙醇于80℃水浴提取3次, 1 h/次, 濾過,收集濾液后減壓回收乙醇, 得墨綠色浸膏, 取適量浸膏溶于150 ml蒸餾水中, 用石油醚脫脂, 取水層用乙酸乙酯萃取,蒸干, 殘渣加乙酸乙酯溶解, 即得多花野牡丹黃酮提取液(供試品溶液1)。

2.2 薄層色譜分離提純黃酮類化合物 取多花野牡丹黃酮提取液, 以相應試劑為陰性溶液, 點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚－乙酸乙酯－氯仿(8：3：2)為展開劑, 展開, 取出,晾干, 置紫外燈(254 nm)下檢視。結果表明, 供試品色譜中出現五條熒光帶, 記錄黃綠色的熒光帶(Rf=0.19), 其余為藍色熒光；陰性對照品色譜中無熒光。刮取黃綠色熒光帶下的硅膠, 以乙酸乙酯洗脫, 收集洗脫液, 蒸干, 殘渣加乙酸乙酯溶解, 得供試品溶液2；刮取陰性對照品色譜中Rf=0.19處同等質量的硅膠, 同法制備陰性溶液2。

2.3 多花野牡丹黃酮類化合物的結構鑒定 紫外光譜分析 取供試品溶液2和陰性溶液2若干份, 分別加入甲醇鈉溶液、醋酸鈉、醋酸鈉/硼酸、三氯化鋁溶液、三氯化鋁/鹽酸等試劑, 掃描并記錄加入診斷試劑前后供試品溶液2的光譜圖(200～500 nm), 結果見表1, 圖1～3。

表1 多花野牡丹黃酮類化合物紫外光譜變化結果

如圖1所示, 甲醇光譜中帶I在358～385 nm范圍內, 屬于黃酮醇類化合物。甲醇鈉光譜在320 nm左右處有吸收, 示含有7-OH；比較甲醇光譜與甲醇鈉光譜, 帶I紅移32 nm,且吸收帶I不隨時間而衰退, 推斷該黃酮物質含有3-OH, 且無3、4'-二羥基、3, 3, 4'-三羥基或5, 6, 7三羥基-或5, 7, 8-三羥基或3', 4', 5'-三羥基。

由圖1和圖2可知, 比較甲醇與醋酸鈉光譜, 帶II紅移6 nm, 示含有7-OH, 且醋酸鈉光譜不隨時間延長而衰退, 故不含5, 6, 7-三羥基或5, 7, 8-三羥基或3', 4', 5'-三羥基等對醋酸鈉敏感基團；比較甲醇與醋酸鈉/硼酸光譜, 帶I、II均無紅移, 故A、B環不存在鄰二酚羥基。

由圖3可知, 比較三氯化鋁與三氯化鋁/鹽酸光譜, 光譜相似, 三氯化鋁/鹽酸光譜中吸收帶均無明顯紫移, 故A、B環無鄰二酚羥基。比較甲醇光譜與三氯化鋁/鹽酸光譜,帶I紅移45 nm, 示該黃酮醇含有5-OH。

圖1 A-甲醇光譜, B-甲醇鈉光譜)

圖2 A-醋酸鈉光譜, B-醋酸鈉/硼酸光譜

圖3 (A-三氯化鋁光譜, B-三氯化鋁/鹽酸光譜)

通過紫外光譜對所提純的多花野牡丹黃酮類化合物進行檢測, 初步確定多花野牡丹含有5, 7-二羥基黃酮醇。

3 討論

本研究采用高濃度的乙醇作為多花野牡丹黃酮類成分的提取溶劑。采用低極性的展開劑石油醚－乙酸乙酯－氯仿(8：3：2)可使黃酮類成分與其余成分獲得良好的分離。

化合物結構的鑒定可結合質譜、氫譜等幾種有效的方法相互確定、驗證, 雖然紫外光譜的靈敏度較低, 但是對于較純的黃酮類化合物結構的初步確定仍然具有重要的研究價值, 而且操作簡單、重復性好。

［1］姚亮亮, 劉新亞.野牡丹屬植物的化學成分、藥理活性及臨床應用研究概況.江西中醫學院學報, 2010, 22(6):52-55.

［2］蘇燕評, 周孫英, 劉劍秋.多花野牡丹的抑菌活性及總黃酮含量測定.植物資源與環境學報, 2005, 14(1):56-57.

［3］江蘇新醫學院.中藥大辭典(上冊).上海:上海人民出版社,1997: 941.