槲皮素鍺抑制多種腫瘤細胞增殖的效果分析

丁聰聰

中藥配伍學理論認為，中藥中的作用成分不只是微量元素和有機分子，也是微量元素與有機分子的相互結合物。醫學研究結果表明，多種金屬離子與槲皮素螯合而成的配合物具有較高的穩定性，能夠對腫瘤細胞生長起到抑制作用。本次臨床研究對槲皮素鍺抑制多種腫瘤細胞增殖的效果進行了分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 試劑 氧化鍺試劑，自制槲皮素，培養基為北京賽默飛世爾化學生物制劑公司生產的RPMI1640(HyClone)，Signa公司生產的四甲基偶氮唑藍(MTT)，Signa公司生產的二甲基亞砜(DNSO)，吉諾生物醫藥公司生產的胰蛋白酶，杭州四季青生物技術材料公司生產的胎牛血清(低內毒素，無噬菌體)，SH40003-12鏈霉素、青霉素(HyClone);其他試劑選用分析純。

1.1.2 細胞株 從中國科學院上海生命科學研究所細胞庫中購買的人前列腺癌細胞PC-3、人食管癌細胞EC9706、人肺腺癌細胞SPC-A-1、人子宮頸癌細胞Hela。

1.1.3 儀器 美國Dynex公司生產的Spectra Mr全波長酶標儀，德國萊卡公司生產的倒置顯微鏡，美國SM公司生產的二氧化碳培養箱，蘇州馮氏實驗動物設備公司生產的CJ-2-F超凈工作臺，日本島津公司生產的UV-240可見光-紫外光光度儀，德國耐馳公司生產的STA 409型PC/PG差熱分析儀，CHN Perkins400型元素分析儀，FTS 3000紅外光譜儀。

1.2 槲皮素鍺的制備 甲醇50 ml，氧化鍺1 mmol，槲皮素1 mmol，調節甲醇鈉pH值為8.5，用帶冷凝管和磁力攪拌器的三口燒瓶，連續6 h回流加熱。用硅膠G板對反應過程進行監控，完成反應后，停止回流。在聚酰胺層析柱中加入反應液，用水沖洗，用濃度不同的甲醇溶液進行梯度洗脫，將特定區間內的洗脫液收集起來，將有機溶液使用旋轉蒸發儀蒸發，獲得橘黃色固體物質，重新提取甲醇，以獲得深橘黃色固體。元素分析所獲得的固體，對目標產物實施熱分析以及紅外、紫外光譜分析鑒定，使用滅菌水將其調制為10 mmol/L的液體，并在4℃的冰箱中保存該原藥儲存液，使用前以RPMI1640培養基進行稀釋，使用0.22 μm的微孔過濾液對其進行過濾處理。

1.3 槲皮素鍺對多種腫瘤細胞增殖的作用 選擇處于對數生長過程的PC-3細胞、EC9706細胞、SPC-A-1細胞、Hela細胞，將細胞密度設置為每孔6×103個，在96孔板中接種，飽和濕度37℃、體積分數為5%的孵育箱中進行培養。發生細胞貼壁后，將培養液吸棄，用RPMI1640培養基稀釋液的槲皮素鍺加入實驗組，濃度為10 μmol/L和100 μmol/L，再加入對照組溶劑中，每組6個復孔，每孔體積為200 μL。將培養板于72 h后取出，用倒置顯微鏡觀察記錄其形態學。分別加入20 μL/孔和5 g/LMTT后進行4 h培養，上清液吸棄后加入250 μL/孔 DMSO，振蕩10 min，保證結晶完全溶解，波長 570 mm處的每孔光密度值用酶標儀進行檢測。細胞增殖抑制率(IR)計算方法為:1-(藥物組光密度值/對照組光密度值)×100%。

1.4 統計學方法 通過SPSS 17.0軟件對所有實驗數據進行統計學處理，對患者數據資料進行χ2檢驗，計量數據用t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

濃度不同的槲皮素鍺對于多種腫瘤細胞增殖的作用效果對比差異統計學意義(P＜0.05)。如表1所示。

表1 濃度不同槲皮素鍺對于四種腫瘤細胞增殖的作用分析(%)

3 討論

本次研究結果表明，鍺和槲皮素在堿性環境下，能產生槲皮素鍺的配合物，經過熱分析、紅外光譜分析、紫外光譜分析和元素分析，可確定為目標產物［1］。MTT實驗結果顯示，槲皮素鍺合成物體外作用，對于人前列腺癌細胞PC-3、人食管癌細胞EC9706、人肺腺癌細胞SPC-A-1、人子宮頸癌細胞Hela等多種腫瘤細胞的增殖過程具有明顯抑制作用，且隨著槲皮素鍺濃度的提高［2］，抑制作用效果也會逐漸提高。槲皮素有助于耐藥細胞在ADM中分布的恢復，但無法完全恢復腫瘤細胞自身耐藥性，對化療藥物的敏感株和敏感性對比仍存在一定差異［3］，其原因可能是腫瘤細胞自身的耐藥機制較為復雜，在同種類細胞中會同時出現不同的多種作用機制［4］。可見，槲皮素鍺具有較好且較廣泛的腫瘤抑制作用，可作為抗腫瘤藥物進行開發研究［5］。

［1］方武.槲皮素對前列腺癌細胞的放療增敏性研究.四川醫學，2012，33(4):591-592.

［2］李洪福.抑制HSP 70表達對體外培養的腦膠質瘤細胞生長的影響. 江蘇醫藥，2010，25(5):385-386.

［3］范宗榮.槲皮素對人腎癌細胞株細胞增殖、侵襲及其VEGF表達的影響.安徽醫科大學學報，2012，47(8):889-890.

［4］單保恩.槲皮素對人子宮內膜癌耐藥細胞株B-MD-C1(ADR+/+)多藥耐藥基因mdrl及p-gp蛋白表達的影響.癌變·畸變·突變，2009，21(5):256-257.

［5］鐘喜明.槲皮素對食管癌細胞侵襲和中期生長因子基因表達的影響.世界華人消化雜志，2008，16(22):2504-2505.