電化學發光免疫分析儀殘余試劑的再利用

梁大立 李介華 藍永樂 邱瑞霞 黃延峰

暨南大學醫學院附屬清遠醫院 清遠市人民醫院檢驗中心，廣東清遠 511500

電化學發光免疫分析 （electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）是電化學發光和免疫測定相結合的新一代標記免疫測定技術。因標志物為非放射性物質，而且實現自動化，具有快速、簡便、靈敏、特異等特點，己廣泛應用于各種激素、腫瘤標志物、藥物及其他微量生物活性物質的測定[1]，但配套試劑均需進口，測定成本高，為獨立包裝、固定測試數、條碼自動記錄，使瓶中殘余試劑不能再利用而造成浪費。為充分利用醫學資源，在保證檢驗質量的前提下，筆者對羅氏E170電化學發光免疫分析儀殘余試劑混合再利用的可行性進行研究，現報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

瑞士羅氏公司E170全自動電化學發光免疫分析儀。

1.2 試藥

定標物為羅氏原裝配套，PCT質控物為羅氏公司提供，批號為168843、168845；CA72-4質控物為美國伯樂公司提供，批號為54551、54553。新試劑為羅氏E170原裝配套試劑；混合試劑為羅氏E170同一項目、同一批號的試劑，經儀器掃描條碼為0測試，將瓶中殘余試劑每3～4瓶混合為1瓶。所有試劑均在有效期內使用。

2 方法與結果

2.1 方法

2.1.1 手工輸入條碼信息 將羅氏三聯裝試劑白色瓶上的15位數字信息，輸入到相應的試劑位空白欄。

2.1.2 定標與質控 按要求保養儀器，對E170分析儀所檢驗項目進行定標及常規質控，定標通過及室內質控在控方可進行以下實驗。

2.1.3 混合試劑精密度試驗 根據《體外診斷試劑分析性能評估指導原則》進行，取高、低2個濃度的質控物，每天做2批次的測試，每批次測試時，對同一樣品作雙份測定，共做20 d。得80個測試結果，計算批內及批間精密度。

2.1.4 混合試劑準確性測試 兩種試劑分別檢測PCT、CA72-4高、低濃度質控物各20次，檢查分析結果是否在允許范圍內，并進行結果比較。

2.1.5 標本測定 用新試劑和混合試劑對80例血清樣本進行PCT、CA72-4測定，對結果進行比較及相關性分析。

2.1.6 回收試驗 分別在1000μL正常血清內加入PCT、CA72-4低值、高值質控血清100μL，制成2個待測標本進行回收試驗，每樣本用混合試劑重復檢測3次，取平均值，計算回收率。回收率為90%～110%，結果為可接受[2]。

2.1.7 穩定性試驗 每天用羅氏與伯樂低值、高值質控物作為監控品，對混合試劑進行3周監控。

2.2 統計學方法

本研究所有數據采用SPSS 12.0軟件進行統計分析，計量資料以（）表示，進行 t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2.3 結果

2.3.1 混合試劑精密度檢測結果 混合試劑檢測質控物PCT、CA72-4批內、批間CV均 ＜5%，符合衛生部臨床檢驗中心的要求（＜ 10%）（表 1）。

表1 原裝與混合試劑檢測質控血清PCT、CA72-4批內、批間CV的比較（%）

2.3.2 混合試劑準確性檢測結果 混合試劑測得PCT、CA72-4低、高濃度質控物各20次結果與靶值結果比較，PCT、CA72-4其20次結果均在質控允許范圍內，經單樣本t檢驗，兩項目各濃度測定值差異無統計學意義（P＞0.05）（表 2）。

表2 混合試劑準確性檢測結果

表2 混合試劑準確性檢測結果

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2.3.3 原裝試劑與混合試劑檢測血清樣本結果 原裝新試劑與混合試劑檢測80例血清樣本的PCT、CA72-4的結果相關系數（r）分別為0.998、0.997，兩種試劑測定結果經配對樣本t檢驗，差異無統計學意義（P均 ＞0.05）（表3）。

表3 80例標本原裝試劑與混合試劑檢測血清PCT、CA72-4結果

表3 80例標本原裝試劑與混合試劑檢測血清PCT、CA72-4結果

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2.3.4 混合試劑回收試驗結果 PCT、CA72-4的低值回收率分別是96.3%、101.5%，PCT、CA72-4的高值回收率分別是96.8%、105.9%。

2.3.5 混合試劑穩定檢測結果 低、高值質控品21次檢測結果有均在允許范圍之內，未出現失控，經單樣本t檢驗，兩項目各濃度測定值差異無統計學意義（P＞0.05）（表4）。

3 討論

羅氏E170電化學發光免疫分析儀克服了放射免疫分析試劑有效期短和輻射污染、酶聯免疫吸附試驗易受溫度、酸堿度變化的影響，以及化學發光免疫分析技術中發光分子只能利用一次的缺點，分析過程可通過電場精確控制，因此具有特異性好、靈敏度高、線性測定范圍寬、操作的自動化程度高等優點[3]，國內外均有文獻對其綜合性能進行了分析并給予較高評價[4-6]。

表4 混合試劑準確性檢測結果

表4 混合試劑準確性檢測結果

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羅氏E170電化學發光試劑為專用試劑，每套試劑條碼記錄為100個測試，當檢測了100個樣本后，儀器即默認該套試劑為“零”個測試，試劑瓶內雖有殘余試劑，但儀器不會再進行檢測。經2年多實踐觀察，每套試劑殘余量約為25%，與文獻報道的每套試劑有20%～30%的試劑剩余量相近，因此棄之不用，造成較大浪費[7]。

本研究結果顯示，對混合的殘余試劑進行21 d監控，PCT、CA72-4兩項目高、低水平質控物測定結果均在控，兩項目各濃度差異無統計學意義，說明混合試劑3周內有較好的穩定性；混合試劑檢測質控物PCT、CA72-4兩項目的精密度、準確性、回收率等實驗性能指標均符合相關實驗要求，新試劑與混合試劑檢測患者血清樣本的PCT、CA72-4的結果相關性良好，且測定結果差異無統計學意義，說明混合試劑性能穩定，檢測質量可靠。實踐工作中應注意每盒試劑的穩定期，羅氏E170試劑盒開封后2～8℃可穩定12周，放在E170免疫分析儀上4周，如置20～25℃約為20 h。因此，檢測完畢后，試劑盡快放入4℃冰箱保存，蓋緊試劑瓶，防止試劑水分蒸發，造成變質。同一項目、同一批號的混合殘余試劑在一定時間內檢測結果可靠，殘余試劑在4周內盡快再利用[8]。殘余試劑混合再利用檢測前應先進行定標，檢測時設置高、低水平質控在檢測前、中、后進行嚴密監控，在定標曲線合格和質控都在控的情況下測定結果方為有效。實踐證明E170試劑盒的殘余試劑混合再利用，操作簡便可行、穩定性好、測定結果可靠，能節約1/4檢測成本，減少醫學資源浪費。

[1]呂世靜.臨床免疫學檢驗[M].2版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：122.

[2]張葵.定量檢測系統方法學性能驗證實驗的基本方法[J].臨床檢驗雜志，2009，27（5）：321-323.

[3]葉應嫵，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.南京：東南大學出版社，2006：575.

[4]Bieglmayer C，Chan DW，Sokoll L，et al.Multicentre performance evaluation of the E170 module for modular analytics[J].Clin Chem Lab Med，2004，42（10）：186-202.

[5]譚浩.電化學發光免疫分析系統E170的應用評價[J].實用預防醫學，2011，18（3）：527-528.

[6]張學平，陳曉萍，張萍，等.利用空的試劑盒節約試劑的方法[J].實用醫技雜志，2008，15（24）：3202-3203.

[7]潘永康，何炯.Roche E170電化學發光儀開源節流三法[J].檢驗醫學與臨床，2008，24（5）：1531.

[8]李炎梅，莫思健，梁太英，等.ACCESS化學發光儀殘余試劑的回收方法及臨床應用[J].中國臨床新醫學，2012，5（11）：1012-1014.