銀杏葉提取物對大鼠肺磷形細胞癌表達腫瘤壞死因子-α的影響

彭宗玉 張佩娟 趙瑞霞

銀杏葉提取物對大鼠肺磷形細胞癌表達腫瘤壞死因子-α的影響

彭宗玉 張佩娟 趙瑞霞

目的銀杏葉提取物對大鼠肺磷形細胞癌分泌和表達腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響。方法用大鼠的肺磷形細胞癌與不同濃度的銀杏葉提取物進行培養，采用逆轉錄多聚酶鏈式反應(RT-PCR)和酶聯免疫吸附測定方法分別檢測枯否細胞TNF-αmRNA和蛋白質表達。結果大鼠肺磷形細胞癌腫瘤壞死因子-α表達的分泌與銀杏葉提取物濃度的提高呈負相關。結論銀杏葉提取物可以改變大鼠肺磷形細胞癌TNF-α的表達，減少肺癌細胞對正常肺細胞的損害，發揮保護的作用。

銀杏葉提取物；腫瘤壞死因子-α；大鼠肺磷形細胞癌

調節肺磷形細胞癌分泌和表達腫瘤壞死因子-α，對抗肺癌細胞對正常肺細胞的損害[1]。以往文獻報告銀杏葉提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)具有軟化血管、調節正常細胞的代謝，抗炎、抗氧化應激的功能[2]。本實驗目的是通過銀杏葉提取物作用大鼠肺磷形細胞癌，觀察隨著銀杏葉提取物濃度的改變，大鼠肺磷形細胞癌TNF-α表達的變化及對正常肺細胞的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑銀杏葉提取物、RT-PCR試劑、引物。

1.2 主要儀器CO2培養箱、UVP，倒置相差顯微鏡，低溫離心機，各種電泳儀等。

1.3 細胞分離、培養與鑒定及實驗分組成功的分離肺磷形細胞癌加入含10%胎牛血清的DMEM培養基，接種于培養瓶2h后，洗去非貼壁細胞。24h后，培養的肺磷形細胞癌分別加入不同濃度的GBE(15，25，50)μg/ml共同培養24h。實驗共分為四組（1組為對照組、2組為GBE15ug/ml、3組為GBE25ug/ml、4組為GBE50ug/ml）。

1.4 TNF-α的測定用酶聯免疫吸附測定法和逆轉錄一聚合酶鏈反應，檢測腫瘤壞死因子mRNA的分泌表達。收集各濃度組銀杏葉提取物與肺癌細胞的培養及對照組細胞，按各組細胞總mRNA提取，溶于無Rnase水中。根據RT-PCR試劑盒提供的說明書進行RT-PCR反應。RT-PCR反應產物電泳條帶用數字成像系統進行分析和拍照。計算TNF-α產物的相對量。

1.5 統計學方法采用單因素方差分析，以P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同濃度的GBE對肺磷形細胞癌細胞表達TNF-αmRNA的影響大鼠肺磷形細胞癌細胞TNF-αmRNA和蛋白的表達與銀杏葉提取物的濃度呈負相關，隨著GBE的濃度的增加，TNF-αmRNA表達逐漸減少，見圖1。

圖1 不同濃度的GBE對肺磷形細胞癌細胞表達TNF-αmRNA的影響

3 討論

TNF-α首先與一定時期的腫瘤細胞質膜表現特異性受體結合，在細胞表面形成帽狀聚集而入細胞，進入細胞后沿微管移動與溶酶體結合，在TNF作用下溶酶體破裂，釋放出溶酶體酶致使細胞自溶，TNF-α可以使中性粒細胞聚集粘附于內皮細胞，引起肺損傷。同時又可激活Caspase-8，二者共同作用進一步加重肺內皮細胞損傷。二者協同促使機體產生更多的氧自由基及炎性介質，其代謝產物大量堆積在肺泡內皮細胞上，導致肺組織結構改變和肺功能衰竭[1-5]。銀杏葉提取物具有斂肺平喘、活血化瘀，促進血液循環，具有很強的清除自由基和抗氧化作用，銀杏葉中的黃甙、氨基酸和氨基酸合成膠原蛋白成份對人體美容，抑制黑色素生長，保持皮膚光澤與彈性起著不小的作用[6]。本實驗研究發現肺磷形細胞癌細胞TNF-α蛋白的表達分泌與銀杏葉提取物的濃度呈負相關性，隨著濃度的增加，肺磷形細胞癌細胞TNF-αmRNA及其蛋白質表達逐漸減少，因此可推測銀杏葉提取物抑制肺磷形細胞癌細胞釋放TNF-α的分泌與表達，減輕TNF-α誘導的細胞損傷，對正常肺細胞表現出較強的保護作用。

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R734.2

A

1673-5846（2013）01-0036-02

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