五加皮揮發(fā)油的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析※

趙長勝 郭樹科 張小東 楊嘉玲 鐘 鳴

五加皮揮發(fā)油的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析※

趙長勝1郭樹科1張小東1楊嘉玲1鐘 鳴2

目的分析五加皮揮發(fā)油的化學(xué)成分。方法采用水蒸氣蒸餾法提取五加皮的揮發(fā)油，用氣相色譜-質(zhì)譜法分析鑒定揮發(fā)油中的化學(xué)成分，并用面積歸一化法計算各成分的相對含量。結(jié)果從五加皮中共分離得到29個成分，經(jīng)計算機譜庫檢索鑒定了25個化合物，占揮發(fā)油總量的99.56%。五加皮揮發(fā)油中含量較高的成分是柏木腦（41.53%）、軟脂酸甲酯（20.31%）、β-雪松烯（10.93%）、亞油酸甲酯（9.17%）。結(jié)論本實驗為該藥材的綜合利用和開發(fā)提供了一定科學(xué)依據(jù)。

五加皮；揮發(fā)油；氣相色譜-質(zhì)譜法

五加皮（Cortex Acanthopanacis）為五加科植物細(xì)柱五加（Acanthopanax gracilistylus W. W. Smith）的干燥根皮，主產(chǎn)于湖北、河南、安徽、四川等地[1]。本品性辛溫，味苦，具有祛風(fēng)除濕、補益肝腎、強筋壯骨、利水消腫的功效，用于治療風(fēng)濕痹病、筋骨瘺軟、小兒行遲、體虛乏力、水腫、腳氣等[2-3]。五加皮使用方便，煎湯、入丸、散或浸酒均可，常用于風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等。現(xiàn)代藥理研究表明其具有鎮(zhèn)痛、增強免疫、抗腫瘤等作用[4]。近年來對其化學(xué)成分的研究表明，五加皮中含有丁香苷、紫丁香苷、β-谷甾醇、異貝殼杉烯酸、4-甲氧基水楊醛等有效成分[5-8]。本文采用水蒸氣蒸餾法提取五加皮中的揮發(fā)油，并采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）分析其中的揮發(fā)性成分，為五加皮藥材的綜合利用和開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

SW177藥材粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)，揮發(fā)油提取器，GCMS-QP2010 Plus氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本Shimadzu公司），色譜柱：DB-5MS毛細(xì)管氣相色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm，美國J&W公司）。五加皮藥材購自廣州市藥材公司，經(jīng)鑒定為五加科植物細(xì)柱五加的干燥根皮。乙醚、正己烷和無水硫酸鈉均為分析純（廣州化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品提取取五加皮藥材粉碎成粗粉，在2000mL圓底燒瓶中放一定量沸石，稱取250g樣品置圓底燒瓶中，加1500mL蒸餾水浸泡24h后，按2010版《中國藥典》一部附錄[9]揮發(fā)油測定法的甲法操作，用揮發(fā)油提取裝置提取5h，得淺黃色油狀液體。將所得餾出液用乙醚萃取，用無水硫酸鈉脫水干燥后回收乙醚，得到淺黃色揮發(fā)油。揮發(fā)油以正己烷稀釋10倍，過0.45μm濾膜，待分析。

2.2 分析條件色譜條件：DB-5MS彈性石英毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；進(jìn)樣口溫度250℃；不分流進(jìn)樣，不分流時間2min，2min后分流比1：30；恒流速模式，載氣為高純氦氣（99.995%），色譜柱載氣流量1.0mL/min；進(jìn)樣量1.0μL。程序升溫：初始溫度40℃，保持3min；以5℃/min升至250℃；再以10℃/min升至300℃，保持10min。

質(zhì)譜條件：離子源為電子轟擊電離源（EI），電離電壓70eV，傳輸線溫度250℃，離子源溫度220℃；電子倍增器電源1.10KV，全掃描模式，掃描質(zhì)量范圍40～500amu，質(zhì)譜分辨率1amu，掃描間隔0.1s。

2.3 數(shù)據(jù)處理和質(zhì)譜檢索各組分離子采用計算機NIST2005標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫檢索，參照文獻(xiàn)加以確認(rèn)，定量采用色譜峰面積歸一化法。

2.4 成分分析五加皮揮發(fā)油成分采用GC-MS進(jìn)行分析，揮發(fā)油通過毛細(xì)管色譜分離共檢測得到29個組分，通過NIST2005標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫進(jìn)行檢索，并結(jié)合圖譜解析對各組分進(jìn)行分析鑒定。按峰面積歸一化法計算各化合物在揮發(fā)油中的相對百分含量。五加皮揮發(fā)油中已鑒定的主要成分及其在總揮發(fā)油中的相對含量見表1，色譜總離子流圖見圖l。參照標(biāo)準(zhǔn)譜圖和質(zhì)譜特征碎片的信息，鑒定了其中25個成分，占總揮發(fā)油的99.56%。總揮發(fā)油中含量最高的是柏木腦，占總揮發(fā)油的41.53%，其次是軟脂酸甲酯、β-雪松烯，分別占總揮發(fā)油的20.31%和10.93%。在五加皮揮發(fā)油中，尚有4個成分通過質(zhì)譜庫計算機檢索和其他標(biāo)準(zhǔn)譜庫對照，無法準(zhǔn)確定性，有待于今后工作中進(jìn)一步確認(rèn)。

圖1 五加皮揮發(fā)油的總離子流圖

表1 五加皮揮發(fā)油的化學(xué)成分及相對含量

3 討論

氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）是測定揮發(fā)性成分的常用方法。本實驗通過對五加皮揮發(fā)油的GC-MS分析，研究了其揮發(fā)性的成分。五加皮揮發(fā)油中相對含量大于5%的是柏木腦(41.53%)、軟脂酸甲酯(20.31%)、β-雪松烯(10.93%)、亞油酸甲酯(9.17%)，這四個成分占總揮發(fā)油的81.94%。另外，α-雪松烯(4.58%)、異丁基鄰苯二甲酸酯(1.80%)、10-十八碳烯酸甲酯(1.43%)、4-甲氧基水楊醛(1.42%)、樟腦(1.31%)、16-十八烯酸甲酯(1.29%)的含量也比較高。從成分分析的結(jié)果來看，五加皮的揮發(fā)油成分主要為醛類、酚類、倍半萜醇類和烷烴類等成分。倍半萜類如柏木腦等是揮發(fā)油中高沸點部分的主要組成部分，多具有較強的香氣和生物活性，也是醫(yī)藥、食品、化妝品工業(yè)的重要原料。本實驗研究了五加皮的揮發(fā)油，發(fā)現(xiàn)五加皮中含有很多不常見的倍半萜類成分如柏木腦、α-雪松烯、β-雪松烯等，為其進(jìn)一步開發(fā)五加皮的藥用價值提供了實驗依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：61.

[2] 高月來,沈烈行.五加皮成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2000,24(5)：392-393.

[3] 許榮年,鮑忠定,秦志榮,等.GC/MS法測定五加皮保健酒的揮發(fā)性特征成分[J].釀酒科技,2004(2)：95-96.

[4] 單保恩,付小梅,華正祥,等.中藥五加皮提取成分抗腫瘤活性作用機理研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2005,25(9)：825-828.

[5] 吳立軍,鄭建,姜寶虹,等.刺五加莖葉化學(xué)成分[J].藥學(xué)學(xué)報, 1999,34(4)：294-296.

[6] 陳青俊,秦志榮,許榮年,等.高效液相色譜法同時測定五加皮保健酒中的3種特征成分[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2004(01)：104-106.

[7] 劉向前,陸昌洙,張承燁.細(xì)柱五加皮化學(xué)成分的研究[J].中草藥,2004,35(3)：202-205.

[8] 向仁德,徐任生.南五加皮化學(xué)成分的研究[J].植物學(xué)報,1983, 1(4)：356.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010,1.

Analysis of the Essential Oils from Cortex Acanthopanacis by gas Chromatography-mass Spectrometry

Zhao Changsheng Guo Shuke Zhang Xiaodong Yang Jialing Zhong Ming

ObjectiveTo analyze the chemical components of the essential oils from Cortex Acanthopanacis.MethodsThe essential oils from Cortex Acanthopanacis were extracted by steam distillation. The components of the essential oils were identified by gas chromatography-mass spectrometry and their relative contents were determined by area normalization method.Results29 compounds were separated and analyzed, 25 of them accounted for 99.56% of the total essential oils were identified. The major components were cedrol (41.53%), hexadecanoic acid, methyl ester (20.31%), β-cedrene (10.93%), linoleic acid, methyl ester (9.17%).ConclusionThe method provided the evidence for the exploitation and utilization of Cortex Acanthopanacis.

Cortex Acanthopanacis; Essential oils; Gas chromatography-mass spectrometry

R284

A

1673-5846（2013）01-0028-03

1南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥學(xué)部，廣東廣州 510515

2中藥提取分離過程現(xiàn)代化國家工程研究中心，廣東廣州 510970

國家發(fā)展和改革委員會2011年國家工程研究中心創(chuàng)新能力建設(shè)項目，發(fā)改辦高技[2011]1896號

趙長勝（1974.04-），男，大學(xué)本科，藥劑師，主要從事工作靜脈藥物配置、臨床藥學(xué)及藥物制劑。

鐘鳴（1973.02-），男，碩士，制藥高級工程師，主要從事中藥/天然藥物的研究與開發(fā)工作。