葡萄農殘檢測技術研究進展

邵歡歡　杜敏杰　王文君　朱丹唯

摘 要：葡萄是四大水果之一，具有很高的營養價值和經濟價值。但是葡萄農藥殘留對人體健康的危害已日益引起廣泛關注。本文主要闡述了利用分光光度法、氣相色譜法、酶生物傳感器法等技術對采后葡萄農藥殘留檢測的研究進展。綜述發現，分光光度法操作簡單，耗時間短，但精確度較低，適用于定性研究；氣相或液相色譜法是現階段農藥殘留分析中的主要檢測方法，精確度高，適用于定量研究；酶生物傳感器以操作快速、簡單，易于微型化等優勢成為農藥殘留在線監測領域的研究熱點。總之，葡萄農殘檢測技術正朝著簡單、快速、便利、準確、高效的方向發展。

關鍵詞：葡萄；農殘檢測；氣相色譜；分光光度；酶生物傳感器

葡萄屬落葉藤本植物，掌葉狀，3-5缺裂，復總狀花序，通常呈圓錐形，漿果多為圓形或橢圓。葡萄營養豐富，富含礦物質、維生素以及人體所需的氨基酸。此外，葡萄中含有的天然活性物質，如白藜蘆醇、齊墩果酸、花色苷及原花青素等具有重要的醫療保健價值[1]；高量富含的酚類物質，可調節腸道活動，修改腸道形態和腸道菌群，增加腸道細菌的生物多樣性程度[2]。

雖然葡萄色、香、形、味俱佳，具有極好的營養保健功能，但是由于葡萄生產方式落后，濫用農藥現象、農殘超標現象突出。據研究，葡萄表面農藥殘留具有致畸性、誘變性，并會對人類的免疫系統和神經系統產生一定的影響。隨著我國社會經濟的發展，農殘檢測成為保證食品安全的關鍵措施和影響農產品國際貿易的重要技術壁壘，并逐漸成為社會的熱點話題之一。因此，我國的食品農殘檢測任重而道遠，必須加強農藥殘留的檢測和控制，確保食品質量才能在國內、國際市場上具有競爭力，最終使生產經營者獲得豐厚的經濟效益。本文將從國內外農殘檢測方法方面進行綜述分析，并對葡萄農殘檢測研究進展進行分析。

1.浙江省葡萄發展現狀

葡萄是浙江的傳統水果之一。在21世紀以來，葡萄產業成為近年來面積增長最快、效益最高的水果產業。葡萄主要有巨峰、藤稔、京亞、紅富士、矢富羅莎、奧古斯特、維多利亞、紅地球、夏黑、巨玫瑰等品種[3]，主產集中在金華、嘉興、寧波、臺州、湖州和紹興等6個市，據報道，2000～2009年的10年間浙江葡萄面積增長了2.6倍。產量增長了3.0倍。全省葡萄面積達1.7萬hm2，產量39萬t，產值超過18億元，分別占全省水果的6%、10%和17%。

2.葡萄病害蟲及防治

葡萄病害主要有霜霉病、白腐病、炭疽病、灰霉病和黑痘病等，其中采后貯藏期間主要有葡萄灰霉病、青霉病、酸腐病、根霉腐爛病和枝孢霉腐爛病等病害。化學防治是葡萄生產中采取的有效防治措施，常用農藥有甲基托布津、速克靈、炭特靈、施百克、退菌特、等殺菌劑。葡萄透翅蛾、小葉蟬、甲蟲和虎天牛等是葡萄主要的蟲害。常用的農藥有敵敵畏、一些掃螨凈乳油等。葡萄病蟲害的防治，應結根據不同生長時期的病蟲害發生情況開展防治工作。

3.農藥殘留檢測技術

目前國際上農殘檢測的方法主要有分光光度法、氣相色譜、氣相色譜-質譜、氣相色譜串聯質譜、高效液相色譜、液相色譜-質譜、液相色譜-串聯質譜和生物傳感器法等。

3.1 分光光度法

研究發現動力學分光光度法能測定微量有機磷農藥，其原理基于有機磷農藥（馬拉硫磷、樂果、甲拌磷）對隱色結晶在鹽酸介質中的碘酸鉀給予紫色染料具有氧化催化效果[4]。該方法具有簡單的選擇性和靈敏的催化動力學等優點，能較好的檢測出微量有機磷類農藥。Mitic SS[5]等運用酶催化動力學光度法，對水域和牛奶中的有機磷農藥樂果殘留進行研究。實驗發現，樂果濃度區間范圍為4.58～41.22μg/mL，優化條件下為1.24μg/mL。因為該方法是在抑制動力學的基礎上發展起來的，是一種可行的、快速和經濟的檢測方法，所以它在新領域的應用前景是非常廣闊的。

3.2 氣相色譜法

氣相色譜法是一種經典的分析方法，其分析對象是氣體和可揮發物質其優點是分離效能高，選擇性高，分析速度快。但是沸點太高的物質或熱穩定性差的物質都難以應用氣相色譜法進行分析，故應用范圍受到限制[6]。

目前氣相色譜法已經被廣泛使用于食品農殘的檢測。Huang Xiaohui[7]等在枸杞中建立快速氣體色譜法，同時測定50種有機氯和擬除蟲菊酯農藥殘留量。檢測結果發現，回收率為70.3%～115.7%，相對標準偏差（RSDS）為2.0%～14.4%。該方法可以同時處理多個樣品，結果重現性好，令人滿意。

3.3 高效液相色譜法

高效液相色譜法是以液體作為流動相的色譜分析法，主要用于高沸點、熱穩定性差、相對分子質量大的農藥的分離和分析。由于只能檢測對紫外有吸收和本身能發射熒光的農藥，因而限制了其應用范圍。高效液相色譜法已經廣泛應用于農藥檢測領域。孔祥虹[8]等建立了超高效液相色譜串聯質譜法方法，用于檢測葡萄籽提取物中78 種農藥殘留物。這78種農藥含量在0.001～0.2μg/mL范圍內線性關系均良好，適用于葡萄籽提取物中78種農藥殘留的快速篩查測定。

3.4 酶生物傳感器法

酶生物傳感器法（EBS）一般指基于抑制作用的傳感器與基于催化的傳感器。當今的生物傳感儀器用途極為廣泛，在食品分析中作為一個新興的和不斷增長的應用。與其他篩選方法，如放射免疫法、酶聯免疫吸附試驗、免疫熒光和發光免疫分析相比，在食品分析方面，酶生物傳感器法具有自動化、重復性高、分析速度快和實時分析等優點[9]。

酶生物傳感器中常用的酶有膽堿酯酶）。Mishra RupeshK[10]等，將轉基因乙酰膽堿酯酶成功用于牛奶樣品中有機磷農藥的量化檢測。以自動化流程為基礎的生物傳感器成功地量化不同含脂肪的牛奶樣品中有機磷農藥殘留量，運用有無假陽性或假陰性的優點構建生物傳感器觀察分析數據，這種方法廉價、靈敏、便攜、非侵入性，并提供實時的結果，對今后農藥殘留檢測技術的開發，指明了方向。

另外一種較常用的酶是有機磷水解酶目前，為了提高有機磷水解酶的活性和穩定性，將多肽進行改造。通過注入GBP-OPH 形成的傳感器，來檢測農藥，能夠顯示出較高的靈敏度，并且有較低的檢出限和更好的穩定性[11]，該方法在生物傳感器和生物轉化過程中具有巨大應用前景。

4 采后葡萄農藥殘留檢測技術現存問題與展望

綜上所述，在定性檢測農藥方面則可以選擇分光光度法，操作相對簡單，但是精確度不高。若要精確檢測則可以選擇氣相色譜法，但其預處理過程需要精心研究，檢測儀器昂貴。高效液相色譜具有快速、簡便、廉價、有效、堅固耐用和安全的特點，由于只能檢測對紫外有吸收和本身能發射熒光的農藥，因而限制了其應用范圍。但是目前利用酶生物傳感器以快速，操作簡單，易于微型化等優勢來檢測農藥發展研究為今后農殘技術檢測開辟了新途徑。

隨著人們對食品安全意識的不斷提高，葡萄的農藥殘留檢測技術必然會引起更廣泛地研究。今后展望：①培育新的優良抗病葡萄；②選用殘留毒性小的生長劑；③多開發高效、低毒、低殘留且易降解的農藥；④從遺傳育種的角度來解析農藥殘留的遺傳屬性，篩選出低農藥殘留性的種質資源，以求從品種自身的生物學特性出發解決農藥殘留問題[12]；⑤利用固定化酶技術制得的酶傳感器使之對農藥具有極高的敏感性和極低的檢測限，來開發新型農藥檢測技術；⑥不斷提高檢測復雜葡萄殘留農藥的能力，將生化技術與現代化技術相結合，使快速檢測技術向著更準確、更穩定、更靈敏的方向發展，為提出一個供消費者借鑒的科學食用葡萄方法，在一定程度上提高葡萄食用過程的安全性。

參考文獻：

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（作者單位：321004浙江師范大學行知學院）