山酢漿草根頸試管苗培養的研究

宋詩迎等

摘要：為實現栽培、保護野生種質的目的，本研究以山酢漿草的根頸為材料，進行了試管苗的培養和繼代繁殖培養、試管苗根莖的扦插和移植研究，建立起根頸試管苗培養技術。結果表明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是試管苗培養和試管苗根莖繼代繁殖培養的理想培養基；在溫室苗床上試管苗根莖扦插成活率為96%，繁殖速度提高了2.9倍；試管苗移植成活率為98.8%，移植成活的試管苗保持了野生山酢漿草的所有植物學性狀。

關鍵詞：山酢漿草；試管苗；繁殖

中圖分類號：S543+.904.3文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）07-0009-03

山酢漿草（Oxalis acetosella）又稱白花酢漿草、三葉銅錢草等，屬于酢漿草科酢漿草屬多年生草本植物，在我國黑龍江、吉林及遼寧地區的本溪、鳳城和蓋州等地都有分布^[1]，生長在針葉林、針闊混交林、闊葉林及灌叢下陰濕地。酢漿草含黃酮類、葒草素等成分，全草可作中草藥使用，具有活血化瘀、清熱解毒、利尿通淋等功效，能治勞傷疼痛、跌打損傷、無名腫毒、麻風、疥癬等疾病^[2]。近年來遼寧東部地區的養雞農民發現，將山酢漿草的干粉作為蛋雞的飼料添加劑使用，能明顯地降低蛋雞的發病率，提高養殖效益。為此，一個時期以來，遼寧東部地區養雞農民每年都要數次采收山酢漿草，作為飼料添加劑或者出售，導致山酢漿草的野生資源受到了嚴重破壞，不僅嚴重影響其作為飼料添加劑的使用，還使本來分布和數量都很有限的這一藥用植物更加稀少。雖然目前已有栽培植物尤其是酢漿草屬植物組織培養的研究報道^[3～10]，但迄今未有山酢漿草的相關研究報道。為實現栽培、保護野生種質的目的，研究者對其進行了根頸愈傷組織的無性系繁殖研究。

1材料與方法

1.1試驗材料

6月中旬，從本溪灌叢下陰濕地采取生長旺盛的山酢漿草，將具有根頸的根剪下作為試驗材料。

1.2材料滅菌

將試驗材料放到500 ml的磨口廣口瓶中，用無菌水搖晃洗滌5～10 min，蒸餾水搖晃洗滌5 min左右，移到超凈工作臺上，用75%的乙醇滅菌約10 s，再用0.1% HgCl2滅菌2 min，無菌水洗滌2次，再用飽和的次氯酸鈉溶液滅菌8 min，最后用無菌水洗滌6次，即可獲得無菌材料^[11]。

1.3培養條件

光照強度1 500 lx，培養溫度22℃，其它培養條件參見六道木嫩芽快速繁殖的研究^[12]。

1.4試驗方法

1.4.1根頸試管苗培養把材料上的根頸從無菌材料上切下，接種到以1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT為基本培養基、分別添加0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L 2，4-D、NAA、IBA、IAA 4種生長素的培養基上，進行不同種類、不同濃度生長素對根頸試管苗培養影響的試驗。試驗重復2次，每種培養基接種培養20個根頸。

1.4.2試管苗根莖的繼代繁殖培養把在1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA培養基上培養的具有生長點的根莖，用無菌手術剪子剪成具有2個生長點的根莖段后，繼續接種到該種培養基上，進行試管苗根莖的繼代繁殖培養。試驗重復2次，每次繼代繁殖培育6代，接種200個根莖段。

1.4.3試管苗根莖的扦插繼代培養繁殖的試管苗從培養瓶中取出，將根莖剪成具有2個生長點的根莖段后，扦插到溫室苗床上厚約6 cm的扦插基質（由1/2園土與1/2河沙組成）中，進行試管苗根莖段的扦插試驗。移栽后前12 d要保持遮陰、空氣相對濕度為85%的生長條件，之后按照溫室內正常條件進行管理。試驗重復2次，扦插的數量分別為380株和260株。

1.4.4根莖扦插試管苗的移植5月上旬，當外界最低溫度達到15℃時，把在溫室苗床上由根莖扦插成活的試管苗移植到大連郊區水庫旁灌叢下的陰濕地上。移植試驗一次性完成，共移植605株。移植后，除移植時澆1次透水外不進行其它管理。移植的同時，從本溪挖來20株正常生長的野生山酢漿草定植于試管苗旁作為對照。

2結果及分析

2.1不同種類、不同濃度生長素對試管苗培養的影響

培養到60 d時觀察統計，結果見表1。只在添加不同濃度NAA和IAA的培養基上有試管苗形成，且只在添加0.2、0.4 mg/L IAA的 2種培養基上有根莖形成。從試管苗、根莖的生長率、長勢 4個方面看，添加0.4 mg/L IAA的培養基生長效果最好。在該種培養基上培養9 d時，有培養材料在根頸下部長出白色的根，上部長出葉片，生長成試管苗；之后，隨著試管苗的生長率不斷增加，又有試管苗會相繼生長出根莖；培養到60 d時，不僅試管苗生長旺盛，且所有的試管苗都長出根莖，根莖平均長度為2.6 cm，每條根莖上有2～8個可見的生長點。2次重復試驗的結果基本一致。以上結果說明：1/2MS+15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA是山酢漿草根頸試管苗培養的理想培養基。

2.2試管苗根莖的繼代繁殖培養

試管苗根莖的繼代繁殖培養周期為50 d，其繁殖的試管苗生長狀態比使用根頸為材料培養的試管苗更旺盛，每株試管苗的平均根莖長度為4.4 cm、平均有8.9個可見生長點，每一代的平均繁殖系數為4.2，并且采用此方法培養的試管苗沒有無效苗，所有的試管苗都生長旺盛。以上結果說明，1/2MS+ 15 g/L蔗糖+0.4 mg/L ZT+0.4 mg/L IAA也是山酢漿草試管苗根莖繼代繁殖培養的理想培養基。

2.3試管苗根莖的扦插

觀察表明，扦插10 d后有根莖段開始發芽，并生長為試管苗。扦插40 d后統計顯示，2次扦插共成活614株，平均成活率為96%。以根莖為材料進行扦插，每株試管苗的根莖平均可切成3.9個扦插的莖段，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。

2.4根莖扦插試管苗的移植

移植后的觀察表明，與同期移栽的野生苗相比，移植的試管苗容易成活，前期生長速度慢、植株較小，60 d后生長開始加速，秋季出現了生長旺盛、植株整齊、葉色濃綠、落葉推遲6 d左右等特點。移植70 d后統計表明，共移植成活598株，成活率為98.8%。由根莖培養的試管苗保持了野生山酢漿草的所有植物學性狀，移植的試管苗當年正常開花結果。

3討論

本研究通過兩條途徑進行繁殖：一是試管苗根莖繼代培養的方法，50 d為一個培養周期，平均繁殖系數為4.2，按照這個繁殖速度，1株試管苗的根莖1年能繁殖出2萬多株試管苗；二是在苗床上扦插根莖，其繁殖速度比移栽提高了2.9倍。以上結果說明，本研究建立的繁殖技術繁殖速度快，能夠滿足栽培、保護野生種質對種苗的需求。

在對試管苗進行繼代繁殖培養時，其繁殖周期比直接由根頸培養試管苗的培養周期縮短了10 d。于馨恒等^[13]在進行小天仙子的研究中，也觀察到這種現象。產生這種現象的主要原因有：一是由根頸直接培養試管苗時，根頸材料需經過滅菌處理，在滅菌中材料可能受到嚴重傷害，接種到培養基上后需要恢復培養一段時間；二是根頸是在土壤中生長的，接種到培養基上后對新環境需要有一個適應過程。而繼代繁殖培養時，其根莖不需經過滅菌處理，且是在相同的培養基上培養的，試管苗已經適應了這種環境條件，避免了恢復培養及適應過程所需要的時間。

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