E—Cadherin、CD44v6在腎臟惡性腫瘤中的表達及意義

蔣悅

[摘要] 目的 探討E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤中的表達及臨床意義。 方法 選擇腎臟惡性腫瘤組織30例和正常腎組織10例，采用免疫組織化學法檢測腎臟惡性腫瘤組織和正常腎組織中E-Cadherin、CD44v6的表達，比較兩組之間的差異，并分析E-Cadherin和CD44v6與腎臟惡性腫瘤的臨床分期、病理分級及淋巴結轉移的關系。 結果 腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達顯著低于對照組（P < 0.01），CD44v6表達顯著高于對照組（P < 0.05）。E-Cadherin表達在不同病理分級之間差異不顯著（P > 0.05），CD44v6表達在不同病理分級之間差異顯著（P < 0.01）。E-Cadherin、CD44v6表達在不同臨床分期之間比較差異有統計學意義（P < 0.05）；E-Cadherin在有淋巴結轉移的腎臟惡性腫瘤組織表達顯著低于無淋巴結轉移（P < 0.05）。 結論 E-Cadherin表達下調和CD44v6升高在腎臟惡性腫瘤的發生、發展、浸潤等過程中發揮重要的作用。

[關鍵詞] 上皮鈣黏附素；CD44基因含v6外顯子的變異體；腎臟惡性腫瘤

[中圖分類號] R737.11 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）08-0014-03

腫瘤的侵襲、轉移是一個復雜的過程，是腫瘤患者病情惡化、死亡的主要原因之一。近年來，關于細胞黏附能力在腫瘤轉移、侵襲過程中的作用逐漸受到醫學界的重視，因此關于與細胞黏附相關的分子的研究逐漸增多。上皮鈣黏附素（E-Cadherin）是與細胞黏附能力相關的重要分子之一[1]。CD44是細胞表面的跨膜蛋白，也是一種黏附分子，能夠介導細胞與細胞、細胞與基質間相互作用。CD44基因含v6外顯子的變異體（CD44v6）的變異部分位于胞外近膜，對黏附作用具有重要的影響。有研究顯示，CD44v6能夠促使腫瘤浸潤生長和轉移。本文探討E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤中的表達，并探討其與臨床分期、病理分級等關系。現將實驗結果分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 病理資料

腎臟惡性腫瘤組30例腎臟惡性腫瘤病理標本來自于2007～2012年在我院進行手術治療患者的石蠟標本。患者30例，其中男23例，女7例，年齡36～70歲，平均61歲。所有患者均經病理診斷明確。采用Fuhman[2]病理分級法進行分級，Ⅰ級10例，Ⅱ級15例，Ⅲ級5例。采用Robson腫瘤分期法進行分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期9例，Ⅳ期3例。10例患者存在淋巴結轉移。選擇正常腎組織標本10例作為對照組。

1.2 標本制作

腎組織采用福爾馬林液固定，然后石蠟包埋。5 μm厚連續切片，共4張。1張采用HE染色，核實診斷。余3張行免疫組織化學染色，檢測E-Cadherin、CD44v6。

1.3 實驗方法

1.3.1 試劑 采用免疫組化法，S-P免疫組化試劑盒由上海活樂生物科技有限公司提供，E-Cadherin、CD44v6鼠抗人單克隆抗體由福州邁新生物有限公司提供。

1.3.2 方法 切片脫蠟，100%的酒精浸泡15 min，按照95%-90%-80%-70%的酒精濃度梯度依次進行浸泡，各5 min，然后蒸餾水沖洗。pH為6.0的檸檬鹽緩沖液1 L置于壓力鍋中，加熱沸騰后，將組織切片放置在切片架上放入沸騰的緩沖液中，扣上壓力閥，從噴氣開始計時，2 min后關火，冷卻，取出玻片。蒸餾水沖洗，PBS緩沖液沖洗，各2次，每次沖洗3 min。所有切片均加入50 μL的過氧化酶阻斷液，室溫下放置10 min，PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min。甩掉PBS緩沖液后，所有切片均加入50 μL解非免疫性動物血清，室溫下孵育10 min。甩掉血清，所有切片均分布加50 μL的鼠抗αE-Cad血清（第一抗體），室溫孵育60 min，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min。甩掉PBS緩沖液，每片加入50 μL生物素標記的第二抗體，室溫孵育10 min，PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min。甩掉PBS緩沖液，每片加入50 μL的鏈親和素，室溫孵育10 min，PBS緩沖液沖洗3 min，共3次。甩掉PBS緩沖液，每片加入100 μL的AEC溶液，顯微鏡下觀察，10 min后蘇木素復染，然后進行自來水沖洗，最后封片。

1.4 病理特點

E-Cadherin位于細胞膜上，陽性：鏡下細胞膜出現均勻一致的顆粒，呈棕黃色；陰性為無棕黃色顆粒，或者著色區和無色區相間，且陽性染色的細胞少于90%。CD44v6也定位于細胞膜，陽性細胞細胞膜呈現出棕黃色，陽性細胞超過10%為陽性。

1.5 統計學方法

采用SPSS 16.0統計學軟件進行數據處理，計數資料采用χ2檢驗。P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤中表達的病理結果

腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達可見細胞膜出現棕黃色均勻一致的顆粒，見圖1。腎臟惡性腫瘤組織CD44v6表達可見陽性細胞呈棕黃色，見圖2。

2.2 E-Cadherin和CD44v6在腎臟惡性腫瘤和正常腎組織中的表達差異

腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達8例陽性，占26.7%，正常腎組織7例陽性，占70.0%，兩組差異有統計學意義（P < 0.01）。腎臟惡性腫瘤CD44v6表達17例陽性，占56.7%，正常腎組織2例陽性，占20.0%，兩組差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.3 E-Cadherin和CD44v6在不同病理分級中的表達差異

病理分級為Ⅰ級腎臟惡性腫瘤組織E-Cadherin表達3例陽性，占30.0%，Ⅱ級4例陽性，占26.7%，Ⅲ級1例陽性，占20.0%，不同病理分級間比較，差異不顯著（P > 0.05）。病理分級為Ⅰ級腎臟惡性腫瘤組織CD44v6表達3例陽性，占30.0%，Ⅱ級11例陽性，占73.3%，Ⅲ級3例陽性，占60.0%，不同病理分級間比較，差異顯著（P < 0.01）。見表2。

2.4 E-Cadherin和CD44v6在不同臨床分期中的表達差異

臨床分期為Ⅰ期的腎臟惡性腫瘤組織中E-Cadherin表達4例陽性，占50.0%，Ⅱ期2例陽性，占20.0%，Ⅲ期1例陽性，占11.1%，Ⅳ期1例，占33.3%。不同臨床分期之間比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。臨床分期為Ⅰ期的腎臟惡性腫瘤組織中CD44v6表達3例陽性，占37.5%，Ⅱ期6例陽性，占60.0%，Ⅲ期7例陽性，占77.8%，Ⅳ期3例，占100.0%。不同臨床分期之間比較，差異有統計學意義（P < 0.01）。見表3。

2.5 E-Cadherin和CD44v6與淋巴結轉移的關系

有淋巴結轉移的腎臟惡性腫瘤組織1例陽性，占10.0%，無淋巴結轉移的患者7例陽性，占35.0%，兩組間比較，差異顯著（P < 0.05）。有淋巴結轉移的腎臟惡性腫瘤組織6例陽性，占60.0%，無淋巴結轉移的患者11例陽性，占55.0%，兩組間比較，差異不顯著（P > 0.05）。見表4。

3 討論

Cadherin家族（Ca2+ dependent cell adhesion molecules family）是一組介導細胞間相互聚集的黏附分子，對于生長發育過程中細胞的選擇性聚集具有至關重要的作用。Cadherin分子均為單鏈糖蛋白，約由723～748個氨基酸構成，為Ⅰ型膜蛋白，由胞膜外區、穿膜區和胞漿區三部分組成。Cadherin家族共有3個成員，E-Cadherin是其中之一，主要分布在上皮組織內，主要介導同型細胞的黏附，對維持上皮細胞的正常結構具有重要的意義，具有抑制腫瘤細胞轉移的作用。E-Cadherin在原發病灶中的表達表現為4種形式，均質性在全部腫瘤細胞表達，據造型或均質性降低，完全無表達，在細胞口表達，但沒有黏附功能。因此，當E-Cadherin在細胞中表達下降導致功能障礙時，腫瘤細胞呈浸潤生長，容易發生遠處轉移。有研究顯示，在乳腺導管癌中，高分化組E-Cadherin成均質性全部表達，而低分化組表達減少或缺如[3]。海鷗等[4]研究E-Cadherin與胃癌浸潤轉移的關系，結果顯示，胃癌E-Cadherin的表達率顯著低于正常胃黏膜，其與胃癌的分型、細胞分化程度、胃癌浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期等均有相關性。孟繼虹[5]研究E-Cadherin在白血病細胞中的表達，白血病患者的E-Cadherin表達顯著低于正常人。本文的研究結果也顯示，腎臟惡性腫瘤組織中E-Cadherin的表達顯著低于正常腎組織，而其與病理分級關系不明顯。但是其表達與臨床分期和淋巴結轉移具有相關性，臨床分期Ⅰ期的患者表達最高，而有淋巴結轉移的患者表達低于無淋巴結轉移的患者，說明E-Cadherin表達下調，功能障礙，導致癌細胞的黏附功能下降，促進了癌細胞的轉移，促進腫瘤的生長[6]。

CD44為分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白，主要參與異質性黏附，即腫瘤細胞與宿主細胞和宿主基質的黏附，異質性黏附在腫瘤細胞侵襲轉移中起促進作用[7]。CD44蛋白的主要功能主要有介導淋巴細胞與毛細血管后小靜脈中的高柱狀內皮細胞結合，使淋巴細胞穿過血管壁回到淋巴組織，參與淋巴細胞的激活過程，與細胞外基質中的透明質酸、層黏連蛋白等基質分子結合，與細胞骨架蛋白結合，參與細胞偽足形成，并與細胞的遷移運動有關[8]。CD44v6在惡性腫瘤組織中陽性表達率高低不一，但陽性表達者較易發生脈管浸潤和遠處轉移，預后不良。有研究認為，CD44v6與細胞的轉移、浸潤生長等有關。丁雪松[9]對非小細胞肺癌中CD44v6的表達進行研究，結果顯示，陽性表達高達69.23%，與臨床分期、淋巴結轉移呈正相關，而與病理分期、主治分化關系不大，其在良性肺疾病中無表達。徐玉雪[10]對卵巢上皮性腫瘤中的CD44v6表達進行研究，結果顯示，卵巢上皮性腫瘤組織中CD44v6表達高達78.26%，顯著高于良性腫瘤，而正常卵巢的表達率為0，其與臨床分期關系不大，與淋巴結轉移有相關性，與腹水也有相關性。本研究結果顯示，腎臟惡性腫瘤組織CD44v6的表達顯著高于正常人，并且與病理分級、臨床分期相關，但與淋巴結轉移不相關，考慮可能與本文納入的研究對象較少有關。

綜上所述，多種因素參與腫瘤的發生、發展、轉移，而E-Cadherin表達的下降和功能下調及CD44v6異常高表達都對腫瘤的發展、浸潤具有重要的意義。本研究的不足之處是納入的標本較少，進一步的研究還需要后續大樣本的分析。

[參考文獻]

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[9] 丁雪松. CD44v6與Ezrin在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[D]. 重慶：重慶醫科大學，2009：2.

[10] 徐玉雪. CD44v6與PCNA在卵巢上皮性腫瘤中的表達及臨床意義[D]. 大連：大連醫科大學，2009：16-17.

（收稿日期：2013-01-17）