花生RIL群體芽期耐鹽性初探

苗華榮　毛瑞喜　胡曉輝等

摘要：以花育22號、花育28號、06B16、P76為試材進行不同鹽濃度脅迫，篩選適宜的鹽濃度；以3個RIL（Recombinant Inbred Lines）群體為試材，分析RIL群體芽期耐鹽性差異以及芽期耐鹽性與脂肪酸的相關(guān)性。結(jié)果表明：隨著鹽濃度的增加，4個品種發(fā)芽率、相對發(fā)芽率和相對鮮重均呈下降趨勢；0.5%和0.7%鹽濃度下4個品種的發(fā)芽率發(fā)生分化，1.0%鹽濃度下4個品種的發(fā)芽率、相對發(fā)芽率均接近0，因此選擇0.7%作為RIL群體芽期耐鹽性的鑒定濃度。RIL2群體相對發(fā)芽率的次數(shù)分布呈連續(xù)偏態(tài)分布，變幅為0～56.41%；RIL5、RIL8群體相對發(fā)芽率的次數(shù)分布呈雙峰分布，變幅分別為0～51.61%、0～57.14%。

關(guān)鍵詞：花生；RIL群體；耐鹽性

中圖分類號：S565.201 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2013）08-0033-03

土壤鹽堿化和次生鹽堿化問題在世界范圍內(nèi)廣泛存在，特別是干旱、半干旱地區(qū)，問題更為嚴重。我國鹽漬化土壤較多，總面積超過3 300×104 hm2，而且還經(jīng)常由于灌溉不當產(chǎn)生一些次生鹽漬化土壤_[1]。由于大部分植物在土壤含鹽0.3%時便受到危害，大于 0.5%時便無法正常生長，鹽堿逆境脅迫成為限制植物生長發(fā)育和作物產(chǎn)量的主要非生物脅迫因素。因此如何提高作物耐鹽性備受關(guān)注。

花生是我國重要的油料作物和經(jīng)濟作物，開展花生耐鹽性研究，培育耐鹽花生品種，對擴大花生產(chǎn)區(qū)、提高鹽堿地區(qū)花生產(chǎn)量、增加油脂供給具有重要意義。目前，有關(guān)花生耐鹽性研究的報道相對較少，主要集中在種質(zhì)資源篩選鑒定、芽期和全生育期耐鹽性鑒定方面_[2～5]。本研究以花育22號、花育28號、06B16、P76為親本構(gòu)建的3個RIL群體為試材，對RIL群體芽期耐鹽性差異以及芽期耐鹽性與脂肪酸的相關(guān)性進行分析。

1材料與方法

1.1材料

以花育22號_[6]、花育28號_[7]、06B16、P76_[8]為親本構(gòu)建的3個RIL群體—— RIL2群體（花育22號×06B16）、RIL5群體（花育22號×P76）和RIL8群體（花育28號×P76）為試材。其中，花育22號和花育28號均由山東省花生研究所育成，通過了山東省農(nóng)作物品種審定委員會審定；P76為來源于山東省花生研究所的高油酸品系；06B16為來源于美國的高油酸材料。材料種植于山東省花生研究所試驗站，收獲后晾干備用。

1.2方法

1.2.1鹽濃度篩選以4個親本為材料，設(shè)計鹽濃度梯度為0、0.30%、0.50%、0.70%、1.00%，以篩選出適合RIL群體芽期耐鹽性鑒定的鹽濃度。

1.2.2耐鹽性鑒定方法選取60粒種子平均放置到直徑12 cm、底部放置2層濾紙的3個培養(yǎng)皿中，每皿20粒；分別加入0.7%鹽溶液100 ml，置于28℃培養(yǎng)箱吸脹6 h；取出，將溶液倒掉再分別加入0.7%鹽溶液30 ml，仍置于28℃培養(yǎng)箱發(fā)芽；48 h后取出，將溶液倒掉，分別加入0.7%鹽溶液20 ml，觀察記錄種子萌發(fā)情況。對照各皿中改加蒸餾水，其他操作與鹽處理的相同。

統(tǒng)計96 h的發(fā)芽數(shù)、萌發(fā)數(shù)以及96 h的新增加鮮重。各指標判定標準：發(fā)芽——胚根長度等于或大于種子長度；萌發(fā)——種子露白或胚根長度低于種子長度；增加鮮重——測量長度超過2 mm的胚根重量（g）。

發(fā)芽率（%）=發(fā)芽種子數(shù)/種子總粒數(shù)×100

相對發(fā)芽率（%）=脅迫發(fā)芽率/對照發(fā)芽率×100

相對鮮重（%）=脅迫鮮重/對照鮮重×100

1.2.3脂肪酸測定采用GC法。氣相色譜儀Agllent Technologies 7890A，載氣：氦氣，色譜條件：柱初溫210℃，維持9 min，然后以20℃/min升至230℃，維持8 min；分流比3∶1；檢測器溫度380℃，氫氣流量40 ml/min；空氣流量：400 ml/min；尾吹高純度氦氣10 ml/min。

1.3數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)處理與分析在Excel中進行。

2結(jié)果與分析

2.14個親本品種的鹽濃度梯度篩選

對花育22號、花育28號、06B16、P76進行不同鹽濃度脅迫，結(jié)果（圖1）表明：隨著鹽濃度的增加，4個品種的發(fā)芽率、相對發(fā)芽率和相對鮮重變化趨勢一致，均呈下降態(tài)勢；花育22號和花育28號的萌發(fā)率呈上升趨勢，而06B16和P76的萌發(fā)率先升高后降低，分別于0.5%和0.7%時出現(xiàn)峰值。4個品種在各鹽濃度脅迫下的表現(xiàn)不盡相同，0.3%鹽濃度下4個品種的發(fā)芽率、相對發(fā)芽率均在60%以上，之后大幅下降，以06B16和P76的下降幅度最大；1.0%鹽濃度下，4個品種的發(fā)芽率、相對發(fā)芽率均接近0，因此選擇0.7%作為RIL群體芽期耐鹽性的鑒定濃度。相比較而言，4個品種的耐鹽性水平由高到低依次為花育28號、花育22號、06B16、P76。

2.2RIL群體耐鹽性表現(xiàn)

RIL2群體各株系對照的平均發(fā)芽率為91.98%，鹽脅迫的平均發(fā)芽率為13.43%；RIL5群體各株系對照的平均發(fā)芽率為89.56%，鹽脅迫的平均發(fā)芽率為13.10%；RIL8群體各株系對照的平均發(fā)芽率為89.04%，鹽脅迫的平均發(fā)芽率為19.64%。

鹽脅迫下，RIL2群體相對發(fā)芽率的次數(shù)分布呈連續(xù)偏態(tài)分布，變幅為0～56.41%；RIL5群體相對發(fā)芽率的次數(shù)分布呈雙峰分布，變幅為0～51.61%；RIL8群體相對發(fā)芽率的次數(shù)分布也呈雙峰分布，變幅為0～57.14%；RIL2、RIL5和RIL8群體中相對發(fā)芽率超過40%的株系分別為4、3、15個（圖2）。

2.3RIL群體芽期耐鹽性與4種主要脂肪酸的相關(guān)性

由表1看出，RIL2群體和RIL5群體的對照發(fā)芽率、脅迫發(fā)芽率、相對發(fā)芽率、相對鮮重與棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸含量間相關(guān)性均不顯著；RIL8群體的對照發(fā)芽率、脅迫發(fā)芽率、相對發(fā)芽率與棕櫚酸、亞油酸含量極顯著正相關(guān)，而與油酸極顯著負相關(guān)。

3結(jié)論與討論

鹽濃度篩選試驗結(jié)果表明，0.7%的鹽濃度可以作為RIL群體各株系芽期耐鹽性的鑒定濃度。4個親本品種的耐鹽性強弱依次為花育28號、花育22號、06B16、P76。

不同RIL群體的耐鹽性存在差異，RIL2群體相對發(fā)芽率的次數(shù)分布呈連續(xù)偏態(tài)分布，而RIL5和RIL8群體相對發(fā)芽率的次數(shù)分布呈雙峰分布，表現(xiàn)出花生不同RIL群體耐鹽性遺傳的復(fù)雜性。

對不同類型花生種質(zhì)資源的耐鹽性進行鑒定，結(jié)果表明，五大類型花生品種的耐鹽性強弱依次為多粒型、珍珠型、龍生型、普通型、中間型，并認為植物的耐鹽性與其體內(nèi)的亞油酸和脯氨酸含量具有相關(guān)性。本研究對RIL群體芽期耐鹽性與脂肪酸的相關(guān)性分析表明， RIL2群體和RIL5群體的調(diào)查指標與棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸含量間均不存在顯著相關(guān)性；而RIL8群體的對照發(fā)芽率和相對發(fā)芽率均與棕櫚酸、亞油酸含量極顯著正相關(guān)，與油酸含量極顯著負相關(guān)。花生耐鹽性與脂肪酸含量間的關(guān)系仍需進一步通過擴大材料來源進行分析。

參考文獻：

[1]袁金娥，劉家嫻，先銳，等.大麥耐鹽性鑒定方法及耐鹽機理研究進展[J].大麥與谷類科學，2011，4：11-14.

[2]吳蘭榮，陳靜，許婷婷. 花生全生育期耐鹽性鑒定研究[J]. 花生學報，2005，34（1）：20-23.

[3]胡曉輝，孫令強，苗華榮，等.不同鹽濃度對花生品種耐鹽性鑒定指標的影響[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學，2011，11：35-37.

[4]欒文琪，張建成，顧淑媛.花生品種資源耐鹽性鑒定初報[J].花生科技，1994，4：21-23.

[5]吳蘭榮，顧淑媛. 花生種質(zhì)資源耐鹽性篩選鑒定初報[J]. 花生科技，1996，3：24-26.

[6]吳蘭榮，陳靜，石運慶，等. 60Co γ射線與雜交相結(jié)合選育新品種花育22號[J].核農(nóng)學報，2006，3：309-312.

[7]苗華榮，吳蘭榮，崔鳳高，等.早熟高產(chǎn)油用小花生新品種花育28號及其高產(chǎn)栽培技術(shù)[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學，2011，11：107-108.

[8]陳靜，毛瑞喜，白鑫，等.利用CAPS標注推測我國花生位點的基因型[J].核農(nóng)學報，2013，27（1）：28-32.