槲皮素與針刺聯用對缺血再灌注損傷大鼠的影響

宋 林，張 麗，許 康

(湖北省新華醫院 神經內科，武漢 430015)

腦卒中是老年人的常見疾病，具有高發病率、高病死率以及高致殘率的特點，嚴重危害人類健康,給社會和家庭造成了沉重的精神和經濟負擔。缺血性腦卒中約占全部卒中的75%左右，對其治療主要集中在促進卒中后神經系統功能的恢復、改善腦部循環、抗氧化自由基損傷、抗興奮性氨基酸等方面[1-2]。槲皮素是中藥中廣泛存在的黃酮類化合物，研究[3]證實其具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗腫瘤等功效。傳統中醫針刺治療也被認為能夠很好的改善腦血管再通(即再灌注)造成的腦神經損傷。本試驗研究目的旨在探討槲皮素與針刺療法聯用在體內對腦缺血再灌注損傷的保護作用及抗炎機制，從而為臨床更好的進行腦保護治療提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 健康SD雄性大鼠100只，體質量(200±20) g，由華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供。槲皮素購自sigma公司；水合氯醛購自上海試劑一廠;考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒、谷胱甘肽試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒、丙二醛試劑盒、總抗氧化能力試劑盒等均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 動物分組與干預 100只大鼠隨機均分成5組，每組20只，分別為假手術組、模型組、槲皮素干預組、針刺干預組、槲皮素針刺聯合干預組。假手術組除不進行栓線外，其余處理皆與模型組相同。槲皮素干預于實驗前3 d開始灌胃給藥,1次/d，造模前1 h再次灌胃給藥，每次給藥劑量均為100 mg/kg。電針干預依據《大鼠穴位圖譜的研制》[4]及《實驗針灸學》進行選穴，分別選擇人中穴(也稱水溝穴，位于大鼠唇裂鼻尖下1 mm正中處，直或向上刺1 mm)、中沖穴(雙側，中指末節尖端中央，直刺1 mm，選穴依據1999年9月第1版《實驗針灸學》附常用實驗動物的針灸穴位)及風府穴(也稱天門穴，位于大鼠枕骨頂嵴后枕寰關節背凹陷處，向后下方斜刺1 mm進針)。針刺組動物在造模后1 h通以電針治療儀(G6805型，疏密波)，頻率為2 Hz，刺激強度為2 mA,以大鼠肢體或針柄微微顫動為度，每次持續時間20 min。

1.3 動物模型的建立 參照Zea Longa等[5]方法并稍加改良建立大鼠中動脈栓塞缺血/再灌注損傷模型，使用10%的水合氯醛4 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，頸部正中切口，分離出頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)及頸內動脈(ICA)。結扎右側CCA的近心端、ECA及其分支動脈。沿ICA向下分離翼顎動脈，根部結扎該分支。在ICA近端備線，遠端放置動脈夾，CCA分叉處切口，插入直徑約0.22 mm的尼龍線(深度約為17～20 mm)，尼龍線沿ICA入顱至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有血流來源。缺血1 h后，緩慢拉出尼龍線再灌注。

1.4 神經功能評分 存活鼠在灌注24 h后，參照Zea Longa等[5]標準進行神經功能評分。0分：正常，無任何神經損傷癥狀及功能缺陷；1分：不能完全伸展對側前爪；2分：向外側轉圈；3分：向對側傾倒；4分：不能行走，意識喪失。行為評分結束后，快速斷頭并于冰上分離患側腦組織，取皮質100 mg，制成5%的組織勻漿。同時取新鮮血液5 mL，使用離心機以3 000 r/min,離心10 min，分離血漿，置于-80 ℃冰箱保存，待測。

2 結果

2.1 槲皮素與針刺聯用對缺血再灌注大鼠神經功能的影響 見表1。

表1 槲皮素與針刺聯用對缺血再灌注大鼠神經功能的影響(±s,n=20)

2.2 槲皮素與針刺聯用對缺血再灌注大鼠腦組織抗氧化水平的影響 見表2。

表2 槲皮素與針刺聯用對缺血再灌注大鼠腦組織抗氧化水平的影響(±s,n=20)

3 討論

中醫學認為，缺血性腦卒中乃氣血逆亂，產生風、火、痰、瘀，進而導致腦脈痹阻所致。多年來的實踐經驗[6]認為，缺血性腦血管病的栓塞期給予及時有效的針刺治療能夠很好的改善腦血管再通(即再灌注)造成的損傷，降低本病的致死率和致殘率。研究[7]提示，針刺對腦缺血再灌注所致的自由基損傷有明顯的改善作用，提示針刺可以通過改善氧化應激損傷發揮神經元保護作用[8]。中醫治療腦卒中的關鍵是“竅閉神匿，神不導氣”，本實驗選用的人中、中沖、風府3穴共奏醒腦開竅、健腦補髓、疏風通絡的功效。

槲皮素具有超強抗氧化及清除自由基的作用，同時還被證實[9]具有抗癌、抗感染、抗病毒、降糖、降壓、免疫調節及心血管保護作用等多種生物學功效。有研究[10]提示其可能通過抑制海馬錐體神經元的外向鉀電流進而對谷氨酸誘導的神經損傷起保護作用，從而提示槲皮素對缺血樣損傷的神經具有保護作用。

本研究結果表明，槲皮素與針刺聯用能夠有效改善腦缺血再灌注大鼠的神經損傷，提高腦組織抗氧化系統的能力，減少脂質過氧化損傷，對腦神經具有良好的保護作用。從而提示選用藥物與物理治療相結合的方式治療缺血性腦卒中與單一治療方式相比具有更好的療效。此研究將為缺血性腦卒中的臨床治療提供一定的實驗數據及理論基礎。

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