冠心病患者內皮細胞微粒水平與Th1/Th2細胞因子水平的關系研究

陸永光，李 浪，符春暉，嚴 華，蘇 強，陳妍梅，黃軍章

冠狀動脈粥樣硬化是一種慢性免疫和炎癥性疾病[1]。有研究證實，冠心病患者輔助性T細胞(Th)1/Th2的失衡參與了冠狀動脈粥樣硬化斑塊的發生、發展及急性冠脈綜合征(ACS)的發病過程[2]。內皮細胞微粒(EMPs)是內皮細胞在各種病理因素的刺激下被激活或凋亡后所釋放出來的微小囊泡。近年來研究表明，冠心病患者外周血中EMPs水平的明顯升高能反映內皮功能及其障礙的程度[3]。但EMPs能否反映冠心病患者血管炎癥的反應程度，以及與ACS患者斑塊穩定性的關系尚不清楚。本研究探討了冠心病患者外周血EMPs水平與Th1/Th2細胞因子水平的關系，以揭示外周血EMPs水平升高在冠心病發病中的意義及其作用機制。

1 資料與方法

1.1 病例入選標準 (1)穩定性心絞痛(SA)：勞累引起的胸骨下或心前區壓榨性、緊縮性疼痛或不適，經休息或舌下含服硝酸甘油片5 min內可緩解；(2)不穩定性心絞痛(UA)：包括初發心絞痛、勞累惡化性心絞痛和靜息性心絞痛，且在入院前48 h內至少發作過1次心絞痛。(3)急性心肌梗死(AMI)：入選前24 h內心肌缺血癥狀持續30 min以上，休息或服用硝酸酯類藥物無緩解；心肌損傷標記物肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌鈣蛋白水平超過參考范圍上限的2倍；(4)對照組：同期有胸痛癥狀，但無心電圖缺血改變，且冠狀動脈造影檢查正常的住院患者。

1.2 病例排除標準 (1)感染、惡性腫瘤、嚴重肝腎功能不全；結締組織疾病、內分泌系統疾病及自身免疫性疾?。?2)其他心臟疾病，如心肌炎、心內膜炎、風濕性心臟??；(3)近3周內服用抗感染藥物、免疫抑制劑者。

1.3 臨床資料 選取2011年入住我院的SA患者27例(SA組)、UA患者28例(UA組)、AMI患者30例(AMI組)及同期冠狀動脈造影檢查正常的住院患者20例(對照組)為研究對象，均符合入選標準。除超敏C反應蛋白(hs-CRP)外，4組間其他指標差異均無統計學意義(P>0.05，見表1)。

表1 4組受檢者臨床資料比較Table 1 Comparison of the clinical data in four groups

注：SA=穩定性心絞痛，UA=不穩定性心絞痛，AMI=急性心肌梗死，ACEI=血管緊張素轉換酶抑制劑，ARB=血管緊張素受體拮抗劑，hs-CRP=超敏C反應蛋白；與SA組和對照組比較，*P<0.05；△為F值

1.4 方法

1.4.2 酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測細胞因子 對照組和SA組于入院后次日清晨空腹、UA組和AMI組于入院后即刻用真空抗凝試管抽取患者新鮮外周靜脈血4 ml，將全血以3 000 r/min離心15 min，取上層血清分裝后存于-80 ℃冰箱中待測。所有標本收集后采用ELISA法集中檢測血清中γ干擾素(IFN-γ)、白介素(IL)-2、IL-4和IL-10的表達水平，操作嚴格按說明書進行。

2 結果

2.1 EMPs水平比較 4組受檢者的血漿EMPs水平間差異有統計學意義(H=80.925，P=0.000)，其中UA組和AMI組血漿EMPs水平明顯高于對照組和SA組，SA組明顯高于對照組，AMI組明顯高于UA組，差異均有統計學意義(P<0.05，見表2)。

表2 4組受檢者血漿EMPs水平比較個/μl)Table 2 Comparison of EMPs level in four groups

注：與對照組和SA組比較，*P<0.05；與對照組比較，▲P<0.05；與UA組比較，△P<0.05

2.2 細胞因子水平比較 4組受檢者的血清IFN-γ和IL-2水平間差異均有統計學意義(P=0.000)，其中UA組和AMI組血清IFN-γ和IL-2水平明顯高于對照組和SA組，SA組血清IFN-γ和IL-2水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。4組受檢者的血清IL-4和IL-10水平間差異均無統計學意義(P>0.05，見表3)。

2.3 相關性分析 EMPs與IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10相關分析結果顯示，EMPs水平與IFN-γ和IL-2水平呈正相關(r=0.795，P=0.000；r=0.804，P=0.000)，與IL-4和IL-10水平無直線相關性(r=-0.088，P=0.374；r=-0.156，P=0.112)。

組別例數IFN-γIL-2IL-4IL-10對照組20 7 5±1 69 8±2 7 18 6±2 531 3±5 3SA組2710 6±2 4△12 6±2 9△18 4±2 130 3±3 6UA組2826 5±6 4?21 9±3 8?17 8±1 430 0±3 2AMI組3032 6±6 0?28 4±5 2?17 6±1 629 3±3 6H值83 84083 6091 6001 090P值0 0000 0000 1930 357

注：與對照組和SA組比較，*P<0.05；與對照組比較，△P<0.05

3 討論

不穩定冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂和血栓形成是ACS的主要發生機制。炎癥不僅在介導動脈粥樣硬化的發生和發展中起重要作用，而且是導致斑塊不穩定的關鍵因素。近年來研究表明，ACS患者存在明顯的Th1/Th2細胞及其相關細胞因子的表達失衡，主要以Th1分泌的細胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-12和IL-18等水平明顯增加為主，且與冠狀動脈病變嚴重程度相關，表明其對斑塊的不穩定發揮著重要作用[4-6]。本研究結果表明，AMI組和UA組患者IFN-γ和IL-2水平明顯高于對照組和SA組，而4組IL-4和IL-10水平間無明顯差異，提示Th1細胞因子的變化不僅與動脈粥樣硬化斑塊形成有關，還可能參與促進斑塊的不穩定。

作為內皮細胞激活或凋亡的產物，EMPs可真實地反映內皮細胞的功能和狀態。近年來，在多種具有顯著內皮功能受損和功能障礙的疾病如冠心病、高血壓、糖尿病、多發性硬化、血栓性血小板減少性紫癜、系統性紅斑狼瘡和先兆子癇等患者中均可觀察到血漿EMPs水平的明顯升高，因此EMPs可作為內皮功能障礙的標志物[3,7]。本研究結果顯示，SA患者血漿EMPs水平明顯高于對照組，表明EMPs可以反映冠心病患者內皮功能障礙的程度。而AMI組和UA組患者血漿EMPs水平明顯高于SA患者，表明EMPs可能與冠心病患者動脈粥樣硬化斑塊的穩定性相關。

本研究還顯示，冠心病患者血漿EMPs水平與Th1型細胞因子IFN-γ和IL-2呈正相關，而與Th2型細胞因子IL-4和IL-10無直線相關性。鑒于IFN-γ和IL-2水平的升高與冠狀動脈粥樣硬化斑塊的炎癥反應密切相關，因此，與IFN-γ和IL-2水平明顯相關的EMPs可能也在一定程度上反映了斑塊的炎癥反應程度。Th1/Th2失衡所導致的相關細胞因子分泌異常及其所導致的斑塊炎癥和不穩定，可能是導致EMPs生成增多的重要原因。

但更為重要的是，既往研究還表明，EMPs對炎癥、凝血過程及血管功能等均有一定影響，與心血管疾病的發生密切相關。EMPs不僅可以反映內皮的功能狀態，還是內皮功能障礙的標志物，EMPs從內皮細胞釋放的過程中攜帶了多種生物活性物質，可以作為細胞遞質的有效載體參與細胞信號的轉導和效能的發揮。從心肌梗死患者血循環中提取的EMPs可選擇性地損害內皮細胞一氧化氮(NO)信號轉導通路導致內皮舒張功能障礙。EMPs還參與了凝血的過程。EMPs表面含有血管性血友病因子，它可以促進血小板聚集，形成血栓[8]。EMPs還可以促進黏附分子的產生和促進炎性細胞與內皮細胞的結合[9]。此外，EMPs還具有調節免疫功能的作用[10]。本研究結果提示，EMPs不僅反映冠心病患者內皮功能障礙和斑塊炎癥反應的程度，可能還通過影響Th1/Th2細胞因子的分泌，參與對Th1/Th2細胞分化和功能的調控，參與斑塊的形成和炎癥過程，促進斑塊的不穩定。但EMPs是否參與了該過程以及其程度有待后續研究證實。

綜上所述，冠心病患者外周血中EMPs水平和Th1/Th2失衡密切相關，在一定程度上反映了內皮功能障礙、斑塊內炎癥反應程度和斑塊的穩定性。EMPs還可能通過調控Th1/Th2細胞分化和功能，參與冠狀動脈動脈粥樣硬化的免疫和炎癥反應過程，在斑塊形成和不穩定中具有重要的作用。

1 段鵬，謝英.膽固醇代謝失調與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的關系[J].中國全科醫學，2010，13(1)：207.

2 Guo M,Mao X,Ji Q,et al.Inhibition of IFN regulatory factor-1 down-regulate Th1 cell function in patients with acute coronary syndrome [J].J Clin Immunol,2010,30(2):241-252.

3 Boulanger CM,Leroyer AS,Amabile N,et al.Circulating endothelial microparticles:a new marker of vascular injury[J].Ann Cardiol Angeiol (Paris),2008,57(3):149-154.

4 羅蓉，周怡，李洪濤.老年高血壓病患者血清腫瘤壞死因子-α、白介素-6和C-反應蛋白水平的變化研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2012，20(1)：73.

5 Zhao Z,Wu Y,Cheng M,et al.Activation of Th17/Th1 and Th1,but not Th17,is associated with the acute cardiac event in patients with acute coronary syndrome [J].Atherosclerosis,2011,217(2):518-524.

6 茍連平，呂湛，秦儉，等.白介素-6和腫瘤壞死因子-α及白介素-10在急性冠脈綜合征中的作用 [J].中國全科醫學,2008,11(7):559-561.

7 Martinez MC,Tual-Chalot S,Leonetti D,et al.Microparticles:targets and tools in cardiovascular disease [J].Trends Pharmacol Sci,2011,32(11):659-665.

8 Lacroix R,Dignat-George F.Microparticles as a circulating source of procoagulant and fibrinolytic activities in the circulation [J].Thromb Res,2012,129(Suppl 2):S27-S29.

9 Chironi GN,Boulanger CM,Simon A,et al.Endothelial microparticles in diseases [J].Cell Tissue Res,2009,335(1):143-151.

10 Angelot F,Seilles E,Biichle S,et al.Endothelial cell-derived microparticles induce plasmacytoid dendritic cell maturation:potential implications in inflammatory diseases [J].Haematologica,2009,94(11):1502-1512.