酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)癌胚抗原定量測定試劑盒臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)

陳其忠（四川省涼山彝族自治州第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川西昌 615000）

癌胚抗原（CEA）是1965年Gold和Freedman首先從胎兒及結(jié)腸癌組織中發(fā)現(xiàn)的，故名癌胚抗原。CEA 相對(duì)分子質(zhì)量為22×103的多糖蛋白復(fù)合物，45%為蛋白質(zhì)。CEA 升高常見于結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌等［1］。臨床上多用該指標(biāo)作為大多數(shù)癌癥的診斷、鑒別診斷、預(yù)后判斷、放療、化療及手術(shù)療效觀察的指標(biāo)［2］。

目前，檢測血清CEA 的方法較多，由于ELISA 法有經(jīng)濟(jì)、簡便、速度快的特點(diǎn)，臨床上應(yīng)用較多。但各廠家生產(chǎn)的試劑盒能否滿足臨床要求，對(duì)此，本科室對(duì)北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)的ELISA 法CEA 定量檢測試劑盒進(jìn)行了臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)，獲得滿意結(jié)果。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

1.1.1 CEA 陽性及高濃度標(biāo)本均來自于2011年1月至2012年7月本院腫瘤科住院患者126例血清標(biāo)本，其中男72例，女54例；年齡39～72歲。腫瘤疾病構(gòu)成分別為小細(xì)胞肺癌47例，其中男29例，女18例，年齡為42～71歲；乳腺癌患者35例，均為女性，年齡39～68歲；結(jié)、直腸癌患者44例，其中男23例，女21例，年齡68～72歲。

1.1.2 參考值范圍測定標(biāo)本隨機(jī)抽取2012年1月至2012年5月于本院作健康體檢的人員200例，其中健康不吸煙者100例，男51例、女49例，年齡范圍20～75歲。有吸煙史的健康體檢者100例，其中男94例，女6例；年齡20～78歲。

1.2 試劑與儀器試劑由北京北方生物技術(shù)研究所提供，酶標(biāo)儀：KHB st－360型，洗板機(jī)：KHB st－36W 型。

1.3 方法

1.3.1 測定原理采用雙抗體夾心法，用純化的CEA 單克隆抗體包被的微孔板、CEA 校準(zhǔn)品或樣品及酶標(biāo)記的抗CEA 單克隆抗體進(jìn)行反應(yīng)，特異性地形成固相抗體－抗原－酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，加底物顯色后，樣品中CEA 的濃度與顯色的深淺呈正比。用酶標(biāo)儀檢測各孔的OD 值，根據(jù)校準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的含量。

1.3.2 反應(yīng)參數(shù)雙抗體夾心法，波長450nm（主）／630nm（副），反應(yīng)溫度37℃，試劑量酶結(jié)合物50μL，標(biāo)本50μL，顯色劑A、B、終止液各50μL，溫育時(shí)間30min。

1.4 方法

1.4.1 精密度試驗(yàn)根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）EP5－A2文件對(duì)于精密度評(píng)價(jià)的要求［3］，采用批內(nèi)和批間差異來確定。分別測定低值、中值和高值3種水平的CEA 濃度。每份樣品分別測定20次，計(jì)算均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）、CV（批內(nèi)）。每天測定1次，連續(xù)測定20d，計(jì)算x、s、CV（日間）。

1.4.2 回收試驗(yàn)取不同濃度混合血清（CEA 濃度為20.54、38.68、82.26ng／mL），分別加入不同濃度定值血清，使其濃度分別32.6、68.8、120.0ng／mL，每份樣品重復(fù)測定3次，取其均值。

1.4.3 線性試驗(yàn)根據(jù)CLSI（EP6.P）的評(píng)估方案，取濃度分別為5ng／mL和280ng／mL標(biāo)本各1份。然后將兩份標(biāo)本按1∶0、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、0∶1的比例混合，產(chǎn)生9個(gè)不同濃度的樣品，用本法從高到低和從低到高兩個(gè)濃度順序測定，將測定值（Y）與理論值（X）作線性回歸分析。

1.4.4 最低檢測限取濃度為5ng／mL 的質(zhì)控品作為樣品重復(fù)測定10次，求出s，以3s為最低檢測限。

1.4.5 參考值測定200例健康體檢者血清CEA 濃度，其中健康不吸煙者100例，健康有吸煙史100例。分別測定CEA濃度，計(jì)算其均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 精密度試驗(yàn)采用NCCLS EP5－A2文件對(duì)于精密度評(píng)價(jià)的要求，結(jié)果批內(nèi)CV分別為CV（低）4.54%、CV（中）4.38%、CV（高）4.98%，批間CV分別為CV（低）5.39%、CV（中）5.28%、CV（高）6.12%。

2.2 回收試驗(yàn)所得回收率分別為101.3%、103.5%、98.6%，平均回收率101.1%。

2.3 線性試驗(yàn)根據(jù)NCCLS（EP6.P）的評(píng)估方案，將9個(gè)不同濃度的樣品測定值（Y）與理論值（X）作線性回歸分析，結(jié)果：回歸方程為Y＝0.86X－1.27，r＝0.9987，線性可達(dá)320ng／mL。

2.4 最低檢測限以3s為最低檢測限，結(jié)果為2ng／mL。

2.5 參考值測定100例健康體檢者血清CEA＜5ng／mL的比例為100%。測定100例有吸煙史健康人，血清CEA＜10 ng／mL的比例為99.3%。故采用0～5ng／mL 作為健康人群參考值范圍。

3 討論

CEA 屬于非器官特異性腫瘤相關(guān)抗原，分泌CEA 的腫瘤大多位于空腔臟器，如胃腸道、呼吸道、泌尿道等。正常情況下CEA 經(jīng)胃腸道代謝，而腫瘤狀態(tài)時(shí)的CEA 則進(jìn)入血和淋巴循環(huán)，引起血清CEA 異常增高。使上述腫瘤患者的血清CEA 均有增高［4］。在臨床上，當(dāng)CEA＞60ng／mL 時(shí)，可見于結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌和肺癌。CEA 值升高，表明有病變殘存或進(jìn)展，如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA 濃度會(huì)明顯升高，大多顯示為腫瘤浸潤，其中70%為轉(zhuǎn)移性癌［5］。一般來說，手術(shù)切除后6周，CEA水平恢復(fù)正常，否則提示有殘存腫瘤，若CEA 濃度持續(xù)不斷增高，或其數(shù)值超過正常5～6倍者均提示預(yù)后不良。連續(xù)隨訪定量檢測血清CEA 含量，對(duì)腫瘤病情判斷更有意義［6］。CEA 作為一大類腫瘤標(biāo)志物，其特異性、敏感性愈來愈受到重視。因此，CEA 的檢測對(duì)癌癥高發(fā)人群的篩查、早期診斷、療效判斷及預(yù)后有著極其重要的意義［7］。

本次試驗(yàn)結(jié)果顯示。ELISA 法CEA 測定試劑盒，最低檢出限為2ng／mL，線性范圍可達(dá)320ng／mL（r＝0.9987），批內(nèi)CV＜5%，批間CV＜7%，平均回收率為101.1%，該試劑使用方便、穩(wěn)定、結(jié)果準(zhǔn)確。診斷試劑臨床質(zhì)量評(píng)價(jià)的要點(diǎn)是從臨床應(yīng)用角度考核檢驗(yàn)試劑的可靠性，以上數(shù)據(jù)充分說明，北京北方生物技術(shù)研究所的ELISA 法CEA 定量測定試劑完全能滿足臨床檢測要求。

［1］查人俊，黃孝邁，何長清，等.現(xiàn)代肺癌診斷與治療［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，1993.

［2］牛曉南，齊夢龍，趙鳳姿，等.CEA、β2－MG、SF、CT 對(duì)癌性胸水診斷價(jià)值的探討［J］.標(biāo)記免疫分析與臨床，1997，4（1）：25－27.

［3］NCCLS.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods：approved guideline－second edition.documentEP5－A2［M］.Wayne，PA，USA：NCCLS，2002：1897－1898.

［4］羅俊敏，張敬字.腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對(duì)肺癌的臨床價(jià)值探討［J］.中國綜合臨床，2004，20（9）：810－811.

［5］陳敏章.中華內(nèi)科學(xué)［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.

［6］金萍.檢測胸水CEA 的臨床意義［J］.實(shí)用癌癥雜志，1991，6（4）：262－263.

［7］王虹，張京嵐.胸水及血清中癌胚抗原水平監(jiān)測的臨床意義［J］.心肺血管病雜志，1999，18（4）：273－274.