可口革囊星蟲多糖的提取及含量測定

庹康秀，廖共山，胡仁統，雷丹青

（廣西醫科大學醫學科學實驗中心，廣西 南寧 530021）

可口革囊星蟲富含人體需要的多種氨基酸、微量元素和可調節大腦功能的牛磺酸，能增強機體的免疫功能，被譽為“海中冬蟲夏草”。我國多版藥典中記載了其食用和藥用價值。星蟲性寒，味甘、咸，具有滋陰降火、清肺補虛、活血強身及補腎養顏等功效[1－2]。牛磺酸有增強胰島素促進肝糖原轉化的作用，而糖原是體力腦力活動效率及持久力的物質保證，能改善心臟及血液循環功能，具有保肝作用。筆者用水提法從可口革囊星蟲中提取多糖，并用苯酚－硫酸比色法對其含量進行測定。現報道如下。

1 儀器與試藥

Lamb Da Bio 20型雙光束紫外分光光度計（美國PE公司）；Tomyr S －20 Ⅱ型高速冷凍離心機（Tomy Seiko Co．，Ltd．）；冰凍真空干燥儀（Nihon Freezer Co．，Ltd．）；DS － I型高速組織勻漿機（上海標本模型廠）；AG245型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。水飽和苯酚，濃硫酸、丙酮等均為分析純；可口革囊星蟲（購于南寧海鮮批發市場）。

2 方法與結果

2．1 可口革囊星蟲多糖的提取

取新鮮可口革囊星蟲，加入生理鹽水（1∶1），充分勻漿，置60 ℃ 水浴抽提 3 次，每次 0．5 h，間隔震蕩，離心（5 000 r／min）20 min，收集上清液，凍干備用。

2．2 溶液制備

精密稱取105℃下干燥至恒重的葡萄糖對照品20．2 mg，置200 mL容量瓶中，加水溶解，定量至刻度，得質量濃度為0．101 g／L的對照品溶液。精密稱取可口革囊星蟲凍干粉，置10 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解，稀釋至刻度，質量濃度為0．15 g／L，作為供試品溶液。量取0．5 mL苯酚，用蒸餾水溶解定容至10 mL，置棕色容量瓶中，得5%苯酚試液。

2．3 檢測波長選擇

精密吸取對照品溶液1 mL，置試管中，加5%苯酚試液0．5 mL，混勻，迅速加入 2．5 mL濃硫酸，振搖2 min，置沸水浴加 15 min，取出，置冰水中冷卻，以苯酚－硫酸溶液為空白，用紫外分光光度計在200～800 nm波長范圍掃描。結果對照品溶液在490 nm波長處均有最大吸收，故測定波長定為490 nm。

2．4 方法學考察

線性關系考察：參照文獻[3－4]方法并并略加改進。分別吸取對照品溶液 0．1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7 mL，分別以蒸餾水補至 1 mL，使得其質量濃度依次為 10．1，20．2，30．3，40．4，50．5，60．6，70．7 μg ／mL。依法顯色，于 490 nm 波長處測定吸光度，求得回歸方程 Y＝0．019 2 X＋0．106 3，r＝0．998 8(n＝7），式中 Y表示吸光度，X為葡萄糖質量濃度。結果表明，葡萄糖質量濃度在10．0～70．7 μg／mL范圍內與吸光度有良好的線性關系。標準曲線為1條不通過原點的直線，故供試品溶液測定用外標兩點法定量。

精密度試驗：精密吸取質量濃度為40．4 μg／mL的對照品溶液 5份，依法顯色后測定吸光度。結果的 RSD＝2．70%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：每隔30 min測定同一供試品溶液在不同時間的吸光度。結果的 RSD＝1．45%，表明供試品溶液顯色后至少在3 h內穩定。

加樣回收試驗：取6支試管，精密加入供試品溶液 0．1 mL，精密加入適量對照品溶液，最后補足1 mL，依法測定含量。結果見表 1。

表1 加樣回收試驗結果

2．5 樣品含量測定

準確吸取供試品溶液0．1 mL加水補至1 mL，按線性關系考察項下方法測定各提取物的吸光值。反應濃度（C反應）＝C樣品／D，多糖含量（%）＝C／C反應×100%，式中 C為通過吸光值由回歸方程計算出的葡萄糖質量濃度（μg／mL），D為多糖的稀釋倍數。結果多糖含量為15．85%。

3 討論

硫酸－苯酚法可使顯色后的多糖產生較好的吸收峰。本試驗用此法測定可口革囊星蟲中多糖含量，方法簡便、準確、穩定性好。糖類成分分子量大，進一步應用現代化學提取分析方法加強多糖的化學研究。可口革囊星蟲的開發，符合當前廣大人民群眾追求營養豐富、風味獨特、種類豐富、口味多樣的綠色健康飲食文化需要，是一種開發前景較好的小型海洋經濟動物[5]。可口革囊星蟲有較高的藥用價值，筆者將對可口革囊星蟲多糖作進一步的分離純化，對其活性成分和生物學活性的作用作深入研究，為開發可口革囊星蟲功能性食品，研究海洋生物的多糖藥物和保健功能提供資料。

[1]李德偉，孫艷紅，譚 敏，等．一種新興的高蛋白海產品——可口革囊星蟲[J]．水產科技情報，2008，35（ 4）：174-175．

[2]黃曉春，蘇秀榕，蘇月萍．沙蠶和星蟲的營養成分研究[J]．水產科學，2005，24（ 6）：10-11．

[3]鐘方曉，任海華，李 巖．多糖含量測定方法比較[J]．時珍國醫國藥，2007，18（8）：1 916-1 917．

[4]倪受東，嚴德江，徐先祥．大黃多糖的提取及含量測定 [J]．中國藥業，2007，16（13）：10-11．

[5]黃曉春，蘇秀榕，蘇月萍．沙蠶和星蟲的營養成分研究 [J]．水產科學，2006，24（6）：10-11．