瑞香狼毒炮制前后毒性變化作用的研究

王 星 王永明 田妮娜

(1.寧夏民政廳民康醫(yī)院，寧夏 銀川 750000；2.寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院，寧夏 銀川 750000；3.蘭州市食品藥品檢驗所，甘肅 蘭州 730000)

瑞香狼毒始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其辛、苦，平，有毒。具有散結(jié)逐水，破積殺蟲之功效[1]；瑞香狼毒是《回藥本草》中明確記載的，在寧夏主要分布于六盤山地帶，其根入藥，在回族民間，狼毒主要用于抗炎鎮(zhèn)痛、清熱燥濕、抗結(jié)核、治療疥癬、殺蟲等[2]，現(xiàn)代藥理研究表明瑞香狼毒具有抗腫瘤、抗HIV病毒等作用[3]。

李時珍在《本草綱目》[4]中寫到：狼毒“有大毒，觀其名，知其毒矣”，狼毒漿汁可刺激皮膚長水泡；誤食或過量，會刺激口腔咽喉，并可見惡心、嘔吐、腹痛等癥狀[5]。

所以為降低毒性，要將瑞香狼毒進行炮制后才入藥[2,6]。寧夏地區(qū)對其炮制方法以醋灸為主[6]，本實選用瑞香狼毒醋炙最佳工藝[7]，即炒制溫度150℃，炒制時間8min，醋用量25%的炮制方法對狼毒進行炮制，再進一步考察其炮制前后毒性的變化，為瑞香狼毒的進一步研究奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑

狼毒飲片，寧夏明德中藥飲片有限公司，產(chǎn)地寧夏六盤山。白醋，天津市利民調(diào)料有限公司。冰醋酸，天津市大茂化學試劑廠，批號2008820；二甲苯，北京五二九五二化工廠，批號：83090501；生理鹽水，廣東大冢制藥有限公司，批號：B121211。

1.2 主要儀器

美的電磁爐及不銹鋼鍋，中藥炮制實驗室；電子調(diào)溫電熱套，天津市泰斯特儀器有限公司；電子天平CP114，奧豪斯儀器（上海）有限公司制造；循環(huán)水式多用真空泵SHB-Ⅲ，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R206上海申生科技有限公司。

1.3 實驗動物

昆明種小鼠700只，體重18～22g，雌雄各半，由寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心提供。飼料、飲水、墊料均符合衛(wèi)生標準。

1.4 狼毒生品水煎液和醋炙狼毒水煎液的制備[8，9]

1.4.1 狼毒生品煎煮液的制備

稱取藥材瑞香狼毒生品325g，稍拍碎，煎煮2次，每次加蒸餾水10倍量（即蒸餾水3250mL），第一次煎煮時，需浸漬30min。每次煎煮30min，合并濾液，濃縮至 500mL，濃度為 0.65g·mL-1，4℃冷藏。

1.4.2 狼毒醋制品煎煮液的制備

1）炮制品的制備 稱取藥材瑞香狼毒生品314g，稍拍碎，加白醋（市售）78.5mL，浸漬 10min，使用電磁爐，炒制 8min(溫度為 150℃)，待醋被吸干，取出，自然晾干。

2）煎煮液的制備 具體方法參照1），最后得醋制品煎煮液濃度為 0.69g/mL，4℃冷藏。

1.5 毒性測定[10]

灌藥前小鼠禁食12h，不禁水，灌胃4h后常規(guī)飼養(yǎng)。預實驗取80只小鼠，分為2個藥品組，每組40只，雌雄各半，生品組一次以最大濃度（0.65g·mL-1），最大體積（0.4mL·10g-1）體重灌服，醋制組以最大濃度（0.69g·mL-1），最大體積（0.4mL·10g-1）體重灌服，各組給藥后連續(xù)觀察7d，觀察小鼠有無異常反應和死亡情況，其實驗結(jié)果如下表1。

表1 毒性測定實驗結(jié)果

因受藥物濃度和體積限制，求不出小鼠Dm(100%死亡率)，故LD50無法求出。

1.6 最大耐受量（是指動物能夠耐受的而不引起動物死亡的最高劑量）測定[10]

預實驗：取400只小鼠，雌雄各半，分為2個藥品組，各藥品組再分10個劑量組，每組20只，即生品組為①、②、③、④、⑤、⑥、⑦、⑧、⑨、⑩。醋制組同上分組。

表2 生品組給藥量及小鼠死亡情況

各藥品組中每組小鼠給藥量按照最大給藥濃度的0.9倍依次遞減，進行灌服。每組一日內(nèi)重復給藥2次，每次間隔4h。即生品組單次給藥量為：①0.4mL·10g-1×0.9×0.65g·mL-1，其他組依次類推。 醋制組單次給藥量為：①0.4mL·10g-1×0.9×0.69g·mL-1，其他組以此類推。 給藥后連續(xù)觀察14d，觀察小鼠死亡情況。給藥14d內(nèi)，其實驗結(jié)果見表2，醋制品實驗結(jié)果見表3。

表3 醋制品組給藥量及小鼠死亡情況

正式試驗：取120只小鼠，雌雄各半，分為2個藥品組，每個藥品組再分3個劑量組，每組20只。即生品組為①、②、③，醋制品組為：④、⑤、⑥。每組一日內(nèi)重復灌服給藥2次，每次間隔4小時。給藥后連續(xù)觀察7d，觀察小鼠死亡情況。其實驗結(jié)果見表4。

表4 瑞香狼毒醋制品及生品最大耐受量

由以上實驗結(jié)果可知，狼毒生品最大耐受量為19.5g·kg-1，狼毒炮制品最大耐受量為28.98g·kg-1，其毒性較生品狼毒有所降低，即用狼毒最佳炮制工藝可以降低生品狼毒的毒性。

2 討論

瑞香狼毒始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[11]，其云:“狼毒，味辛平。”其性味描述未提到瑞香狼毒的毒性，直至漢末的《名醫(yī)別錄》[12]中描述：“性平，有大毒”，瑞香狼毒的毒性才被后世多本本草名著所記錄。現(xiàn)代《中藥大辭典》[1]記載瑞香狼毒的性味為：“味苦辛，性平，有大毒”；《寧夏回藥志》對其描述為：“狼毒的毒性較大”，但對其毒性大小沒有具體數(shù)字指標。本實驗通過對寧夏產(chǎn)瑞香狼毒炮制前后的毒性變化進行研究，發(fā)現(xiàn)：生品組一次以最大濃度（0.65g·mL-1），醋制組以最大濃度（0.69g·mL-1），都以最大體積（0.4mL·10g-1）灌服，7 天后觀察小鼠反應情況，生品組40只小鼠只有12只小鼠死亡，炮制品組有6只小鼠死亡，因此受藥物濃度和體積限制，無法得到小鼠Dm(100%死亡率)，故LD50無法求出，實驗結(jié)果還說明：用醋炙優(yōu)化法進行炮制后，瑞香狼毒的毒性有所降低。《本草蒙筌》有“用醋注肝經(jīng)，且資住痛”之說，醋味酸、澀，入肝經(jīng)，具有收斂、散瘀、止痛、解毒等功效。瑞香狼毒經(jīng)醋炙后，其生物堿類成分與醋中酸性成分結(jié)合，可形成水溶性的鹽從而降低毒性，使用藥安全性提高。因在生品組和炮制品組中，40只小鼠中均有數(shù)目不等的死亡，故用最大耐受量（MTD）來考察瑞香狼毒的毒性大小。經(jīng)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，瑞香狼毒生品最大耐受量為19.5g·kg-1，瑞香狼毒炮制品最大耐受量為28.98g·kg-1，炮制后其毒性有所降低。

由以上內(nèi)容可以得出結(jié)論：寧夏回族民間的醋炙工藝炮制狼毒可降低狼毒的毒性，這為進一步深入的研究寧夏地區(qū)產(chǎn)瑞香狼毒藥材，進一步拓寬瑞香狼毒的市場開發(fā)奠定了一定基礎。

［1］江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典（下冊）[M].上海：上海人民出版社，1977，1898.

［2］刑世瑞.寧夏回藥志（下冊）[M].寧夏:寧夏人民出版社，1998，273.

［3］張美妮，劉玉璽，王明正.瑞香狼毒研究進展[J].山西醫(yī)藥雜質(zhì)，2000，29（3）：213-215.

［4］李時珍.本草綱目(精華本)[M].北京:科學出版社，1998(43):192-193.

［5］李秀英，主編.有毒中藥鑒別、炮制與保管[M].北京:科學技術(shù)文獻出版社，1996:76-79.

［6］李志明.寧夏藥材炮制規(guī)范[M].寧夏:寧夏人民出版社，1981:450-451.

［7］周麗，王永明，宋玉霞，等.回藥瑞香狼毒最佳炮制的工藝研究[J].寧夏醫(yī)學雜志，2011，33(12)：1145.

［8］李怡文，鐘贛生，柳海艷，等.海藻、甘草配伍組合及其復方海藻玉壺湯的急性毒性實驗比較研究[J].科技導報，2012，30（34）：19-20.

［9］龔千鋒，周道根，張的鳳，等.馬錢子不同炮制品急性毒性實驗研究[J].南昌:江西中醫(yī)學院學報，2007，19(3):47-48.

［10］陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993，118.

［11］徐樹楠，牛兵占，編著.神農(nóng)本草經(jīng)[M].石家莊：河北科學技術(shù)出版社，1996：131.

［12］梁·陶弘景.名醫(yī)別錄[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986:23.