QuEChERS-高效液相色譜-串聯質譜法測定普洱茶中3種殺蟲劑殘留

王蕊 李麗鑫 萬靜 許秦 代佳和 朱強強

摘 要：研究建立一種基于QuEChERS的高效液相色譜-串聯質譜法檢驗50批普洱茶中茚蟲威、內吸磷、克百威含量，了解普洱茶中3種殺蟲劑殘留現狀。以乙腈-醋酸為提取液，PSA、C18、GCB、MgSO4為凈化劑，在電噴霧離子源正離子模式下，使用多反應監測模式檢測目標物。結果顯示普洱茶中茚蟲威、內吸磷在10～500 ng·mL-1，克百威在0.5～50.0 ng·mL-1具有良好的線性（r≥0.999）；檢出限為0.010 9～0.019 2 μg·kg-1；定量限為0.036 4～0.063 9 μg·kg-1。在5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1 3個加標濃度的回收率為91.26%～105.66%，RSD為0.67%～2.58%。該方法簡便、高效、靈敏，適合普洱茶中茚蟲威、內吸磷、克百威的定量檢測分析。

關鍵詞：高效液相色譜-串聯質譜法；測定；普洱茶；殺蟲劑

Abstract： Study and establish a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method based on QuEChERS to detect the content of indefencarb， phosphorus， and carbofuran in 50 batches of Puer tea， and understand the current status of three pesticide residues in Puer tea. With acetonitrile acetic acid as the extraction solution， PSA， C18， GCB， MgSO4 as the purification agent， the target substance was detected by multi reaction monitoring mode in the electric spray ion source and positive ion mode. The results showed that the content of indocarb and phosphorus in Puer tea showed good linearity （r≥0.999） at 10～500 ng·mL-1， and carbofuran at 0.5～50.0 ng·mL-1; the detection limit is 0.010 9～0.019 2 μg·kg-1； the quantitative limit is 0.036 4～0.063 9 μg·kg-1. The recovery rates at 3 spiked concentrations of 5 ng·mL-1， 10 ng·mL-1and 50 ng·mL-1 were 91.26%～105.66%， with RSD ranging were 0.67%～2.58%. This method is simple， efficient， and sensitive， suitable for the quantitative detection and analysis of indefencarb， phosphorus， and carbofuran in Puer tea.

Keywords： high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method; determination; Puer tea; insecticide

普洱茶是云南特色茶葉，主要產自西雙版納、臨滄、普洱等地區，本文通過查閱文獻并結合茶農在種植過程中常用的農藥種類，參考以往檢驗數據，以找出問題、監控風險點為目的，選取3種常見的殺蟲劑內吸磷、茚蟲威、克百威進行檢測。目前，農藥殘留檢測技術主要有氣相色譜法、液相色譜法、氣質聯用法和液質譜聯用法。其中，液相色譜–串聯質譜法應用廣泛、發展較為完善[1-2]。在檢測分析中，樣品凈化是較為關鍵的一個環節，目的是對目標物最大限度地提取，將干擾降到最低、誤差降到最小，樣品的凈化效果直接影響到檢測結果的可靠性[3]。QuEChERS方法是近幾年發展起來的一種樣品前處理方法，具有便捷、高效及可靠安全等優勢[4]。本試驗將高效液相色譜-串聯質譜法與前處理技術QuEChERS方法相結合，建立了一種簡便、高效、靈敏的分析方法應用于普洱茶的檢測。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

普洱茶：普洱50批，市售；茚蟲威、內吸磷、克百威標準溶液（100 μg·mL-1）：農業農村部環境保護科研監測所；乙腈、甲醇、甲酸，色譜純；醋酸、PSA、C18、GCB，分析純；QuEChERS AOAC萃取鹽提取包（組分：6 g無水MgSO4、1.5 g醋酸鈉）。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜儀（型號：4500QTRAP/LC/MS/MS，配ESI離子源）；電子天平（型號：AL104）；振蕩器（型號：Multi Reax）；高性能通用臺式離心機（型號：ST16）。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理

稱取2 g茶試樣（粉碎均勻）于50 mL塑料離心管中，加入10 mL水，旋渦振蕩，靜置30 min。加入20 mL乙腈-醋酸溶液（體積比99∶1）和一個陶瓷均質子，渦旋振蕩1 min，在具塞離心管冰浴條件下加入QuEChERS AOAC萃取鹽提取包并劇烈振蕩。待溫度降低后，渦旋振蕩2 min，再以4 200 r·min-1的轉速離心5 min，鹽析分層待凈化。

移取上清液8 mL加到內含PSA 400 mg、C18 400 mg、GCB 200 mg、MgSO4 1 200 mg的塑料離心管中，渦旋振蕩1 min，4 200 r·min-1離心5 min，靜置待分層，移取1 mL上清液過0.22 μm微孔濾膜，待測。

1.3.2 標準系列溶液配制

分別移取茚蟲威、內吸磷標準溶液（100 μg·mL-1）0.5 mL至5 mL容量瓶中，乙腈定容，制成10 μg·mL-1的標準中間溶液。移取克百威標準溶液（100 μg·mL-1）0.05 mL至5 mL容量瓶中，乙腈定容，制成1 μg·mL-1的標準中間溶液。用乙腈稀釋標準中間溶液，分別制得茚蟲威、內吸磷濃度為10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1、400 ng·mL-1、500 ng·mL-1及克百威濃度為0.5 ng·mL-1、1.0 ng·mL-1、2.0 ng·mL-1、4.0 ng·mL-1、8.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1的標準系列工作溶液。

1.3.3 液相色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC? HCC T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相A為甲醇，流動相B為0.1%甲酸水；柱溫：40 ℃；流速：0.2 mL·min-1；進樣體積：3 μL。梯度洗脫程序見表1。

1.3.4 質譜條件

采用AB SCIEX公司的4500QTRAP質譜系統，在電噴霧離子源正離子模式下，使用多反應監測模式檢測目標物。離子源溫度為550.0 ℃，離子源電壓為5.5 kV，氣簾氣30 psi，噴霧氣（Gas1）50 psi，噴霧氣（Gas2）50 psi。優化得到各目標物質譜條件見表2。

2 結果與分析

2.1 提取和凈化條件的選擇

乙腈與水部分互溶，加入萃取鹽包后，鹽析、分層和除雜效果明顯，因此采用乙腈-醋酸作為提取溶劑。茶葉中含有的脂肪酸、生物堿、色素及酚類化合物使得凈化過程具有一定的難度，易對色譜柱產生污染，采用PSA 400 mg+C18 400 mg+GCB

200 mg+MgSO4 1 200 mg進行凈化[5]。該凈化劑結合了常用凈化劑的成分，疏水性較強，C18能有效去除脂肪酸和色素；GCB能有效去除色素，排除干擾；PSA能有效去除脂肪酸，對色素也有一定的去除能力，同時對農藥殘留吸附作用較小，且運用分散固相萃取，操作簡便快速。

2.2 線性關系、檢出限、定量限

對標準系列工作溶液進行測定，以各標準品質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行回歸，得到相關系數和回歸方程。檢測限以離子對信噪比≥3考察，定量限以離子對信噪比≥10考察，試驗結果見表3。茚蟲威、內吸磷在10～500 ng·mL-1，克百威在0.5～50 ng·mL-1線性關系良好，相關系數均大于0.999，檢出限為0.010 9～0.019 2 μg·kg-1，定量限為0.036 4～0.063 9 μg·kg-1，可以滿足定性、定量分析的需要。

2.3 回收率與精密度

稱取2 g陰性茶試樣進行加標試驗，在茶試樣中分別添加5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1 3個濃度水平的茚蟲威、內吸磷、克百威標準溶液，每個水平進行6次平行試驗，試驗結果見表4。茚蟲威、內吸磷、克百威在3個加標水平下的平均回收率為91.26%～105.66%，RSD為0.67%～2.58%。符合《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）的規定，提示本方法加標回收率和精密度好，能準確測定茶葉中茚蟲威、內吸磷、克百威含量。

2.4 樣品測定

對50批市售普洱茶中茚蟲威、內吸磷、克百威的含量進行測定，結果顯示在50個樣品中，茚蟲威、內吸磷均未檢出，有2批次樣品檢出克百威，檢出率為4%，其含量分別為0.014 mg·kg-1、0.013 mg·kg-1。《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規定茶葉中茚蟲威、內吸磷、克百威的限量值分別為5 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1，本次檢測的50批普洱茶樣品中3種殺蟲劑含量均符合國家標準要求。

3 結論

本文建立了一種基于QuEChERS的高效液相色譜-串聯質譜法用于同時檢測普洱茶中3種殺蟲劑，該方法簡便、高效、靈敏，適合普洱茶中茚蟲威、內吸磷、克百威農藥殘留的快速檢測及定量分析。此外，該方法也可為茶葉制品及其他茶葉農藥殘留檢測提供一定的參考。檢測的50批普洱茶樣品中3種殺蟲劑含量均符合國家標準要求，提示普洱茶中3種殺蟲劑殘留情況較為樂觀。這與近年來云南建立生態茶園息息相關，為了提高普洱茶原料的品質，近年來云南省政府及企業投入大量資金改造有機生態茶園，茶園病蟲害防控趨向于更安全、可靠、綠色。

參考文獻

[1]文洋，譚君，譚斌，等.茶葉中農藥殘留檢測方法研究進展[J].食品安全質量檢測學報，2017，8（3）：826-831.

[2]徐娟，陳捷，葉弘毅，等.QuEChERS提取與高效液相色譜-電噴霧電離串聯質譜聯用法檢測茶葉中的19種農藥殘留[J].分析測試學報，2011，30（9）：990-995.

[3]洪萍，李峰，徐陸妹，等.QuEChERS-氣相色譜法快速檢測茶葉中擬除蟲菊酷農藥殘留的方法研究[J].中國衛生檢驗雜志，2009，19（2）：263-265.

[4]張媛媛，張卓，陳忠正，等.QuEChERS方法在茶葉農藥殘留檢測中的應用研究進展[J].食品安全質量檢測學報，2014，5（9）：2711-2716.

[5]劉妍慧，于常紅，劉巖，等.基質固相分散萃取-高效液相色譜串聯質譜法（HPLC-MS-MS）同時測定茶葉中11種農藥的殘留量[J].茶葉科學，2014（3）：271-278.