2012年HIV篩查實驗室室內質量控制分析的評價

黃新輝，鄒小健

(豐城市人民醫院檢驗科,江西 豐城 331100)

艾滋病 (Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)的流行給人類健康和經濟社會發展帶來了嚴重的影響，要了解和掌握AIDS的感染情況，關鍵是醫院實驗室的檢測技術，而HIV抗體的檢測是當前AIDS診斷中最常用的方法，因此，提高實驗室檢測的準確性，減少假陽性和假陰性反應的發生，對診斷AIDS十分重要。為了更嚴謹準確地出示檢測報告，筆者對本室進行了 ELISA法檢測HIV抗體的室內質量控制，現將質控過程分析報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 HIV抗體診斷試劑盒：上海科華生物有限公司生產ELISA法HIV抗體檢測試劑，試劑盒均在有效期內使用；HIV抗體質控血清購自衛生部臨床檢驗中心,規格為8NCU/ml抗-HIV質控血清。

質控標準血清：包括內部對照質控血清和外部對照質控血清。內部對照質控血清為試劑盒內提供的陰性和陽性對照，內部對照血清是質量控制的基礎。外部對照質控血清是為了監控HIV抗體檢測的穩定性和重復性以及試劑盒批間差異而由實驗室設置的一個弱陽性對照血清，以試劑盒臨界值(cut-off)的2～3倍為宜。用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體高濃度血清后得到，按每次使用量配制分裝而成，-20℃冷凍保存。不可反復凍融，一旦融化后應該存放在2～8℃，一周內使用完。

1.2 操作方法 HIV抗體檢測操作嚴格按照說明書及本室SOP標準文件的操作規程進行操作。加樣時標本從冰箱取出時必須平衡到室溫后才能加樣，每板設陰性對照各2孔、陽性對照各3孔，外部對照1孔，放入恒溫箱37℃孵育30min，孵育后洗板6次，每次洗板浸泡1min，并按我室洗板機SOP標準文件規定進行洗滌。洗板后加酶標抗體，再37℃孵育30min，按上法洗板，再加底物液，孵育10min加終止液，用酶標儀雙波長(450nm、630nm)比色，計算測定結果。

在最佳條件下，對同一批質控血清檢測20次，獲得1組S/CO值，求其均數(x)和標準差(s)，將均值和標準差分別在Levey-Jennings質控圖的框架圖中標示出來，繪制質控圖。然后，在常規條件下，對同一批質控品繪制質控圖，以最佳條件下的S/CO值為縱坐標，日期為橫坐標，分別用紅筆畫出x±2s警告線，用藍筆畫出x±3s失控線，作出質控圖框架。以后每日將質控血清隨標本一起測定，將質控血清的S/CO值在質控圖上找出相應的點，將點與點用線連接，每月作一張質控圖，反映日常工作質量。

1.3 檢測儀器 Biocell 2010型酶標儀：根據本室標準SOP文件的要求，定期進行期間檢查，并詳細填寫期間檢查記錄。普朗全自動洗板機：嚴格按照本室標準SOP操作規程進行自校準，有自校準報告。電熱恒溫培養箱(上海電工醫療器械廠)：調節并控制溫度在37℃左右。微量加樣器：均經江西省南昌市計量所檢定合格，并在檢定周期內使用。

1.4統計分析 數據分析均采用SPSS11.5軟件進行統計分析。

2 結果

2.1 2012年配制的外部對照質控血清在最佳條件下連續20次檢測HIV抗體結果，其中陰性對照平均值0.098，陽性對照平均值2.598，獲得1組S/CO值，其均數(x)=2.011，標準差 s=0.113，CV＝5.6%。

2.2 2012年1月至2012年12月本室每月質控結果見表1。

表1 2012年1月至2012年12月本室每月質控結果

從表1可見，本實驗室在本年度本批次的質控品及質控結果CV值均小于10%，表明本批次質控血清的穩定性和靈敏度較好，均符合抗-HIV診斷試劑盒變異系數的可行限要求。

3 討論

自從美國休哈特博士首創質量控制圖以來，經過幾十年的發展應用，已成為廣義質量管理和評價日常檢測數據是否正確的有效工具，也是最簡單、最有效的統計技術之一[1,2]。開展實驗室質控是保證實驗室分析結果準確性的必要基礎，也是保證實驗間有可比性的關鍵。在抗-HIV篩查實驗室中觀察臨界值對照的動態變化是監控每一次檢驗和各批次檢驗之間變化的一種方法，檢驗過程中十分微小的變化都可以引起人們的注意。如臨界值對照偏移過度，比如臨界值向負值偏移，常常提示同批檢驗樣品有可能出現假陰性[3,4]。

室內質量控制是實驗室內部對所有影響檢測質量的各個環節進行系統控制，目的是讓檢驗結果更準確可靠。本室2012年所開展的HIV室內質控工作中，用ELISA法檢測HIV抗體，每次實驗外部對照質控血清的S/CO值均在Levey-Jennings質控規定范圍內波動，表明實驗條件正常，實驗數據可靠[5,6]。如果外部對照質控血清的S/CO值超出Levey-Jennings質控失控規則范圍，稱為失控，則本次實驗結果不能被接受，應及時分析找出失控的原因，及時糾正，對檢驗過程進行回顧性分析，查找原因后給予糾正并重復測試，并最后作好試驗記錄。按HIV抗體檢測的要求把臨界值上下10%的范圍定為灰區，對灰區標本要進行復測，以減少假陰性和假陽性結果的出現，并對其三個月后進行跟蹤復測。引起室內質控失控的原因很多[7,8]。如換用新批號診斷試劑、儀器設備未經校定，加樣量不準確，檢驗人員未經培訓，質控血清反復凍融等，要及時查找原因予以糾正[9]。為了提高艾滋病的檢測水平，購買質量可靠的 試劑材料也是很重要的，同時實驗人員要加強工作責任心，實驗過程中要嚴格按照操作規程，加入血液標本時要避免混入纖維蛋白原，放人低溫冰箱的血清不能反復凍融，灰區的標本要進行復檢，能做到以上這幾點，才能避免假陽性和假陰性的發生，使艾滋病的檢測工作能夠準確、有效地開展[10]。

室內質控是對檢驗結果的即時性評價，通過對室內質控結果的連續觀察，監測實驗室檢驗結果的精密性[11]。室內質控是質量保證的基礎，沒有完善的室內質控措施就談不上質量保證，即使在室間質評中取得很好的成績也不能說明實驗室檢驗結果的可靠性。因此，實驗室的質量保證工作，應首先從室內質控抓起，持之以恒，不斷觀察、分析和解決實驗中的質量問題，才能使檢驗工作的質量得到穩步提高[5,12]。

總之，要解決我們在質控考核中所發現的問題，關鍵在于檢測技術人員在檢測中應具有高度責任心，認真對待每一環節，嚴格按照操作規程進行操作，就能避免類似問題的出現，把艾滋病檢測工作做得更好。

[1]韋雪芳.ELISA檢測HIV抗體室內質控血清的制備[J].檢驗醫學與臨床,2011,08(20):2527-2528.

[2]張鳳蘭.艾滋病抗體初篩室內質控分析[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(3):364-365.

[3]王莉,張素琴,李靜.ELISA法檢測抗-HIV質控血清的制備和應用[J].中國誤診學雜志,2009,9(18):4371-4372.

[4]胡靜云,陳善昌.ELISA檢測HIV抗體室內質控血清的制備與應用[J].實驗與檢驗醫學,2009,27(5):553,568.

[5]楊春暉,張容,鄭鵬,等.影響抗-HIV弱陽性質控血清穩定性的幾種因素探討[J].中國輸血雜志,2008,21(6):441-443.

[6]馬春濤,張桂云,裴麗健,等.山西某縣HIV/HCV感染調查的實驗室質量控制[J].國際病毒學雜志,2011,18(2):44-47.

[7]柏居林,何宏周.自制人類免疫缺陷病毒抗體等質控血清及室內質控方法建立研究[J].檢驗醫學與臨床,2010,7(3):230-232.

[8]楊紅梅,魏勝男.應用"雙質控法"加強和完善"即刻法"室內質控的探討[J].中國輸血雜志,2009,22(11):917-918.

[9]王玲玲,汪全民,董玲鳳.探討"即刻法"在ELISA室內質控應用中的局限性[J].實驗與檢驗醫學,2008,26(6):703-704.

[10]宋悅紅.HIV檢測中建立Levey-Jennings質控圖與"即刻法"質控的應用比較[J].現代預防醫學,2008,35(9):1702-1703,1712.

[11]胡繼征,陸典瑞,盧岑,等.7種抗-HIV ELISA試劑盒對質控血清參考品的反應結果分析[J].中國輸血雜志,2007,20(2):132-133.

[12]萬德勝,陳萬寧,廖小蓮,等.三種初篩方法檢測HIV抗體的結果比較及評估[J].熱帶醫學雜志,2007,7(9):869-870,881.